肝组织多药耐药基因高表达与结肠癌肝转移的相关性研究

目的　探索早期检测肝组织多药性耐药基因对结肠癌肝转移的预测价值。方法　取裸鼠 4 0只 ,用人结肠癌SW4 80细胞系制作裸鼠原位结肠癌肝转移模型。模型建立的第 10天肝活检取左右肝叶各2mm3 组织 ,用实时荧光定量PCR方法检测多药耐药基因 (multidrugresistancegene,mdr- 1mRNA)的表达 ;模型建立的第 5周观察裸鼠肝脏是否形成肉眼转移灶。结果　经实时荧光定量RT -PCR检测肝活检组织mdr- 1基因 ,在存活的 36只裸鼠中 2 2例高表达 ,平均CT值 (Cyclethreshold ,即反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数 )为 2 5 90 1,平均拷贝数为 4 2 7× 10 7/ugRNA ,并高表达的 2 2只裸鼠均有肉眼肝转移灶形成 (10 0 % ) ;mdr - 1基因低表达 (平均CT值 33 36 8,平均拷贝数 2 11× 10 5)及无表达的 14只裸鼠中 ,仅 1例形成肉眼肝转移灶 (7 1% ) ,其余 13例均无肉眼肝转移灶形成 (P <0 0 1)。结论　结肠癌肝活检肿瘤细胞mdr- 1mRNA基因高表达与异时的肝转移灶形成有明显的相关性 ,提示检测结肠癌肝组织多药性耐药基因的高表达可以预测异时的肝转移灶形成。     

腹腔镜肝囊肿开窗术17例分析

目的探讨腹腔镜肝囊肿开窗术的临床应用价值。方法采用腹腔镜行肝囊肿开窗术。结果17例均获成功,均痊愈。结论腹腔镜肝囊肿开窗术操作简单,创伤小,病人恢复快,术后并发症少,具有微创外科的特点,是目前最适合普及的治疗肝囊肿的腹腔镜手术。     

GDNF基因的克隆及重组质粒pAd-GDNF的构建

目的克隆大鼠胶质细胞源性营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)基因,构建重组质粒pAd-GDNF。并观察GDNF基因在3周龄大鼠卵巢的表达。方法从3周龄大鼠卵巢组织中提取总RNA,用PT-PCR方法扩增出两个分别约668bp、590bp的片段,并将其中约668bp的片段克隆到载体pAdTrack-CMV中,进行酶切鉴定和序列分析。结果证实成功克隆到大鼠GDNF基因。出生后发育期成年大鼠卵巢组织表达两种GDNF mRNA,其中长的mRNA片段强于短的片段。结论出生后发育期成年大鼠卵巢组织GDNF基因表达两种mRNA,可能主要以长片段GDNF mRNA发挥其生理作用;克隆到正确的大鼠GDNF基因。并构建出重组质粒pAd-GDNF,为下一步的研究打下基础。     

乳腺癌干细胞BCRP的表达及意义

目的探讨乳腺癌干细胞耐药蛋白BCRP(breast cancer resistance protein)的表达情况及意义。方法应用流式细胞分选技术从人乳腺癌组织中分离出乳腺癌干细胞和非干细胞,实时定量PCR(realtime-PCR)技术测定不同细胞亚群的BCRP表达情况。结果与乳腺癌非干细胞相比,乳腺癌干细胞的BCRP表达水平明显增强(P<0.01),并且化疗后干细胞比例增加(P<0.01)。结论乳腺癌干细胞可以通过高表达BCRP具有更强的化疗耐药性,是乳腺癌化疗失败和复发的关键因素之一。     

Dnmt1,Dnmt3a,Dnmt3b和HMT在不同结肠癌细胞系的表达及意义

目的:探讨不同结肠癌细胞系中表观遗传学酶谱的表达水平.方法:RT-PCR分别检测结肠癌细胞系HT-29、Lovo和Caco-2中Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b和HMT mRNA表达水平.结果:Dnmt3b mRNA在结肠癌细胞系HT-29、Lovo中高度表达,Dnmt1与HMT次之,Dnmt3a表达水平最低;Dnmt3b、Dnmt3a在不同结肠癌细胞系之间的表达水平存在显著的差异.结论:不同分化程度的结肠癌细胞系可能存在不同的表现遗传学发生机制;Dnmt3b在建立和维持结肠癌细胞系DNA甲基化模式中可能起更为重要的角色.     

过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子的表达

目的 观察过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4(KLF4)是否下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 体外培养人胃癌AGS细胞,分为4组:转染空质粒24 h对照组、转染空质粒48 h对照组、转染KLF4表达质粒24 h组、转染KLF4表达质粒48 h组.构建KLF4表达质粒,脂质体LipofectamineTM2000分别转染空质粒、KLF4表达质粒到AGS细胞,24、48 h后提取总RNA和蛋白,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot法分别检测KLF4和VEGF mRNA和蛋白水平的表达.结果 AGS细胞在24 h转染率为65%-75%,48 h转染率为40%～45%.实验组与对照组转染24、48 h后,KLF4 mRNA的表达量分别为:563.584±250.744比4.997±5.729(P＜0.05);351.852±212.439比2.4420±1.3770(P＜0.05).VEGF mRNA表达量分别为:0.008 929±0.003 810比0.002 294±0.000720(P＜0.05);0.018 375±0.008 263比0.002 193±0.001 698(P＜0.05);胃癌AGS细胞KLF4蛋白表达量显著性增加,相对应地VEGF蛋白表达水平显著性降低(P＜0.05).结论 体外胃癌AGS细胞过表达KLF4导致VEGF mRNA和蛋白表达下调,KLF4可能参与抑制调节胃癌AGS细胞VEGF的表达.     

