逆转录半巢式聚合酶链反应单管法检测丙型肝炎病毒核酸

逆转录巢式聚合酶链反应(ＲＴＰＣＲ)是快速直接的丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)感染诊断方法,但繁琐,易外源性污染造成假阳性结果。我们以蜡隔介导高温启动,优化各反应条件,使在一个Ｅｐｐｅｎｄｏｆ(Ｅｐ)管中依次连续地进行常规的三步反应,从而可以防止外源性污染,快捷高效地进行ＲＴＰＣＲ检测。一、材料和方法1标本来源:取60例血液透析患者血清标本。标准阳性血清由北京医科大学人民医院肝病研究所提供。2试剂:鼠白血病病毒(ＭＭＬＶ)逆转录酶(ＧＩＢＣＯ);ＴａｑＤＮＡ聚合酶(加拿大);蜡丸(熔点60℃,ＰＥ);ＨＣＶＰＣＲ诊断试剂盒(华美)。3引…     

健康教育对伴糖尿病老年精神分裂症患者的影响

目的:探讨健康教育对伴糖尿病老年精神分裂症患者的影响.方法:对所有符合入组的患者在给予常规性的护理措施,另外系统地给予与精神病和糖尿病相关知识的健康教育.结果:通过实施健康教育,患者对有关知识的掌握有很大的提高,并且能运用到自我管理中,其遵医行为的提高,使治疗取得良好的效果.结论:健康教育可以促进伴糖尿病老年精神分裂症患者的自我保健行为,有利于控制病情发展,使患者早日康复,减轻家庭和社会的负担,并提高生活质量.     

多功能气管组合套管的制作与应用

目的探讨多功能气管组合套管的制作及应用效果。方法自行研制多功能气管组合套管,其由辅助吸引管及一次性气管切开导管构成,并应用于8例气管切开并发严重且难以控制(予敏感抗生素抗感染、对症支持治疗无效)的上呼吸道感染者。结果8例患者呼吸道感染获得有效控制,3～5d体温下降,血常规正常,胸部X线摄片示肺部感染得到控制。结论多功能气管组合套管应用于气管切开并发严重上呼吸道感染患者,有助于提高治疗效果。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜异常增生的诊治

多囊卵巢综合征（PCOS）是最常见的一类生殖内分泌异常，生育期女性发病率约为4％～12％。主要临床表现包括：月经不规律、闭经、高雄激素血症、稀发排卵或不排卵，不孕，其中75％病例有胰岛素抵抗、高胰岛素血症，50％病例黄体生成激素（LH）升高。临床上PCOS患者需要妇科医生解决的主要问题是月经不调、不孕，远期的主要不良后果是子宫内膜增生、子宫内膜癌等。PCOS患者不排卵、稀发排卵往往持续存在。因此，在整个生育期、[第一段]     

玻璃化冷冻方法中冷冻保护剂及制冷速度对家兔卵母细胞纺锤体的影响

目的:探讨玻璃化冷冻方法中冷冻保护剂及制冷速度对家兔第二次减数分裂中期卵母细胞纺锤体的影响.方法:以冷冻环为载体,单用乙二醇(ethylene glycol,EG)或乙二醇与二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO)联合作冷冻保护剂,用直投液氮或使用玻璃化冷冻仪高速制冷冷冻家兔卵母细胞;解冻2 h后固定并免疫荧光法染色纺锤丝及染色体;用共聚焦扫描显微镜观察纺锤体形态.结果:在单用EG以及EG和DMSO联合直投液氮的方案中,纺锤体损伤较严重,但在EG和DMSO联合应用并采用玻璃化冷冻仪提高制冷速度的方案中,纺锤体形态正常的比例与对照组相似.结论:玻璃化冷冻方法中采用冷冻保护剂联合及采用玻璃化冷冻仪高速制冷对保持解冻后家兔卵母细胞纺锤体形态效果最好.     

