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目的转染pcDNA3HO1入人血管内皮细胞(HUVEC)并表达,研究血红素加氧酶_1(HO_1)保护细胞凋亡的作用。方法将构建好的质粒用DOTAP包裹转入细胞中表达。用CCLR破碎细胞后,SDS_PAGE鉴定表达量,采用TNF_α诱导细胞凋亡,以流式细胞仪测定细胞的凋亡率;采用Hemin和SnPP分别刺激细胞,促进和抑制HO_1在细胞中的表达。结果经Hemin处理后细胞的凋亡率均在20%以下,而SnPP处理后细胞的凋亡率大幅上升,最高可达到95%以上。实验数据显示HO_1基因表达被抑制时细胞凋亡率是诱导时的5~20倍。结论细胞凋亡率与质粒转染效率和HO_1表达量均成反比,提示HO_1对细胞有保护作用,可以抑制细胞凋亡,在临床具有广泛的应用前景。 相似文献
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血红素加氧酶 -1抗人血管内皮细胞凋亡的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 转染pcDNA3HO1入人血管内皮细胞(HUVEC)并表达,研究血红素加氧酶-1(HO-1)保护细胞凋亡的作用。方法 将构建好的质粒用DOTAP包裹转入细胞中表达:用CCLR破碎细胞后,SDS-PAGE鉴定表达量,采用TNF-α诱导细胞凋亡,以流式细胞仪测定细胞的凋亡率;采用Hemin和SnPP,分别刺激细胞,促进和抑制HO-l在细胞中的表达。结果 经Hemin处理后细胞的凋亡率均在20%以下,而SnPP处理后细胞的凋亡率大幅上升,最高可达到95%以上。实验数据显示HO-1基因表达被抑制时细胞凋亡率是诱导时的5~20倍。结论 细胞凋亡率与质粒转染效率和HO-l表达量均成反比,提示HO-l对细胞有保护作用,可以抑制细胞凋亡,存临床具有广泛的应用前景。 相似文献
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HO的组织细胞保护作用及临床意义 总被引:1,自引:1,他引:0
血红素加氧酶(HemeOxygenase,HO)是血红素降解过程中的限速酶 ,可将血红素降解为等摩尔的胆绿素、游离铁和CO。迄今为止 ,已发现三种HO同工酶 :HO -1为诱导型 ,广泛分布于脾脏、肝脏、网状内皮系统和骨髓等组织 ,可被多种应激诱导 ;HO -2和HO -3呈结构性表达 ,HO -2主要分布于脑和睾丸中 ,其表达仅被糖皮质激素调节[1];HO -3为单一转录产物 ,存在于肝、脾、胸腺、前列腺、心脏、肾、大脑、睾丸等组织中 ,其氨基酸结构与HO -1不同 ,但与HO -2很接近 ,是一种较弱的血红蛋白催化剂 [2]。目前的研究多聚焦于HO -1和HO -2 ,对HO -3的… 相似文献
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目的 制备人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)突变体,探讨酶的作用机制并应用突变体降低胆红素水平,为防治新生儿期高未结合胆红素血症的发生提供新途径。方法 采用PCR方法制备hHO-1 His25Ala突变体(△hHO-1)cDNA,构建突变体表达载体pBHO-1(M)。野生型和突变体表达载体pBHO-1和pBHO-1(M)分别转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达目的蛋白。经30%~60%(NH4)2SO4盐析、Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂分离纯化,并进行酶活性测定。结果 构建的载体能分别表达产物,经30%~60%(NH4)2SO4盐析后纯度提高3.6倍,再经2次Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂分离纯度提高30倍,酶活性测定显示。△hHO-1较野生型hHO-1(whHO-1)活性下降了91.21%。结论 hHO-1的第25位组氨酸在酶与底物血红素氧化反应中起着重要作用,制备的△hHO-1能明显降低胆红素水平。 相似文献
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新型凝血酶抑制剂研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
目 前预防和治疗血栓栓塞性疾病的基本方法是应用抗凝药、抗血小板药及溶栓药的抗血栓疗法[1 ] 。这三类药物都有不同的作用靶位 :抗凝药抑制凝血酶的生成、纤维蛋白的形成 ;抗血小板药物可以抑制血小板的功能 :溶栓药促进血块的溶解。传统的抗凝药 ,如非组分肝素(UFH)、低分子肝素和华法林、丙酮苄羟香豆素 ,虽然具有一定的疗效 ,但受到很大的限制。为提高动 /静脉血栓性栓塞、进行性脑卒中、肺梗死的治疗效果 ,寻找更有效的抗凝、抗栓新药已成为当今心血管药物研究领域的主要研究方向之一。“凝血酶抑制剂”有望克服传统抗凝药的应用局… 相似文献
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