基于白纹伊蚊转录组的溴氰菊酯抗性相关基因分析及验证

目的 通过对白纹伊蚊溴氰菊酯抗性品系(DR)和敏感品系(DS)进行转录组分析,筛选可能与抗性相关的差异表达基因。方法 提取白纹伊蚊实验室敏感品系(DS品系)、溴氰菊酯抗性品系(DR品系)的总RNA进行高通量测序,对差异基因进行COG和KEGG的功能注释与分析,筛选出可能与抗性相关的差异表达基因,并进行实时定量PCR验证。结果 DR品系的LC₅₀为2 087.75μg/L,相较于DS品系,抗性倍数为109.8倍,达到了高度抗性标准。RNA-seq测序后基于FPKM值进行差异性分析结果显示,差异表达的基因共有551个,其中在DR品系中上调表达基因有278个,下调表达基因有273个。COG和KEGG功能富集结果显示,显著性富集的通路和蛋白质功能预测均主要与物质代谢相关。基于此进一步分析了代谢抗性相关基因,且10个目标基因的RNA-seq结果与实时定量PCR结果在DR和DS品系中表达趋势具有一致性。结论 白纹伊蚊可能通过上调表达细胞色素P450基因、谷胱甘肽S转移酶基因、羧酸酯酶、表皮蛋白等基因应对杀虫剂的选择压力。     

2017—2021年济宁市任城区唐口街道淡色库蚊抗药性调查

目的 监测2017—2021年济宁市任城区唐口街道淡色库蚊幼虫对常用杀虫剂的抗药性,为合理使用杀虫剂提供理论依据。方法 采用浸渍法测定淡色库蚊幼虫对常用5种杀虫剂的抗药性。结果 2017—2021年,淡色库蚊幼虫对溴氰菊酯和氯氰菊酯呈现出不同程度的抗药性,在2018年最高分别达到102和294倍。对敌敌畏和残杀威的抗性倍数波动于6.29～8.09和3.09～4.41,对Bti一直处于敏感水平。结论 唐口街道淡色库蚊对常用杀虫剂均产生了不同程度的抗药性,应当科学使用杀虫剂,以延缓蚊虫抗药性的发生和发展。     

淡色库蚊不同发育阶段肠道菌群多样性分析

目的 了解淡色库蚊不同发育阶段肠道菌群的组成与多样性。方法 取淡色库蚊的Ⅳ龄幼虫、蛹、雌成蚊各20只,分别剖取肠道(每个发育阶段设3个重复),提取肠道细菌基因组DNA,PCR扩增肠道细菌的16S r RNA高变区序列,采用Illumina NovaSeq6000测序平台进行测序。整理统计测得的序列数目和可操作分类单元(OTU),采用群落结构柱状图和Veen图分析淡色库蚊不同发育阶段肠道细菌的群落组成与丰度,采用Alpha多样性指数分析微生物群落的丰度和多样性,采用主坐标分析(PCoA)对不同发育阶段肠道细菌群落结构进行差异分析,采用线性判别分析(LEFSe)揭示组间在丰度上有显著差异的物种,采用SPSS 22.0统计学软件对属水平上不同阶段淡色库蚊核心细菌丰度进行单因素方差分析。结果 淡色库蚊Ⅳ龄幼虫、蛹、雌成蚊的肠道菌群共有1 972个OTU,归属22门45纲112目178科329属。在属水平上,Ⅳ龄幼虫、蛹和雌成蚊肠道细菌分别由230、233和228个属组成,各发育阶段共有的优势属为拟杆菌属[丰度分别为(16.83+3.5)%、(26.98±0.94)%、(20.82±2.63)%...     

细胞色素P450介导蚊虫代谢抗性及防治应用的相关研究进展

随着化学杀虫剂在公共卫生和农业上的长期大量应用,导致蚊虫抗药性的发生与发展,从而为病媒疾病的控制带来了前所未有的挑战。目前研究表明代谢抗性是蚊虫抗性中主要的抗性机制之一,其中细胞色素P450作为代谢抗性相关酶类中重要的酶系家族,参与了蚊虫内源及外源化合物的生物转化和代谢。细胞色素P450介导蚊虫代谢抗药性的酶系主要是CYP6、CYP9和CYP4家族。近年来随着生物信息学和分子生物学技术的发展,蚊虫全基因组水平抗性基因及抗性机制取得更全面和深入的研究,越来越多的CYP被发现和证实与蚊虫的抗药性相关,并且应用于相关病媒控制及抗性管理中。本综述介绍了CYPs在蚊虫代谢抗性方面的基础研究情况,以及在蚊虫防治及蚊虫抗性管理中的相关研究进展。     

米氏沙雷菌与白纹伊蚊抗药性的相关性研究

目的 探究肠道共生菌米氏沙雷菌(Serratia oryzae)与白纹伊蚊(Aedes albopictus)溴氰菊酯抗性的关系。方法 从白纹伊蚊肠道细菌分离培养米氏沙雷菌，通过抗生素处理及回饲法构建米氏沙雷菌富集白纹伊蚊，CDC Blottle检测富集前后抗药性。转录组分析富集前后白纹伊蚊代谢解毒酶基因的变化，ELASA法进行3种代谢解毒酶活性测定，RACE全长克隆差异基因及序列分析。结果 抗生素处理及回饲富集米氏沙雷菌后，采用细菌菌落直接计数法及16S rRNA基因绝对定量法验证，与空白对照组差异均有统计学意义，即米氏沙雷菌富集白纹伊蚊构建成功。CDC Blottle实验结果显示，米氏沙雷菌富集白纹伊蚊在恢复24 h后死亡率显著低于对照组。在抗性品系和敏感品系白纹伊蚊米氏沙雷菌富集组和对照组转录组测序显示，米氏沙雷菌富集会导致代谢解毒酶基因上调表达，CYP9f2和CCEAE4分别上调表达5.07倍和11.35倍；酶活性检测显示，富集组3种酶活性均显著提高。结论 米氏沙雷菌与白纹伊蚊的抗药性相关，通过上调蚊虫的代谢解毒酶的表达和酶活性增强，参与白纹伊蚊的抗药性发生。