韶关地区新生儿耳声发射与耳聋基因联合筛查结果分析

目的:了解韶关地区新生儿听力筛查情况。方法:选择2017年1～6月在韶关市粤北人民医院出生的新生儿1 247例,所有新生儿应用耳蜗精灵为其进行耳声发射检查,由仪器自动判定通过或者不通过,初筛为出生后2～3 d,复筛于出生后42 d进行。在出生3 d内采集足跟血作为提取基因组DNA血样,由粤北人民医院检验科行耳聋基因微阵列检测,检测4个常见耳聋基因上的9个突变位点。结果:耳声发射初筛不通过484例,其中早产儿142例未通过。复筛均通过。1247例对象中49例耳聋基因筛查阳性,GJB2 235DelC突变16例,GJB2 299DelAT突变2例,GJB3 538CT突变2例,SLC26A4 IVS7-2AG突变14例,SLC26A42168AG突变5例,SLC26A4 1229CT突变3例,mtDNA 12SrRNA 1555AG均质突变5例,mtDNA 12SrRNA 7445AT均质突变1例,不在常规检查列表中;mtDNA 12SrRNA 1494CT均质突变1例。结论:耳声发射初筛阳性率高于耳聋基因阳性率,复筛阳性率低于耳聋基因阳性率。在本地区没有耳聋家族史的新生儿中,GJB2和SLC26A4基因突变率较高,GJB3基因和线粒体DNA12SrRNA基因突变率较为少见。由于耳声发射检查采用瞬态诱发耳声发射筛查,对于听神经疾病的患儿有一定的假阳性及假阴性率,通过联合耳聋基因筛查可早期发现迟发性耳聋患儿,为人群听力障碍防控提供帮助。     

胎儿胰岛中干细胞的分离与鉴定

目的:已证实胰腺来源的干细胞或祖细胞在体内外均能分化为胰岛素分泌细胞,但成人胰腺来源的干细胞增殖潜能较差.实验旨在分离并鉴定胎儿胰岛样细胞团中的干细胞,为糖尿病细胞移植治疗寻找可用的种子细胞.方法:实验于2006-10/2007-07在解放军军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室完成.①对象:所用胰腺标本取自流产胎儿,胎龄14～20周,由解放军总医院妇产科提供,胎儿组织的使用得到孕妇本人的知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:无菌条件下取出胎儿胰腺,37 ℃下用0.5 g/L的V型胶原酶进行消化,分离得到胎儿胰岛样细胞团,悬浮培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清、1 mmol/L丙酮酸钠、1 mmol/L谷氨酰胺、71.5 μmol/L β-巯基乙醇、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基,每日转皿除去贴壁细胞,72 h后挑选出悬浮生长的胰岛样细胞团予以贴壁培养,待长成上皮样单层细胞克隆时传代.③实验评估:将悬浮培养的胰岛样细胞团行双硫腙染色.另将少部分胰岛样细胞团及第4代细胞种植于24,96孔板中,采用免疫荧光染色检测细胞表面分子标志物增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、角蛋白19、波形蛋白、胰岛素、胰高血糖素、CD29的表达情况.MTT法分析第6代细胞的生长曲线.结果:①悬浮及贴壁培养的胰岛形态:刚分离出的胰岛呈簇状,边缘不规整,细胞排列较疏松.贴壁后胰岛样细胞团由簇状逐渐展开形成上皮样单层细胞克隆.传代后细胞形态发生改变,呈梭形或分支样,增殖较快.②悬浮培养的胰岛双硫腙染色检测:分离得到的胎儿胰岛样细胞团双硫腙染色呈阳性表达.③细胞表面标志免疫荧光染色检测:贴壁的第1代细胞大部分呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性,极少数细胞呈胰岛素、胰高血糖素阳性,而角蛋白19为阴性.传代后仍呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性,角蛋白19弱阳性,而胰岛素、胰高血糖素为阴性,所有细胞均不表达CD29.④细胞生长曲线:传代第3天细胞进入对数生长期,第6天进入平台期,细胞生长曲线呈"S"形.结论:由胎儿胰岛成功分离并培养出具有自我更新和良好增殖能力的干细胞,稳定表达多种胰腺干细胞特征性标志,而不表达胰岛细胞标志物,提示该细胞可作为候选的胰岛干细胞用于糖尿病细胞移植治疗.