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目的建立Spyda基因过表达转基因小鼠品系用于深入研究Spyda基因的功能。方法利用Gateway技术构建Spyda表达载体,通过DNA显微注射的方式获得Spyda基因过表达的首建鼠。首建鼠与野生型鼠杂交,所得子代中的阳性鼠同窝交配,已传3代以后的阳性小鼠经SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测外源基因的起始模板量,通过与杂合子比较来预测小鼠的基因型,再用传统育种方式验证SYBR Green实时荧光定量PCR的结果。结果获得7只首建鼠,通过与野生型鼠杂交获得阳性子代,进行同窝交配,传至第3代,经实时荧光定量PCR方法筛选出4只纯合子的小鼠,经测交验证,其与正常小鼠交配所生的后代均为阳性,证明实时定量PCR的结果是正确的。建立了2个独立的Spyda转基因小鼠纯合子品系。结论建立了稳定遗传的纯合子Spyda基因过表达转基因小鼠品系,可作为工具鼠进一步深入研究Spyda基因的功能。 相似文献
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目的 检测不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织中差异微小RNA(miRNA) hsa-miR-125a-5p及其可能靶基因基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达，探索hsa-miR-125a-5p与URSA发病的可能关系。方法 选取2020年1月至2021年10月于北京市海淀区妇幼保健院诊治的25例URSA患者为研究对象(URSA组),同期28例正常早孕妇女作为对照(对照组)。采用实时荧光定量PCR方法检测两组绒毛组织中hsa-miR-125a-5p的相对表达量和MMP-2 mRNA水平；采用免疫组化方法检测MMP-2的蛋白水平。结果 URSA组绒毛组织hsa-miR-125a-5p的相对表达量显著高于对照组[(1.54±0.59) vs.(0.43±0.12),P<0.05],而MMP-2 mRNA[(0.22±0.21) vs.(2.61±1.22)]和蛋白表达水平[(11.15±3.11) vs.(71.67±18.05)]均显著低于对照组(P<0.05)。结论 URSA患者绒毛组织中hsa-miR-125a-5p的表达异常，可能影响其靶基因MMP-2的正常表达，... 相似文献
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