NO吸入对肝移植急性肺损伤大鼠肺组织iNOS、IL-1β及IL-6的影响

【目的】观察一氧化氮(NO)吸入对肝移植急性肺损伤大鼠肺组织诱导型NO合酶(iNOS)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平的影响与意义。【方法】选用SD大鼠24只,按随机数字表法分为对照组(C组)、自体原位肝移植组(M组)和NO吸入组(T组),每组8只。对照组开腹游离肝叶后即关腹,后两组行大鼠自体原位肝移植。对照组及自体原位肝移植组术后于室内吸空气,NO吸入组术后即放入特制的密封盒内(NO体积分数为20×10-6)。手术结束后8 h行肺脏病理检查,测定肺组织干湿质量比(W/D),并检测iNOS、IL-1β、IL-6水平。【结果】①C组肺组织结构基本正常,M组肺组织炎症损伤明显,T组肺组织炎症损伤较M组明显减轻。②M组肺组织W/D明显高于对照组,T组则低于M组,但仍高于对照组。③M组iNOS活性及蛋白表达、IL-1β、IL-6水平较C组明显升高,T组则较M组降低,但仍高于C组。【结论】肝移植术后NO吸入可抑制肺组织iNOS活性及蛋白表达,降低IL-1β、IL-6水平,肺组织病理损伤减轻,干湿质量比下降。     

自体原位肝移植大鼠围术期急性肺损伤的研究

目的 建立SD大鼠自体原位肝移植模型,动态观察自体原位肝移植围术期肺损伤特点.方法 选取健康SPF级SD大鼠40只,随机分为假手术对照组(S组,n=8)和模型组(M组),M组进行自体原位肝移植手术,根据肝脏再灌注时间不同再分为4个亚组.S组在麻醉后只进行开腹和血管的分离,不进行肝脏的阻断和灌注.分别在肝脏再灌注后4、8、16、24 h采集动脉血和肺组织标本,分别用于检测动脉氧分压、肺组织病理学.结果 与S组[(120.75 ±6.58) mm Hg(1 mmHg =0.133 kPa)]比较,M2组(97.50±8.22)mm Hg动脉氧分压降低(P＜0.05),其余各组差异无统计学意义(P＞0.05).M组肺组织镜下见大量的炎症细胞浸润,肺泡腔内渗出明显,肺泡腔狭窄,肺间质明显出血充血,肺泡间隔明显增厚,肺实质所占的比例显著增加;这些病理改变在M2组(肝脏再灌注8h)达到高峰,然后逐渐好转.结论 自体原位肝移植后SD大鼠存在肺损伤,在肝脏再灌注后8h达到高峰.     

大鼠自体原位肝移植后脑组织超微结构的改变及氧化应激特点

目的 观察自体原位肝移植后SD大鼠脑组织病理学改变、氧化应激与炎症反应特点. 方法 雄性SD大鼠24只按随机数字表法分为对照组(C组)、再灌注6h模型组(M1组)及再灌注24 h模型组(M2组),每组各8只.对照组在麻醉后只进行开腹和血管分离,不进行肝脏的阻断和灌注;M1、M2组则进行自体原位肝移植手术,并分别在肝脏再灌注后6h或24 h时取脑组织,透射电镜观察其病理形态学特点,ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)水平,分光光度计方法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)含量. 结果 在肝脏再灌注以后,M1、M2组大鼠脑组织超微结构电镜下显示为:神经元变形,胞核变形、表面呈锯齿状,核内异染色质增多,核膜及核周隙模糊不清,核仁网状结构消失,线粒体呈气球样肿胀,嵴减少或消失等,且该损伤性改变以M2组更为显著.肝脏再灌注后大鼠脑组织氧化损伤及炎症反应指标都有明显改变,与C组比较,M2组SOD明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05); M1组CAT明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);M1组MDA、IL-6、IL-10、TNF-a明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 SD大鼠经自体原位肝移植后,脑组织结构出现明显的病理学改变,同时伴有显著的氧化损伤及炎症反应.     

