Nijmegen法检测凝血因子Ⅷ抑制物的临床应用

目的观察血友病A(HA)及获得性HA(AHA)患者凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的产生情况,探讨Nijmegen法结合APTT纠正试验在FⅧ抑制物检测中的应用及对临床诊断和治疗的指导意义。方法用一期凝固法对42例临床患者进行凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及FⅧ活性检测,进一步采用APTT纠正试验进行筛选,阳性患者用Nijmegen法进行FⅧ抑制物浓度的测定,并结合临床资料进行分析。结果 42例均为FⅧ活性减低患者。39例HA患者中有2例存在FⅧ抑制物(5.1%),浓度分别为3.7 BU/m L和83.2 BU/m L。3例非HA患者经APTT纠正试验未能纠正到正常范围,其中2例AHA患者的抑制物浓度分别为3 686 BU/m L和61 BU/m L,另1例SLE患者APTT纠正试验结果不具有时间依赖性,抑制物浓度仅为0.1 BU/m L。结论 Nijmegen法结合APTT纠正试验检测FⅧ抑制物,方法简便准确,可为FⅧ活性减低患者的临床诊断和治疗提供指导。     

人胚胎骨髓MSC及其突变株F6细胞DAPK基因表达及启动子甲基化检测

摘要：目的：研究人胚胎骨髓间充质干细胞（fetal mesenchymal stem cells, FMSC）及其突变肿瘤细胞F6死亡相关蛋白激酶（deathassociated protein kinase,DAPK）基因的表达及启动子区域甲基化。 方法：用RT-PCR和甲基化特异性PCR（methylationspecific PCR, MS-PCR）技术对FMSC及F6细胞系DAPK 基因的表达和启动子甲基化状态进行检测,并对甲基化产物测序鉴定。 结果：DAPK基因在FMSC中表达而在F6中不表达。通过MS-PCR检测证实F6中DAPK基因发生甲基化,FMSC中DAPK基因发生未完全甲基化。 结论：DAPK基因启动子区域发生甲基化可能是促使其基因表达下调的重要机制,在FMSC突变成F6肿瘤细胞过程中发挥重要作用。     

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中Toll样受体表达及功能的研究

目的 研究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Toll样受体(toll like receptors,TLRs)的表达及功能,并探讨TLRs在AS发病中的作用。方法 通过荧光定量PCR的方法检测21例AS患者及21例健康对照者PBMCs上TLR1～TLR10的表达; 采用ELISA的方法检测AS患者及健康对照者PBMCs中TLRs介导的细胞因子产生水平,并检测患者及健康对照血浆中细胞因子的水平。结果 与对照组相比,AS患者组PBMCs中TLR4的表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P=0.004),其他TLRs在两组间的表达差异无统计学意义; AS患者PBMCs中TLR4介导的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的产生水平显著增高(P值分别为0.003和0.009); AS患者血浆中TNF-α的表达水平较健康对照组显著升高(P=0.021)。结论 AS患者PBMCs中TLR4的表达及细胞因子产生能力增强,TLR4通路可能在AS发病过程中起重要作用。     

网织血小板和PLT计数在SLE患者诊疗中的临床应用价值

目的：探讨网织血小板（RP）和血小板（PLT）计数在系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者诊疗中的临床应用价值。方法：筛选出确诊的SLE患者103例,采用XE-5000血细胞分析仪流水线进行血液中血小板计数分析,并根据血小板降低的严重程度,将SLE患者分为SLE伴血小板轻度降低组[（71~100）×10~9/L]、血小板中度降低组[（41~70）×10~9/L]、血小板重度降低组[（20~40）×10~9/L]和危急值组[（0~20）×10~9/L]。健康体检者40例为对照组进行检测。采用CD61-PE单抗标记血小板,噻唑橙（TO）为染料,应用富含血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）法检测RP%,对其中20例危急值组的SLE患者进行糖皮质激素治疗前后的RP%检测。结果：血小板危急值组、重度降低组和血小板中度降低组3组RP%均显著高于对照组（P〈0.05）;血小板危急值组、重度降低组和血小板中度降低组的RP%显著高于血小板轻度降低组（P〈0.05）;血小板轻度降低组和对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。20例SLE伴血小板危急值组患者治疗前后的RP%分别为（5.86±2.59）%和（3.14±1.97）%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：RP%可能成为评估SLE患者血小板活性的新指标,其值的高低可以反映出骨髓血小板的生成情况,有助于SLE的辅助诊断和预后判断。     

外周血CD4/CD8 双阳性T细胞在类风湿性关节炎中的表达及意义

目的分析类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血CD4/CD8双阳性T细胞(double positive T cells,DPT)的表达水平及功能,并探讨DPT在RA发病中的作用。方法通过流式细胞术检测25例RA患者及25例健康人对照外周血CD3~+细胞中CD4~+/CD8~+双阳性细胞的比例;ELISA法检测RA患者及健康人对照血清中抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-12的表达水平,全自动生化分析仪检测C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)。结果与健康人对照组相比,RA患者组DPT占CD3+T细胞的比例明显升高,两组间差异具有统计学意义(t=4.63,P0.01);RA患者组的ESR、CRP、RF、ACCP、IL-6和TNF-α水平均高于健康人对照组,差异有统计学意义(t分别为3.71,2.99,8.42,4.25,2.12,3.23;P分别为0.000 5,0.004 3,0.01,0.01,0.039,0.002 3)。DPT的表达水平与RA患者的年龄,ACCP,RF及血清中IFN-γ、TNF-α、IL-12的水平不相关,而与患者ESR,CRP,IL-6水平呈正相关(r分别为0.65,0.4,0.46;P分别为0.000 4,0.04,0.02)。结论RA患者外周血DPT表达水平明显升高,在RA发病及进展中发挥重要作用。     

