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1.
[目的]探讨运用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性分析(IZCR-RFLP)和聚合酶链反应一单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。[方法]选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增,并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCF,分析。[结果]运用通用引物可以扩增出13属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因Hpa Ⅱ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱,利于进行细菌属的鉴定。不同种属食源性感染常见致病菌SSCF,图谱变异性更大,不利于进行种属间鉴别。对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明,不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱,SSCP图谱的变异性较大,这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别。[结论]PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力。 相似文献
2.
目的 研究含有登革病毒Ⅱ型NS1基因的重组质粒肌内注射小鼠后在其体内诱导的细胞和体液免疫。方法 用含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2 NS1于小鼠胫前肌注射并加强免疫 2次。然后定期处死 ,采集血液标本以及小鼠脾细胞 ,检测小鼠的体液和细胞免疫。结果 在末次免疫后 4周检测到小鼠抗NS1抗体 ,并且检测到小鼠CD4 、CD8 亚群的变化。结论 含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2-NS1免疫小鼠后 ,可以诱导小鼠产生针对NS1的稳定特异性体液、细胞免疫 相似文献
3.
登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位,并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体随机12肽库,将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导,通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比,初步确定E蛋白的抗原表位;用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验,确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS,其展示肽与DEN2E蛋白390~398 AA序列有3~5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390~399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应,并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390~398AA)线性序列为免疫优势表位,其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。 相似文献
4.
登革病毒2型NS1蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果观察 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 以登革病毒 2型 (denguevirus2 ,DV2 )非结构蛋白 (non structrulprotein 1,NS1)为靶基因 ,构建DV2 NS1的候选DNA疫苗 ;并探讨其在小鼠体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的作用。方法 将登革病毒 2型NS1 NS2a基因片段克隆至含AG强启动子的真核表达载体pCXN2上 ,构建成重组体pCXN2 NS1 NS2a。在体外将重组质粒转染Cos 7细胞 ,间接免疫荧光检测其在真核细胞中的表达。大量提取空质粒和重组质粒 ,进行动物免疫实验。结果 重组质粒可在真核细胞中有效地表达NS1蛋白。免疫接种小鼠后可诱发机体产生针对NS1蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫。末次免疫前已有抗体产生 ,4周后达高峰。抗体依赖补体介导的溶细胞作用 (antibody dependentcomple ment mediatedcytolysis,ADCC)试验结果显示产生的抗体在体外具有特异的杀细胞作用。淋巴细胞增殖实验结果显示 ,实验组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异有显著性。流式细胞计数仪(FACS)检测DNA免疫鼠CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞变化情况 ,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比 ,CD4 + 、CD8+ 细胞水平有较大升高 (P <0 .0 1)。动物保护性实验结果显示 ,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时 ,有 6 6 .6 %的免疫鼠受到保护。结论 NS1 NS2a基因重组质粒免疫小鼠可以诱 相似文献
5.
SARS患者血清IL-8、IL-12和TGF-β1的检测及意义 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 :探讨SARS患者血清IL 8、IL 12和TGF β1在SARS冠状病毒感染致病中的作用。 方法 :应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 2 8例SARS冠状病毒感染患者双份血清IL 8、IL 12和TGF β1的水平。实验数据采用两样本均数t检验法。结果 :2 8例SARS冠状病毒感染者血清IL 8水平、病程第 2周IL 12水平比正常健康对照组明显降低 (P <0 0 5 )。SARS冠状病毒感染者血清TGF β1水平与对照组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。 结论 :IL 8和IL 12在SARS冠状病毒的致病与免疫过程中可能起降低细胞免疫功能作用 相似文献
6.
目的观察低浓度罗哌卡因颈丛麻醉在锁骨骨折手术中的应用.方法选颈丛阻滞麻醉,在c4横突处穿刺,给予0.25%罗哌卡因,分别在深丛7mL、浅丛15mL,共22mL注入.并与同样方法注入0.15%地卡因和1.00%利多卡因混合液22mL(加1200000肾上腺素)作比较.结果麻醉效果,观察组有效率95.6%,对照组有效率95.4%,二组无明显差异.副作用,观察组明显少于对照组,有显著差异(P<0.05).结论低浓度罗哌卡因进行颈丛麻醉效果好,副作用轻,与其他方法相比,该方法较好. 相似文献
8.
目的 研究电话随访对无托槽隐形矫治患者正畸疼痛和焦虑的影响。方法 选取2021年1—12月于西安交通大学口腔医院正畸科就诊的需行无托槽隐形矫治初诊患者120例,随机分为关怀电话组、普通电话组和对照组,每组40例。佩戴矫治器后6 h进行随访,关怀电话组电话随访内容为表达关心,并对患者遇到的问题提供相应的指导;普通电话组仅对患者在这项研究中提供的帮助表示感谢。对照组不进行电话随访。佩戴矫治器后6 h及1、2、3、4、5、6、7 d,患者采用视觉模拟评分量表(visual analogue scale,VAS)和广泛性焦虑量表(generalized anxiety disorder,GAD-7)对疼痛和焦虑程度进行评分。结果 120例患者失访4例,其中关怀电话组和普通电话组各1例、对照组2例,失访率为3.3%。在佩戴矫治器后6 h及1、2、3 d,关怀电话组和普通电话组患者VAS评分与对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05);在佩戴矫治器后1、2、3、4、5 d,关怀电话组和普通电话组患者GAD-7评分与对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05);而关怀电话组... 相似文献
9.
10.
目的:探讨牛视网膜提取物对人-鼠杂合细胞抗体产生的影响。方法:在PRMI1640完全培养基(CM)中加入20mg/L牛视网膜提取蛋白,配成牛视网膜培养基(BREM)。用MTT测定、细胞克隆技术、夹心ELISA方法和染色体分析,比较人-鼠杂合细胞G12在两种培养条件下的细胞活力、克隆效率、人IgM分泌和人染色体阳性细胞比率之间的差异。结果:用BREM培养的G12细胞活力高于用CM培养(P<005)。用BREM培养的G12细胞克隆中分泌人IgM者占12/24,用CM培养的克隆只占2/47。G12细胞传代培养3个月后,用BREM培养的上清人IgM水平A490为0335±0050,用CM培养的上清为0070±0027(P<005)。前者含人染色体阳性的细胞为20%,后者25%,两者间没有差异(P>005)。结论:添加牛视网膜提取物的培养基可以提高人-鼠杂合细胞的活力和人IgM抗体的分泌能力。维持人源性IgM持续分泌的条件不仅取决于杂合细胞中人染色体的存在和稳定,还有其它未知因素在起作用,牛视网提取蛋白可以提供这方面的需要。 相似文献