白细胞介素-12增强HBsAg疫苗免疫应答的实验研究

目的研究白细胞介素-12（IL-12）对乙肝病毒表面抗原（HBsAg）疫苗的免疫增强作用。方法选用C57BL／6J小鼠,使用不同剂量的重组鼠白细胞介素-12（rmlL-12）和HBsAg联合给药,检测给药前后血清中IFN-1,的浓度以及给药后小鼠脾脏淋巴细胞对HBsAg刺激的免疫应答能力的变化。结果高剂量HBsAg和高剂量rmIL-12联合两次给药后,血清中IFN-γ浓度明显高于单独给HBsAg组或rmIL-12组（P〈0．05）;高剂量联合给药组的小鼠脾脏淋巴细胞经HBsAg体外刺激后诱生IFN-γ的能力明显高于单独给HBsAg组或rmlL-12组（P〈0．05）,流式细胞检测分析表明IFN-γ主要来源于CD4^＋和CD8^＋的T细胞。结论rmlL-12能快速明显地提高C57BL／6J小鼠对HBsAg的特异性免疫应答能力,为IL-12和HBsAg在临床上联合治疗慢性乙肝感染提供了理论依据。     

重组人白细胞介素12对健康人外周血单个核细胞产生γ干扰素影响的研究

目的建立重组人白细胞介素12(rhIL-12)的生物活性检测方法,观察rhIL-12诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC)产生γ干扰素(IFN-γ)的水平与剂量和时间之间的关系,揭示其变化规律。方法rhIL-12供试品刺激健康人PBMC分泌IFN-γ,经国际标准品校正,建立rhIL-12生物活性测定方法。以1 ng/mL浓度rhIL-12诱导健康人PBMC,分别于24、48、72、96和120 h 5个时间点用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清的IFN-γ水平。测定0.1、0.5和2.5 ng/mL 3个浓度rhIL-12诱导人PBMC 72 h后培养上清的IFN-γ水平,用Prism 5.0统计软件的重复测量方差分析法对所得数据进行统计学处理。结果rhIL-12供试品的生物活性曲线呈典型S型,IFN-γ含量为最大浓度一半时的供试品浓度(ED50)为(1.008±0.238)ng/mL,供试品rhIL-12效价为7 938 IU/mL。测定1ng/mL浓度rhIL-12刺激健康人PBMC后5个时间点培养上清中IFN-γ显示,不同个体高峰出现时间有所不同,在高峰出现前均呈现递增趋势。高、中、低3个浓度r...     

HBsAg联合rhIL-12对慢性乙型肝炎患者PBMC诱生IFN-γ的作用

目的确认重组人白细胞介素12（rhIL-12）联合乙型肝炎表面抗原（HBsAg）可增强慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）对HBsAg产生特异性细胞免疫应答,探讨rhIL-12联合HBsAg作为治疗型乙型肝炎疫苗的应用前景。方法取8名正常人和16例慢性乙型肝炎患者的PBMC,分别用不同浓度的HBsAg、rhIL-12单独体外刺激,再用HBsAg联合rhIL-12（0．01、0．1和1．0ng／mL）刺激患者PBMC,72h后用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中的1干扰素（IFN-γ）。结果HBsAg或rhIL-12单独刺激仅产生低水平的IFN-γ,联合使用HBsAg和rhIL·12刺激后,患者PBMC产生的IFN-1平均水平显著高于单独使用HBsAg或rhIL-12（P均〈0．05）。HBsAg（0．5μg／mL）联合rhIL-12（0．01、0．1和1．0ng／mL）刺激患者PBMC产生的IFN-1与rhIL-12的浓度之间呈明显的量效关系。结论HBsAg和rhIL-12联合刺激乙型肝炎患者PBMC,通过产生高水平IFN-γ激活乙型肝炎患者特异性细胞免疫。     

重组人白细胞介素12对健康人外周血单个核细胞产生γ干扰素影响的研究

目的建立重组人白细胞介素12（rhIL-12）的生物活性检测方法,观察rhIL-12诱导健康人外周血单个核细胞（PBMC）产生γ干扰素（IFN-γ）的水平与剂量和时间之间的关系,揭示其变化规律。方法rhIL-12供试品刺激健康人PBMC分泌IFN-γ,经国际标准品校正,建立rhIL-12生物活性测定方法。以1ng／mL浓度rhIL-12诱导健康人PBMC,分别于24、48、72、96和120h5个时间点用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清的IFN-γ水平。测定0．1、0．5和2．5ng／mL3个浓度rhIL-12诱导人PBMC72h后培养上清的IFN-γ水平,用Prism5．0统计软件的重复测量方差分析法对所得数据进行统计学处理。结果rhIL-12供试品的生物活性曲线呈典型S型,IFN-γ含量为最大浓度-半时的供试品浓度（ED50）为（1．008±0．238）ng／mL,供试品rhIL-12效价为7938IU／mL。测定1ng／mL浓度rhIL-12刺激健康人PBMC后5个时间点培养上清中IFN-γ显示,不同个体高峰出现时间有所不同,在高峰出现前均呈现递增趋势。高、中、低3个浓度rhIL-12分别诱导健康人PBMC产生的IFN-γ水平与浓度之间呈显著量效关系,且在0．1ng／mL的极低浓度即可诱生高水平IFN-γ。结论rhIL-12供试品生物活性良好,与国际标准品比对基本一致,不同人群对rhIL-12的应答高峰存在个体差异,以诱生IFN-γ作为评价rhIL-12生物活性的指标具有明显的量效关系。