免疫性血小板减少患者外周血Treg及Th1,Th2细胞检测及其临床意义

目的 研究免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)患者外周血中CD4+CD25+FoxP3+细胞(Treg细胞)及Th1/Th2细胞水平并探讨其临床意义。方法 选取27例临床确诊ITP患者作为实验组,采用流式细胞术检测患者外周血Treg细胞及Th1/Th2细胞的比例,并与25例健康志愿者检测结果进行比较。结果 ITP患者外周血中Treg细胞比例为(2.20±0.93)%,健康对照组为(2.99±0.45)%,ITP患者组Treg细胞低于健康对照组(t=3.820,P<0.01); ITP患者组和健康对照组Th1/Th2细胞水平差异无统计学意义(t_Th1=0.655,t_Th2=0.467,均P>0.05)。结论 ITP患者外周血Treg细胞减少,其对ITP疾病发生发展的重要作用值得深入研究。     

外周血单核细胞亚群分布与类风湿关节炎发病相关性

目的检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞亚型分布和功能分子表达水平, 分析上述指标与RA发病相关性。方法收集2020年6月至2021年12月在同济大学附属东方医院就诊或体检的62例RA患者(RA组)、52名健康对照者(HC组)和12例疾病对照患者(疾病对照组), 采集外周血, 密度梯度离心法分离单个核细胞, 单核细胞可分为经典型(CM)、中间型(IM)和非经典型(NCM), 流式细胞术分析单核细胞亚型分布、人白细胞DR抗原(HLA-DR)的表达以及胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。采用Kruskal-WallisH检验、χ2检验、Mann-WhitneyU检验、Wilcoxon配对符号秩检验、Spearman相关系数检验和Logistic回归分析进行统计学分析。采用ROC曲线分析IM比例对RA的诊断价值。结果 RA组[0.40(0.40, 0.50), 7.60%(5.97%, 8.53%)]和疾病对照组[0.40(0.40, 0.68), 8.20%(5.85%, 10.28%)]的单核细胞绝对值和占白细胞百分比均高于HC组[0.30(0.30, 0.40), 5.8...     

干细胞标志物Nanog的检测在胃癌诊断中的意义

目的检测胃癌患者癌组织和癌旁组织中干细胞标志物Nanog的表达水平并探讨其与临床病理参数的相关性。方法用RT-PCR和Real-timePCR检测62例胃癌患者癌组织和癌旁组织中Nanog的表达。结果RT-PCR结果显示胃癌组织和癌旁组织中Nanog的表达阳性率分别为58.1%(36/62)、9.7%(6/62),差异有统计学意义(P<0.0001);Real-timePCR结果表明胃癌组织中Nanog相对表达水平高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Nanog阳性表达与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关。结论Nanog表达与胃癌的发生及其分化状态相关,可作为胃癌诊断的一个新的分子标志。     

尿培养产CTX-M大肠埃希菌的种系分型及耐药和毒力特点分析

目的分析尿培养产CTX-M大肠埃希菌的种系分型,耐药及毒力特点。方法收集该院2014年尿培养大肠埃希菌,环扩散法测定细菌的敏感性,ESBLs确定分析细菌产ESBLs的情况;采用肠杆菌属重复基因间隔共有序列-PCR(ERIC-PCR)对细菌进行遗传相关性分析;PCR扩增CTX-M编码基因和毒力基因iutA,ompT,fyuA,fdeC,fimH,traT,cvaC,pap,kpsMT,pAI,usp,aer,hlyA,cnf,和chuA;多重PCR分析产CTX-M大肠埃希菌的种系分型;依据PCR对菌株的CTX-M编码基因的检验结果,将细菌分为产CTX-M组和非产CTX-M组,对比分析两组之间在抗菌药物耐药性和毒力基因之间的差异。结果 162株尿培养大肠埃希菌中没有遗传相关性,126株ESBLs阳性菌株中,有91株细菌产CTX-M,其中,57株产CTX-M大肠埃希菌属于D型,16株属于B2型。统计学分析发现,产CTX-M组细菌的耐药率显著高于不产CTX-M组细菌(除外亚胺培南),毒力基因iutA、chuA和traT在产CTX-M细菌组中的流行显著高于非产CTX-M组,P值分别依次为:0.001、0.006和0.000。结论产CTX-M大肠埃希菌是本院尿路感染的主要致病菌,大多属于D型,其耐药率显著增高,且与毒力基因iutA、chuA和traT密切相关,是尿路感染患者临床治疗的一个潜在威胁。