大鼠自体原位肝移植24h后肝内硫氧还蛋白-2的表达和抗氧化能力的变化

【目的】探讨线粒体硫氧还蛋白(Trx2)和抗氧化能力在原位自体原位肝移植(AOLT)大鼠后24 h内肝脏组织动态变化。【方法】将40只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(Group S,n=8)、肝移植后4 h组(LTR 4h group,n=8),肝移植后8 h组(LTR 8h group,n=8),肝移植后16 h组(LTR 16h group,n=8)和肝移植后24 h组(LTR 24h group,n=8)。S组只进行开腹和血管的分离,各肝移植组接受自体原位肝移植(AOLT),光镜下观察各组大鼠肝脏病理学改变,Suzuki病理学评分改变,实验室检测活性氧水平、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽(GSH)活性、总抗氧化能力(TOC)变化、及Western Blot法检测Trx-2的蛋白表达的变化。【结果】自体肝移植引起了大鼠明显的肝脏损伤,组织病理评分在移植后4 h明显升高并达峰值,持续到移植后24 h(P<0.05,vs.group S),但24 h较4 h有明显改善(P<0.05 vs.group LTR4h);O2.、.OH和MDA的生成在4 h到16 h增加明显(1.6～2.0倍),MDA水平发生与之一致的时间变化(P<0.05 vs.group S);抗氧化酶活性在肝移植后4 h和8 h下降明显,SOD、CAT和GSH活性下降达30%(P<0.05 vs.group S),TOC活性下降达70%(P<0.01 vs.group S)。而相对氧化/抗氧化指标来讲,移植后肝脏组织内Trx-2蛋白表达增高的速度较慢,4 h开始表达增加(P<0.05 vs.group S),而直到24 h才达到蛋白表达峰值(～2.0倍)。【结论】移植后肝脏发生损伤,并逐渐加重而后逐渐恢复,损伤程度与活性氧水平和抗氧化酶活性变化趋势相一致;Trx-2的表达上调有利于抗氧化酶合成和提高抗氧化能力。     

再灌注前干预肥大细胞功能对大鼠肠缺血再灌注后早期肝损伤的影响

 目的：探讨肠缺血后再灌注前干预肥大细胞功能对SD大鼠继发肝脏损伤的影响及机制。方法：35只大鼠随机分成5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、缺血再灌注＋色甘酸钠组（IR+C组）、缺血再灌注＋酮替芬组（IR+K组）和缺血再灌注＋compound 48/80 组（IR+CP组）。复制大鼠肠缺血再灌注模型,IR+C、IR+K和IR+CP组分别在再灌注前5 min经尾静脉给予相应药物,S和IR组给予等量生理盐水。再灌注4 h后处死大鼠,观察各组肝脏病理变化及评分,测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性、天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性和组胺含量,检测肝脏乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素8（IL-8）水平。结果：与S组相比,IR组肝脏病理损伤明显（P<0.05）,血清ALT、AST水平、组胺含量、肝LDH活性、MDA、TNF-α、IL-8水平升高,SOD活性减弱（P<0.05）。与IR组相比,IR+C和IR+K组肝脏损伤减轻,以上指标呈相反趋势（P<0.05）,IR+CP组则加重肝损伤及恶化检测结果（P<0.05）。结论：再灌注前抑制肥大细胞功能可以减轻肠缺血再灌注后早期肝脏损伤,其机制可能与组胺释放、氧化损伤和炎症反应有关。     

大鼠自体原位肝移植肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6的表达

[目的]观察大鼠白体原位肝移植围术期肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6基因表达和水平的变化.[方法]选取健康SPF级SD大鼠30只,随机分为假手术对照组(S组,n=6)和移植(肝脏再灌注)后4、8、16、24h组(M4、M8、M16和M24组,每组n=6).观察肺组织病理损伤,RT-PCR检测肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6基因表达、ELISA分析肺组织匀浆TNF-α、IL-1β和IL-6水平.[结果]①病理学检查:假手术组肺组织结构基本正常,移植组表现为肺问质明显出血、充血,中性粒细胞浸润显著增多,以肝脏再灌注后8h最为明显.②与S组相比,M4、M8、M16、M24组肺含水率显著升高,TNF-α、IL-1β及IL-6的基因表达均显著上调(P＜0.05),在肝脏再灌注8h达到峰值.③与S组相比,M4、M8、M16、M24组肺组织匀浆TNF-α、IL-1β及IL-6水平显著升高(P＜0.05);TNF-α、IL-1β在肝脏再灌注8h达到峰值,而IL-6则在肝脏再灌注后16 h达到峰值.[结论]大鼠自体原位肝移植围术期肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6浓度显著升高,基因表达水平增高,可能与围术期发生急性肺损伤有关.