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目的:江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及部分生物化学和药理性质的研究.方法:应用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱和HiPrep Sephacryl S 100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氨基酸组分及部分药理性质.结果:分离得到相对分子质量为59 100,等电点为4.98, SDS-PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶.该组分属于金属蛋白酶类.氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氨基酸.高浓度的纤溶酶对肿瘤细胞CEN2有抑制作用,有微弱的出血毒性.结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶. 相似文献
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目的 通过观察促卵泡激素(FSH)、活性氧(ROS)及其特异性抑制剂对卵巢癌细胞中红系衍生的核因子2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf2)表达的影响,探讨FSH是否通过ROS途径调控卵巢癌细胞Nrf2的表达.方法 (1)采用免疫组织化学方法检测Nrf2在卵巢癌良恶性组织中的表达.(2)用不同浓度的FSH刺激卵巢癌Hey细胞不同时间,采用蛋白质印迹法检测细胞内Nrf2蛋白的表达.(3)采用ROS检测试剂盒检测80 mIU/ml的FSH刺激后不同时间Hey细胞内ROS的生成情况.(4)Hey细胞经不同浓度的H2O2刺激48 h后,或经ROS特异性抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后加入150 mmol/L的H2O2处理48 h,观察细胞内Nrf2的表达.(5)Hey细胞经不同浓度的NAC预处理1h,加入80 mIU/ml的FSH共孵育48 h,观察细胞内Nrf2表达的变化.结果 (1)10例良性卵巢囊肿组织中仅3例有Nrf2蛋白的弱阳性表达,而64例卵巢癌组织中42例(65.6%)有Nrf2蛋白的阳性表达,两组差异有统计学意义(P=0.042).(2)FSH可上调Hey细胞内Nrf2的表达,并呈一定的剂量、时间依赖效应.(3) FSH可促进Hey细胞ROS的产生.(4) H2O2可诱导Hey细胞Nrf2蛋白的表达,且其作用可被NAC阻断.(5)NAC可阻断FSH所诱导的Nrf2蛋白的表达.结论 FSH可促进卵巢癌Hey细胞中ROS产生,上调Nrf2蛋白表达,抑制ROS途径可阻断FSH诱导的Nrf2高表达.提示FSH可能通过ROS途径调控卵巢癌Nrf2的表达,进而促进肿瘤发生. 相似文献
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卵母细胞激活不足是导致卵胞浆内单精子显微注射技术失败的常见原因,其发生通常与精子无法产生足量的磷脂酶C-ζ引起钙离子(Ca2+)振荡来激活卵母细胞有关.为解决卵母细胞激活不足、提高卵胞浆内单精子显微注射技术成功率等,人工卵母细胞激活的相关研究及临床应用越来越多.由于其生物安全性尚未被完全确定,阐明Ca2+在卵母细胞激活... 相似文献
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目的:比较促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂方案中选择不同的胞浆内单精子注射(ICSI实施时机对新鲜胚胎移植周期中胚胎质量及妊娠结局的影响。方法:选择2016年1月—2018年5月在我科采用GnRH拮抗剂方案促排卵,行新鲜胚胎移植的531个周期,按不同取卵(OPU)-ICSI间隔时间分为2组:38~40 h为组1(n=101),41~43 h为组2(n=430),比较2组患者的卵母细胞成熟度、胚胎质量和妊娠结局。结果:组1患者的卵子成熟率低于组2,但组2的早期流产率低于组1,差异有统计学意义(均P0.05)。2组患者的受精率、分裂率、可利用胚胎率、优胚率、种植率和临床妊娠率等比较,差异无统计学意义(均P0.05)。结论:在GnRH拮抗剂方案新鲜胚胎移植周期中,ICSI时机选择在38~43 h的窗口期均能达到比较一致的胚胎质量及临床妊娠率。关于OPU-ICSI间隔短(小于40 h)早期流产率较高,需要更多的和细致分组的研究。 相似文献
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目的:检测趋化因子受体CXCR7(chemokine receptor 7)及其配体在子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞中的表达,并研究雌激素对该受体的调控作用。方法:首先通过RT-PCR分析20种趋化因子受体在子宫内膜癌细胞株Ishikawa(ERα阳性)和AN3CA(ERα阴性)的转录水平,筛选出子宫内膜癌细胞株高表达的趋化因子受体,以免疫细胞化学染色法测定该受体及其相应配体在子宫内膜癌组织和细胞中的表达,并用蛋白质印迹法观察雌激素对该受体蛋白水平表达的影响。结果:(1)CXCR7 mRNA在子宫内膜癌细胞株Ishikawa、AN3CA均呈高表达,免疫细胞化学示子宫内膜癌组织和Ishikawa、AN3CA细胞表达CXCR7及其配体SDF-1,不表达I-TAC;(2)在Ishikawa中,雌激素在一定浓度范围内上调细胞中CXCR7蛋白水平的表达,而在AN3CA中,雌激素对CXCR7蛋白并无明显的调节作用。结论:CXCR7/SDF-1高表达于子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞中,且雌激素上调CXCR7的表达,表明CXCR7/SDF-1可能在子宫内膜癌中发挥调控作用。 相似文献
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背景:蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白(原)的酶,称为纤维蛋白(原)溶酶(纤溶酶),可做为溶解在心肌梗死.中风等期间形成的血栓的抗栓药物。目的:分离纯化江浙蝮蛇毒纤溶酶,并分析其部分生物化学和药理性质。设计:对照观察实验。单位:广西医科大学蛇毒研究所。材料:实验于2003—07/2005-06在广西医科大学蛇毒研究所完成。昆明种小鼠,体质量18&;#177;25g,平均(20&;#177;2)g,鼠龄三四个月,由广西医科大学实验动物中心提供。蛇毒冻干粉由广西医科大学蛇毒研究所提供:方法:应用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱和HiPrep Sephacryl S100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氩基酸组分及部分药理性质。主要观察指标:纤溶酶相对分子质量、等电点和氨基酸组成.抑制剂对纤溶酶的作用,出血活性实验,纤溶酶对家兔体内抗凝活性的作用。结果:纳入30只鼠和12只免全部进入结果分析.分离得到相对分子质量为59100,等电点为4.98,SDS—PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶。该组分属于金属蛋白酶类。氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氩基酸.有微弱的出血毒性。具有较强且持久的溶栓效果。结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶. 相似文献
