CXCL16在小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义

目的研究CXCL16的表达对小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义。方法建立卡介苗和内毒素诱导的小鼠肝损伤模型，通过实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学分析CXCL16在肝组织中的表达变化，根据肝脏病理变化和免疫组织化学结果分析，比较CXCL16的表达水平和肝脏损伤程度的关系。从模型中各个时间点的肝损伤组织中分离浸润单核细胞，计算浸润的细胞数量变化，并进一步分析其中主要的CD4和CD8T淋巴细胞亚群的数量变化，研究CXCL16在肝脏炎症和损伤中的作用和意义。结果成功复制了小鼠免疫性肝损伤模型，发现在肝脏炎症和损伤中CXCL16表达水平显著上调，CXCL16的表达水平与肝脏损伤程度密切相关，肝脏组织浸润的单核细胞数晕明显增加，淋巴细胞尤其是CD4 、CD8 T淋巴细胞数量也有明显的增加。结论小鼠肝脏损伤过程中CXCL16表达水平的增加与肝损伤程度密切相关，CXCL16趋化淋巴细胞浸润可能是导致肝脏损伤的重要机制之。     

集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白（agrin）是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达，并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系；用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响；应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达，且经过实时定量PCR分析发现，集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关；当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制；经共聚焦显微镜观察发现，集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在，且和CD3分子共定位，抗集聚蛋白抗体町以明显减少这种帽化结构的形成。结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞，呵能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。     

实时定量RT—PCR检测临床肝组织标本中CXCL16及其受体的表达

[目的]建立实时定量RT—PCR方法并检测不同病理状态的肝脏组织中CXCL16趋化因子及其受体CXCR6的表达变化。[方法]建立外参照标准和灵敏的荧光实时定量RT—PCR方法，检测人正常肝组织、癌旁肝组织及癌组织标本中的趋化因子CXCL16及其受体的表达变化，进一步测定和比较其它相关的趋化因子表达谱的表达情况。[结果]获得了灵敏特异的实时定量RT—PCR方法，CXCL16及其受体在癌旁肝损伤组织中显著上调表达，显著高于趋化因子表达谱中其它趋化因子的表达变化，提示它在淋巴细胞尤其是T细胞介导的肝脏损伤过程中可能发挥重要作用。[结论]简便可靠的实时定量RT—PCR适用于检测病理组织中特异基因的表达变化，趋化因子表达谱改变尤其是CXCL16及其爱体CXCR6的显著变化可能与肝脏疾病的病理发生发展密切相关。     

CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤

目的研究CXCL16抗体体内阻断对小鼠免疫性肝损伤的影响。方法克隆、表达和纯化小鼠趋化因子CXCL16活性蛋白，免疫动物制备特异性抗体。抗体体内注射免疫性肝损伤模型小鼠，观察CXCL16抗体对肝脏损伤、ALT水平及小鼠生存率的影响。结果获得了高纯度的活性CXCL16重组蛋白及其特异性抗体，特异性抗体阻断明显改善肝脏的病理损伤，降低血清中ALT水平、延长模型组小鼠的存活时间。结论获得了具有趋化活性的CXCL16蛋白和特异性抗体，CXCL16抗体对卡介苗和脂多糖诱导的小鼠肝损伤具有显著保护作用。     

CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤（摘要）

目的研究CXCL16抗体体内阻断对小鼠免疫性肝损伤的影响。方法克隆、表达和纯化小鼠趋化因子CXCL16活性蛋白，免疫动物制备特异性抗体。抗体体内注射免疫性肝损伤模型小鼠，观察CXCL16抗体对肝脏损伤、ALT水平及小鼠生存率的影响。结果获得了高纯度的活性CXCL16重组蛋白及其特异性抗体，特异性抗体阻断明显改善肝脏的病理损伤，降低血清中ALT水平、延长模型组小鼠的存活时间。结论获得了具有趋化活性的CXCL16蛋白和特异性抗体，CXCL16抗体对卡介苗和脂多糖诱导的小鼠肝损伤具有显著保护作用。     

