人乳头瘤病毒线性平行杂交分型检测条件的建立及优化

目的研究人乳头瘤病毒（HPV）线性平行杂交分型检测（LiPA）条件的建立及优化。方法采用PCR方法和反向杂交相结合的技术。使扩增产物与水平固定在长条形尼龙膜上的型特异性寡核苷酸探针杂交,再利用显色系统形成肉眼可见的产物,根据产物和条膜底色的清晰度对LiPA杂交的重要参数进行优化,包括点膜的探针浓度,杂交温度等。结果建立并优化了LiPA杂交的条件,本底清晰,结果可靠。结论建立的LiPA杂交技术经济简便。切实可行。     

结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因LiPA检测研究

目的利用LiPA技术检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因,评价LiPA技术临床应用的可行性。方法应用比例法确定80株结核分枝杆菌临床分离株其耐药性,用katG基因PCR扩增产物进行DNA测序,然后用LiPA检测技术检测结核分枝杆菌katG基因的突变,对比3种方法的检测结果,评估LiPA检测技术的准确性。结果在80株结核分枝杆菌中,35株为异烟肼敏感株,45株为异烟肼耐药株。敏感株katG基因扩增阳性率为100％,耐药株为91．1％（41／45）。耐异烟肼茵株katG的缺失率为8．9％。41株扩增阳性耐药株中有26株检测到315位密码子的突变,分别为ACC（60．97％,25／41）,ATC（2．44％,1／41）,无突变（36．58％,15／41）。LiPA技术检测、药物敏感性试验和基因测序的结果基本一致。结论结核分枝杆菌katG基因突变的LiPA技术敏感性高,特异性强,可用于结核分枝杆菌的快速药物敏感性试验评价。