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目的:探讨Nanog在FSH诱导的卵巢癌转移和侵袭中的作用。方法:采用Western blot法检测永生化卵巢上皮细胞Moody,良性卵巢肿瘤细胞Mcv152和卵巢癌细胞Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达。使用FSH以浓度梯度和时间梯度的方式处理SKOV3细胞,Western blot法检测Nanog蛋白表达。使用FSH处理si-Con或si-Nanog转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分组:0.1%DMSO+转染空白干扰RNA组(Con+si-Con)、FSH+转染空白干扰RNA组(FSH+si-Con)、0.1%DMSO+转染Nanog干扰RNA组(Con+siNanog)和FSH+转染Nanog干扰RNA组(FSH+si-Nanog)。使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测4组细胞的转移和侵袭能力,Western blot法分析4组细胞中Nanog蛋白表达。应用免疫组化法检测卵巢癌组织中Nanog蛋白表达情况。结果:卵巢癌细胞系Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达明显高于永生化和良性卵巢上皮细胞系(P0.05)。FSH上调Nanog表达以浓度和时间依赖的方式。对照组(Con+si-Con,Con+si-Nanog)的迁移和侵袭能力明显低于实验组(FSH+si-Con,FSH+si-Nanog)(P0.05)。卵巢癌组织中Nanog表达水平明显高于正常卵巢组织(P0.05),Nanog蛋白表达与卵巢癌转移相关。结论:Nanog是FSH重要的下游靶基因,介导FSH诱导的卵巢癌转移作用。 相似文献
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乙二醛酶Ⅰ在子宫内膜癌组织和细胞中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 了解乙二醛酶Ⅰ(GLO-Ⅰ)在子宫内膜癌组织和细胞中的表达情况,探讨GLO-Ⅰ对子宫内膜癌细胞增殖与凋亡的影响. 方法应用免疫组化抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)法检测子宫内膜癌(29份)、正常子宫内膜(19份)组织中GLO-Ⅰ蛋白的表达,紫外分光光度计检测子宫内膜癌及其癌旁组织、正常子宫内膜组织中GLO-Ⅰ的活性.GLO-Ⅰ小分子RNA(siRNA)转染子宫内膜癌细胞株lshikawa细胞后,采用蛋白印迹法及逆转录(RT)-PCR技术分别检测其GLO-Ⅰ蛋白及mRNA的表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪分别检测其细胞增殖及凋亡情况.结果 (1)子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ蛋白的阳性表达率为76%(22/29),正常子宫内膜组织为0/19,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).正常子宫内膜、子宫内膜癌癌旁组织中GLO-Ⅰ活性(分别为1.1、0.8 IU/mg)较弱,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性(92.3 IU/mg)明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).(2)Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ silRNA后,其GLO-Ⅰ mRNA的表达水平为0.25±0.06,低于阴性对照(转染与目的基因无关的siRNA)的0.93±0.10,差异有统计学意义(P<0.01);其GLO-Ⅰ蛋白的表达水平为0.38±±0.06,低于阴性对照的0.94±0.13,差异也有统计学意义(P<0.01).(3)Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ siRNA后,其细胞增殖能力与空白对照(仅加转染试剂)比较明显降低(P=0.028);其细胞凋亡率为(6.7±0.8)%,高于阴性对照的(1.2±0.4)%和空白对照的(1.4±0.4)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 GLO-Ⅰ在子宫内膜癌组织和细胞中均呈过度表达,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性异常升高.抑制GLO-Ⅰ基因表达可促进子宫内膜癌细胞凋亡,并抑制其增殖. 相似文献
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目的:探讨促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH antagonist)方案超促排卵过程中推迟人绒毛膜促性腺激素(HCG)扳机时机对胚胎质量及妊娠率等的影响。方法:回顾性分析2015年1月至12月在我院接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的不孕症患者183例,均采用GnRH拮抗剂促排方案,于月经周期第2天启用促性腺激素(Gn),当有卵泡平均直径达到14mm,加用GnRH拮抗剂。按照传统HCG扳机时机(有3个≥17mm卵泡)与推迟1天扳机分为2组:早期HCG组(149例)和晚期HCG组(34例),比较两组数据。结果:HCG扳机日,晚期HCG组≥15mm的卵泡数明显多于早期HCG组(P=0.026)。晚期HCG组Gn使用天数及Gn使用总量均明显高于早期HCG组(P=0.000,P=0.012)。妊娠结局方面,晚期HCG组较早期HCG组具有更高的妊娠率(76.00%vs 50.45%,P=0.020)。两组受精率、继续妊娠率、流产率、异位妊娠率均无显著差异(P0.05)。结论:GnRH拮抗剂促排方案中,适当推迟HCG扳机时间不影响胚胎质量和妊娠率,可以推行。 相似文献