血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的 测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在子宫内膜异位症组织中的表达,探讨VEGF在子宫内膜异位症发生发展中的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测21例手术后病理确诊的子宫内膜异位症患者的异位内膜及其诊断性刮的子宫内膜组织中 VEGF mRNA表达,同时以20例非因子宫内膜异位症而行诊断性刮宫的患者,经病理证实为正常子宫内膜组织中VEGF mRNA表达水平为对照.采用免疫组化(SP法)检测这些病例中VEGF的表达.结果 子宫内膜异位症患者异位子宫内膜与自体子宫内膜及对照子宫内膜均有VEGF表达,VEGF主要表达于子宫内膜腺上皮细胞的细胞浆,而前者与后两者比较差异有显著性(P＜0.05),后两者比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 VEGF通过影响新生血管生成而导致子宫内膜异位症的发生发展,有可能为子宫内膜异位症发病机制和有效治疗的研究提供新的思路.     

HBsAg和B19 VP2复合抗原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的构建乙肝表面抗原(HBsAg)-人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统.方法用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEM-T重组,构建出pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEM-T-HBs中的HBs基因克隆入pGEX-5X-1表达载体中,得到pGEX-5X-1-HBs;再将pGEM-T-VP2中的VP2基因克隆入pGEX-5X-1-HBs中,得到pGEX-5X-1-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定.结果pGEX-5X-1-HBs-VP2可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达产物经Western-blot鉴定具有HBsAg及B19 VP2的双重抗原性.结论成功构建pGEX-5X-1-HBs-VP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为HBV和B19病毒重组多价疫苗的研究奠定了基础.     

郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19感染情况测定

目的:了解郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19的感染情况。方法:采用ELISA和PCR方法分别检测郑州市237例正常孕妇及29例不明原因流产或死胎孕妇血清中B19IgG、B19IgM和B19DNA表达情况。结果:29例流产或死胎孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别为51.7%(15/29)、6.9%(2/29)和13.8%(4/29),237例正常孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别30.4%(72/237)、1.3%(3/237)和2.5%(6/237),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:郑州市孕妇中存在人微小病毒B19的感染,可能导致不明原因流产或死胎。     

针对Cox-2基因siRNA载体构建和沉默效应

目的 构建针对人Cox-2基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对肺癌细胞Cox-2基因表达的沉默作用.方法 设计Cox-2靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSINsi-hU6载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR检测Cox-2基因mRNA表达的变化.结果 把针对Cox-2基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSINsi-hU6载体,经过酶切鉴定与测序.结果 正确;RT-PCR检测显示,Cox-2基因的表达水平明显降低.结论 成功构建出显著沉默细胞Cox-2基因表达的siRNA载体.