CXCL16趋化因子在小鼠免疫性肝损伤中的作用

目的：研究CXCL16在免疫性肝脏损伤中的表达及其功能。方法：运用实时定量PCR检测CXCL16在小鼠肝损伤模型中的表达变化；通过特异中和抗体的体内阻断CXCL16功能实验，观察ALT水平、肝脏病理变化、TNF-a和FasL凋亡基因表达、肝脏内浸润淋巴细胞及其主要T细胞亚群的数量变化以及小鼠存活率等指标，研究CXCL16在肝脏炎症和损伤中的作用，并初步探讨它的可能机理。结论：肝脏组织中CXCL16的上调表达介导了特异性淋巴细胞向肝脏局部组织的趋化和募集，并协同调节其它相关分子的表达，参与肝组织损伤。     

趋化因子受体CXCR4在人肺癌高转移细胞株的表达和意义

目的：以人肺癌高、低转移细胞株95D、95C为研究对象，研究趋化因子受体CXCR4的表达及其在肿瘤细胞体外转移潜能中的作用和意义。方法：采用RT-PCR检测95D、95C细胞CXCR4 mRNA的表达情况；以PMA活化肿瘤细胞，研究CXCR4 mRNA表达水平与细胞活性状态的关系；应用钙离子内流实验验证其表达是否具有功能；通过趋化实验观察CXCR4特异性配件SDF-α和裸鼠组织匀浆液对95D细胞的趋化迁移作用；通过MTT法测定95D细胞对SDF-1α作用的增殖反应。结果：95D细胞功能性地高表达趋化因子受体CXCR4，且其表达水平与细胞活性状态有关；CXCR4特异性配件SDF-1α和裸鼠肺、淋巴结组织匀浆均可在体外趋化95D细胞的迁移，SDF-1α还可促进95D细胞的增殖。结论：95D细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4可能与人肺癌细胞株95D的体外高转移潜能有关。     

B细胞表位基因疫苗诱导特异性免疫应答及特性研究

为研究特异性B细胞表位短肽为基础的DNA疫苗的免疫应答特性,将鸭乙肝病毒Pre-S中的P127-138B细胞表位基因克隆到含多肽表达盒(peptideexpressioncassette,PEC)的载体中,体外转染C2C12肌肉细胞,用DOT-EIA检测表位短肽的表达,进一步分别免疫不同品系的BALB/c和C57BL/6小鼠,比较MHC限制性对免疫应答的影响。结果表明,重组pECk-b1b2载体可在体外瞬时高效表达,并保持原有的免疫活性;体内基因免疫能诱导针对表位短肽的特异性抗体;不同品系小鼠抗体产生动力学相似,但抗体滴度差异显著。这些结果提示,以B细胞表位为基础的基因免疫可诱导特异性免疫应答,为DNA疫苗的分子设计提供了新的思路和应用前景。     

集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用（摘要）

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白（agrin）是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法 应用RT—PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达。并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系；用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响；应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果 RT—PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达，且经过实时定量PCR分析发现．集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关；当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制；经共聚焦显微镜观察发现，集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在。且和CD3分子共定位，抗集聚蛋白抗体可以明显减少这种帽化结构的形成。结论 在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞．可能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。     

肌萎缩蛋白参与淋巴细胞的活化及免疫突触的形成

目的：探讨在神经肌接头中发挥重要作用的膜表面糖化蛋白-肌萎缩蛋白是否参与免疫突触的形成，进而影响淋巴细胞的活化。方法：首先通过RT-PCR和FACS分别从mRNA水平和蛋白水平观察肌萎缩蛋白在各种免疫细胞中的表达，并经过共聚焦显微镜观察其是否参与免疫突触的形成，应用构建的反义质粒，研究其是否影响淋巴细胞的抗原特异性和非特异性活化。结果：肌萎缩蛋白广泛表达于T细胞、B细胞、不成熟DC、成熟DC及巨噬细胞中，且参与了免疫突触的形成。当淋巴细胞活化后其表达含量无明显上升，但其表达被下调后，不管是对特异抗原引起的淋巴细胞活化还是对非特异抗原引起的淋巴细胞活化都具有显著的抑制作用。结论：组成性表达于各种免疫细胞中的肌萎缩蛋白参与了免疫突触的形成，并影响了抗原特异性和抗原非特异性的淋巴细胞的活化。