Notch1在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌耐药的关系

目的 检测乳腺癌细胞株MCF-7与MCF-7/ADR的 Notch1 表达、成球能力、干细胞池比例及干细胞内Notch1的表达,探讨Notch1 在逆转乳腺癌化疗耐药中的意义.方法 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot 法检测乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADR 及表型为ALDH1+/CD44+/CD24- 乳腺癌干细胞中Notch1 的表达;无血清培养检测MCF-7及MCF-7/ADR 的成球能力;流式细胞仪检测MCF-7与MCF-7/ADR的干细胞比例并分选干细胞.结果 MCF-7/ADR的Notch1 的表达明显高于MCF-7(0.0748±0.0043比0.0461±0.0022,P＜0.05),微球体形成能力也明显高于MCF-7 (P＜0.05);流式细胞仪检测干细胞比例,MCF-7/ADR高于MCF-7(11.40％比1.89％);分选出的干细胞Notch1 的表达明显高于非干细胞(0.3096±0.0324比0.0428±0.0061,P ＜0.05).结论 Notch1 在乳腺癌及乳腺癌干细胞中高表达,干预Notch1 可能可以逆转乳腺癌治疗的耐药.     

氯化钆对肝脏缺血再灌注损伤中缺血肝叶Toll样受体2表达的影响

目的观察氯化钆(GdCl_3)对小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型中缺血肝叶Toll样受体2(TLR2)表达的影响,探讨枯否细胞(KC)参与肝脏缺血再灌注损伤的机制。方法实验小鼠(BALB/C)被分成氯化钆阻断组、非氯化钆阻断组和假手术组等3组。采用免疫组织化学法观察KC和TLR2阳性细胞的分布并分析两者的相关性。实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法定量检测缺血肝叶中TLR2 mRNA的表达。并检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶(pALT)、肿瘤坏死因子(TNF)-a水平。结果氯化钆阻断组小鼠肝脏KC被抑制,即缺血肝叶CD68染色阳性率下降(32．97±10．55 vs 185．65±21．88,P＜0．01),TLR2阳性细胞明显低于非氯化钆阻断组(75．74±17．44 vs 170．58±25．14,P＜0．01)),且CD68细胞变化与TLR2阳性细胞变化高度相关(r= 0．945,P＜0．01)。氯化钆阻断组小鼠缺血肝叶TLR2 mRNA表达明显低于非氯化钆阻断组(△Ct值：4．02±1．22 vs 1．05±1．02,P＜0．01,△Ct值越大表明基因表达水平越低),但均高于假手术组(act值：1．05±1．02,4．02±1．22．vs 5．08±1．36,P＜0．05)；门静脉血清TNF-a和pALT水平水平较非氯化钆阻断组下降[TNF-a：(84．45±14．73)ng/L vs(112．32±17．56)ng/L,P＜0．05；pALT：(435．89±78．37)U/L vs(890．21±272．91)U/L,P＜0．01],但均高于假手术组(P＜0．01)。结论在肝脏缺血再灌注损伤过程中,氯化钆可能通过抑制小鼠肝脏KC中TLR2的表达,降低KC分泌TNF-a而减轻肝功能损伤。     

小鼠内毒素肝损伤中TLR4及SOCS1/3 mRNA的表达变化

脂多糖(LPS)信号的转导在炎症反应过程中起重要作用.近年来发现Toll样受体4(TLR4)是LPS识别与信号转导过程中的重要受体[1].细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)可抑制多种信号通路,可能发挥负性调控作用[2].我们通过观察野生型小鼠(C3h/Heouj)内毒素肝损伤中TLR4及SOCS1/3 mRNA表达变化,并以TLR4缺损小鼠(C3h/Hej)为对照,探讨LPS肝损伤的信号通路及调控机制.     

Pin1和周期素D1在胰腺癌中的表达及其意义

目的:检测胰腺癌及癌旁组织中Pin1和周期素D1基因的表达,探讨Pin1在胰腺癌发病中所起的作用。方法:收集27例胰腺肿瘤组织及其相应的肿瘤旁组织标本,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RQ RT-PCR）检测胰腺良恶性肿瘤及肿瘤旁组织中Pin1和周期素D1 mRNA 的表达,运用Fisher精确概率分析两者之间的相关性及其与肿瘤临床分期和病理特征的关系。结果:7例胰腺囊腺瘤中周期素D1和Pin1的表达与肿瘤旁组织之间无显著性差异;而20例胰腺癌中周期素D1和Pin1的表达明显高于肿瘤旁组织［（2.78±1.02）vs.（4.36±1.27）和(5.48±1.69) vs. (9.97±1.86),P<0.05）］。Pin1和周期素D1与肿瘤的临床分期和病理分化程度无明显的相关（组间差异均为P>0.05）,但Pin1与周期素D1的表达有关（P<0.01）。 结论:胰腺癌中Pin1的过表达可促进周期素D1表达,由此诱导了肿瘤的发生;Pin1可能在胰腺癌中起着重要作用。