日本血吸虫尾蚴体外培养细胞的形态学与抗原性初步研究

目的探索日本血吸虫尾蚴细胞培养技术，分析培养细胞的形态特征与抗原性。方法采用改良RPMI-1640培养基对日本血吸虫尾蚴细胞作体外培养，观察培养细胞的生长特性和一般形态，取培养3周的细胞作HE染色和超微结构观察，并用SDS—PAGE、Western blot技术、免疫荧光和凝集试验检测其抗原性。结果在培养早期，细胞呈半悬浮状并向培养瓶中心聚集生长，观察到细胞分裂增殖现象，随着’培养时间延长，细胞生长繁殖速度渐渐减慢，培养至8周，多数细胞死亡。培养3周的细胞，大小不均，呈多形性，大部分细胞呈高核质比率，仅少数细胞胞浆较丰富。电镜观察培养细胞表面呈现特殊结构。SDS—PAGE和Immuno blot分析表明：尾蚴细胞与尾蚴虫体的蛋白带谱大体相似，感染兔血清对尾蚴虫体和尾蚴培养细胞抗原分子识别的条带略有不同。用尾蚴培养细胞与感染兔血清作凝集试验和免疫荧光检测，二者均可出现特异性结合。结论日本血吸虫尾蚴细胞在体外出现有限增殖，该细胞在血吸虫病的免疫诊断中具有潜在的应用价值。     

日本血吸虫Mf2基因的亚克隆表达与免疫保护效果研究

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum，Sj）Mf2蛋白，并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法 将SjMf2基因亚克隆至pCEX—5X—3原核表达载体，以GST融合蛋白的形式在ER2688中表达，表达产物免疫小鼠，免疫用抗原剂量为50μg/次.鼠，对照组分别注射FCA或PBS，在0、2、6周共免疫3次。第3次免疫后2周进行攻击感染，42d后杀鼠，观察减虫和减卵效果。结果 在IPTG诱导下，表达载体中的SjGST基因与重组的SjMf2基因在大肠杆菌中得以高效表达，形成了SjGST—Mf2融合蛋白，用这种融合蛋白免疫小鼠，诱导产生了27．75％的减虫率和45．7％的每雌肝组织虫卵减少率(LEPF)。结论 SjMf2基因亚克隆至pGEX—5X—3载体后可在大肠杆菌中高效表达，表达产物能诱导小鼠产生一定程度的抗日本血吸虫保护性免疫力。     

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗不同免疫途径免疫保护效果研究

目的:观察本室所构建日本血吸虫大陆株31kDa组织蛋白B DNA疫苗在BALB/c小鼠体内的不同免疫途径的免疫保护效果.方法:用纯化的空白质粒载体VR1012、重组质粒VR1012-Sj31免疫BALB/c鼠,将36只6～8周龄BALB/c鼠随机分为3组,每组12只,对照组(A组)肌肉注射空白质粒载体VR1012,实验组(B组)皮下注射重组质粒VR1012-Sj31,C组肌肉注射重组质粒VR1012-Sj31.质粒剂量均为100μg,每隔2w免疫1次,共免疫3次,第3次免疫后第21d,每只鼠经腹部感染10条尾蚴,42d后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数,观察诱导产生的减虫和减卵效果,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体.结果:ELISA分析表明,第3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体.与空白质粒对照组比较,2个实验组的减虫率分别为15.0%(P＞0.05)和25.0%(P＜0.05),减卵率分别为38.22%和54.90%(P＜0.001).与皮下免疫组相比,VR1012/Sj31肌肉免疫组的减卵率分别为26.99%(P＜0.001).结论:DNA疫苗VR1012-Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗日本血吸虫感染保护作用,肌肉注射的保护效果大于皮下注射.     

IMMUNOSCREENING OF SCHISTOSOMA JAPONICUM EGG cDNA LIBRARY

目的：从日本血吸虫虫卵文库中筛选并鉴定出与免疫诊断及免疫预防有关的基因克隆。方法：采用Ｓ．ｊＳＥＡ超免疫兔血清对日本血吸虫卵文库进行筛选。先去除抗大肠杆菌抗体，经三轮筛选得到１２个阳性克隆，然后，用辅助噬菌体进行体内剪切，经抗菌素平板筛选含重组质粒的阳性菌落，每个菌落分为２份，一份进行ＰＣＲ扩增以测定插入片段的大小。另一份用于制备纯质粒ＤＮＡ模板，进行ＤＮＡ序列测定，通过ＧＣＧ软件对所得ＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ中的序列进行同源性比较。结果：共筛得１２个阳性克隆，ＰＣＲ后测得其长度大多为１．２ｋｂ，其中８个与Ｓ．ｊ热休克蛋白７０的基因同源，２个与Ｓ．ｊ钙网蛋白同源，１个与Ｓ．ｍｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ同源，１个与Ｓ．ｊ２３ｋＤａ蛋白同源。结论：本研究首次报道用抗ＳＥＡ血清对日本血吸虫虫卵文库的筛选结果，所得的１２个阳性克隆均为编码日本血吸虫免疫诊断及预防有关的基因。     

用噬菌体多肽库筛选日本血吸虫表膜抗原的模拟表位

为探索可用于诊断的模拟表膜抗原。采用纯化的兔抗表膜抗原IgG作探针 ,免疫筛选噬菌体随机十二肽库 ,经 3轮生物淘洗后 ,随机挑选 30个噬菌体克隆 ,用ELISA检测其与筛选抗体的特异性结合 ,选择两个阳性克隆进行DNA序列测定 ,并用斑点ELISA比较检测正常人和日本血吸虫病患者血清各 10份。结果显示 ,随机挑选的 30个克隆中有 9个噬菌体克隆与筛选的抗体有特异性的结合反应。DNA测序结果显示 ,两个阳性噬菌体克隆 (携带的抗原表位 )所演绎的氨基酸序列与GenBank已知的氨基酸序列无同源性。斑点ELISA结果显示两个抗原表位可被血吸虫病患者血清呈特异性识别     

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)中的组分抗原，分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原，计算各组分抗原的分子量，并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠，攻击感染日本血吸虫尾蚴，感染后45d剖杀，观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原，选择收集其中4个较纯的组分抗原，分子量分别为52kD、63kD、67kD和74kD；其中63kD和67kD抗原与感染血清有强的反应，而52kD和74kD抗原则反应弱；4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。63kD抗原诱导的免疫保护力水平较52kD、67kD和74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性，且63kD抗原有一定的免疫保护性。     

SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的 :制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体 (SjAWMMcAb) ,探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法 :用SP2 / 0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合 ,经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体 ;采用Westernblotting和免疫荧光测定 (IFA)对其进行鉴定 ;小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果 :建立了 3个分泌SjAWMMcAb的细胞株 ,Westernblotting显示 3个McAb可识别 5种不同分子量的蛋白 ,IFA表明 3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应 ,3B6和 1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高 4 1.78%和 2 4 .12 %。结论 :某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用     

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG4 …

探讨ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法，用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳＪ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ〉０．０５）     

卫氏并殖吸虫囊蚴标本制作方法的改进

介绍卫氏并殖吸虫囊蚴标本制作方法的改进。