编码大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的:构建Nogo受体(NgR)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行缺血性脑损伤的基因治疗研究奠定基础.方法:将前期构建的大鼠Nogo受体mRNA的shRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含NgR基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌.将pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Adeno-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、PCR产物测序及病毒滴度测定.结果:结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后的PCR及DNA测序结果证明Adeno-U6-shRNA包被成功.结论:成功构建了大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体Adeno-U6-shRNA,将为应用基因沉默技术研究NgR在缺血性脑损伤后神经再生中的作用奠定基础.     

腺病毒介导的NgR特异性RNA干扰对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经行为学的影响

目的 观察NgR特异性RNA干扰的重组腺病毒(Ad-shRNA-NgR)转染实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)大鼠脑组织后,EAE大鼠脑内NgR表达及神经行为学的情况.方法 Wistar大鼠108只,采用随机数字表法分为正常对照组(n=27)、空白对照组(n=27)、阴性对照组(n=27)、特异性RNAi组(n=27).造模后第7天,通过侧脑室对阴性对照组及特异性RNAi组分别注射Ad-shRNA-HK、Ad-shRNA-NgR,空白对照组以等量的PBS代替.注射后第7、14天,RT-PCR、免疫荧光染色观察脑组织中NgR的表达并行Koh神经功能评分.结果 特异性RNAi组大鼠脑组织中NgR mRNA的表达及NgR免疫荧光染色的IOD值:注射后第7天,较空白及阴性对照组均明显下降(P<0.01);注射后第14天,较该组注射后第7天时增高(P<0.05),但仍低于空白及阴性对照组(P<0.05).特异性RNAi组EAE的发病潜伏期延长(P<0.05),Koh神经功能评分降低(P<0.05),体质量无明显减轻.结论 腺病毒介导的NgR特异性RNAi可明显下调EAE大鼠脑组织中NgR的表达,改善EAE大鼠的神经行为.     

腺病毒介导Nogo受体特异性RNA干扰对大鼠脑缺血再灌注后轴突再生和神经行为的影响

目的 观察腺病毒介导Nogo受体特异性RNA干扰对大鼠脑缺血再灌注后轴突再生及神经行为的影响.方法 采用线栓法制作大鼠缺血再灌注模型,20只大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组和RNAi干预组、阴性对照组.术后24 h、9周行CT测量腩梗死体积,术后行神经功能评分,示踪技术观察皮质红核束和皮质脊髓束.结果 RNAi治疗后脑梗死体积较缺血再灌注组和阴性对照组没有明显变化(P＞0.05),而RNAi治疗3周后,神经功能有明显地恢复(P＜0.01),RNAi治疗9周后健侧皮质红核束发出侧枝支配病灶侧的数量明显增多(P＜0.01).结论 腺病毒介导NgR特异性RNAi可以增加来源于健侧皮质的轴突侧枝出芽,从而促进神经功能的恢复.     

中枢神经系统轴突再生障碍信号分子的研究进展

中枢神经系统损伤后轴突再生失败的关键性因素是微环境的抑制作用,目前已经证实存在于微环境的抑制分子主要是髓磷脂抑制分子,如Nogo-A、髓鞘相关糖蛋白和少突胶质细胞/髓鞘糖蛋白,现阶段对轴突再生抑制分子及其下游信号分子的进一步了解和证实为中枢神经系统损伤的治疗指示了新的思路和方向。本文着重对Nogo-A及其信号转导通路各个层面的研究概况作一综述。     

重组腺病毒Ad-shRNA-NgR在大鼠缺血脑组织的转染效率研究

目的探索用于RNA干扰的重组腺病毒Ad-shRNA-NgR转染大鼠缺血脑组织的适宜滴度。方法将低、中、高3种不同滴度(7.90×109、1.58×1010、3.16×1010pfu/ml)的重组腺病毒通过立体定位手术注射到大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)/再灌注模型大鼠(n=10)脑缺血区,于术后48 h和1周在荧光显微镜下观察各组大鼠脑组织中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达强度并估算转染效率,通过HE染色检测炎性反应。结果中滴度和高滴度注射组大鼠脑组织腺病毒转染效率相似,为60%～70%,明显高于低滴度注射组(P<0.01)。在各组脑组织切片中,仅高滴度注射组有明显炎症反应,血管周围可见淋巴和巨噬细胞浸润。结论中等滴度(1.58×1010pfu/ml)的腺病毒能高效、稳定、低毒地转染大鼠缺血脑组织,推荐用于脑缺血基因干预治疗的实验研究。     

血细胞对静脉溶栓治疗的急性缺血性卒中患者转归的预测价值

越来越多的研究表明,外周血细胞计数,包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、红细胞、血小板计数以及相关比值,与急性缺血性卒中患者静脉溶栓后的临床转归相关。因此,作为预测卒中患者转归的生物标志物,外周血细胞计数及相关比值具有重要的临床应用价值。文章对血细胞计数及相关比值对急性缺血性卒中患者静脉溶栓后转归的预测价...     

自发性脑出血继发脑室出血：病理生理学、影像学评价和治疗

脑室出血(intraventricular hemorrhage, IVH)约占所有脑出血的3%～5%, 可分为原发性和继发性。原发性IVH多由脉络丛血管或室膜下动脉破裂所致, 而继发性IVH是指自发性脑出血破入脑室, 患者预后较差。文章对继发性IVH的病理生理学机制、严重程度评估和治疗进展进行了综述。     

神经精神狼疮1例报告及文献复习

<正>神经精神狼疮(Neuropsychiatric systemiclupuserythematosus, NPSLE)是系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)累及中枢神经系统所致的神经精神表现。NPSLE发病机制复杂,临床表现多样,可为SLE患者首发症状,也可以在疾病晚期才出现中枢神经系统损害,是狼疮危象的主要死亡原因之一。现就我科收治1例神经精神狼疮患者报道如下。     

非感染性血栓性心内膜炎继发多脏器栓塞1例分析

非感染性心内膜炎包括风湿性心内膜炎、非细菌性血栓性心内膜炎、结缔组织病的心内膜炎、系统性红斑狼疮疣状心内膜炎、嗜酸细胞增多性心内膜炎等. 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)心脏瓣膜受累包括瓣膜增厚、狭窄、关闭不全和疣状心内膜炎等,以瓣膜增厚和关闭不全最常见. 多数患者是轻...