human NF-κB miRNA干扰载体的构建

目的:设计并构建针对胰腺癌基因治疗中最关键的靶基因人细胞核因子κB(human NF-κB)的miRNA干扰载体。方法:根据靶基因设计并合成miRNA oligo(引物设计软件),将oligo退火成双链,然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将双链的miRNA oligo插入到miRNA表达载体中,构建miRNA质粒,转化入感受态细胞DH5α,从转化平板分别挑取克隆,用载体通用引物进行菌落PCR筛选,筛选得到的阳性克隆进行测序,以验证重组克隆中插入片段序列是否与设计的oligo序列一致。结果:经过比对,重组克隆中插入片段序列与设计的oligo序列完全一致。结论:成功构建了针对靶基因human NF-κB的miRNA干扰载体,为进一步研究奠定了基础。     

ICR生长小鼠的能量需要研究

目的 探讨ICR生长小鼠的能量需要量，研究小鼠对不同能量水平的利用率。方法 采用蛋白质含量相同、5个能量水平的日粮饲喂ICR离乳小鼠，研究日粮能量与小鼠日增重、采食量、饲料消耗的关系，计算能量表观消化率。结果和结论 试验表明在日粮粗蛋白含量为20％，维生素、矿物质等营养物质满足小鼠生长需要的情况下，雌、雄小鼠分别对能量水平为16．02～17．57MJ／kg、16．02～16．82MJ／kg日粮的表观消化率较高，小鼠生长阶段日粮的适宜能量水平为15．23～17．57MJ／kg，以15．23～16．02MJ／kg为最佳含量。     

苦荞的HPLC指纹图谱分析

目的:建立苦荞的HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用岛津ODS柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈–水(含2%的醋酸),梯度洗脱,检测波长280 nm,流速:1 mL.min-1。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)版》,计算不同产地苦荞样品的HPLC指纹图谱的整体相似度。结果:共有12个共有峰,16批被测样品的色谱指纹图谱的整体相似度在0.927～0.999。结论:该指纹图谱检测方法简便、重现性好,可作为苦荞药材质量控制的重要方法。     

停用氯喹12年抗氯喹恶性疟原虫对氯喹抗性的变化

由于海南省恶性疟原虫对氯喹普遍产生了抗性,所以于1979年开始,在全岛范围内停止使用氯喹防治恶性疟。为了了解停止使用氯喹后恶性疟原虫对氯喹抗性的消长情况,作者以该省乐东县为观察点,于1981—1991年间,每隔2—3年测定1次恶性疟原虫对氯喹的敏感性。结果发现,停止使用氯喹后,恶性疟原虫对氯喹的抗性呈逐渐降低趋势,体外法测得的抗性率由1981年的97.9％,降至1991年为60.9％(P<0.001),完全抑制裂殖体形成的平均剂量由1981年的10.46pmol/μl,降至1991年的3.02pmol/μl(P<0.001),需用大剂量(6.4pmol/μl)才能完全抑制裂殖体形成的病例比例,由1981年的83.3％,降为1991年的17.4％(P<0.001),而小剂量(1.6pmol/μl)即可抑制的病例比例,却由1981年的4.2％增加到1991年的60.8％(P<0.001)。体内法测得的抗性率,由1981年的84.2％,降为1991年的40％(P<0.001),RⅡ和RⅢ占抗性病例比例,由1981年的59.4％,降至1991年的37.5％(0.02>P>0.01)。     

云南南部恶性疟原虫对咯萘啶敏感性的纵向监测

目的：了解恶性疟原虫对咯萘啶敏感性的变化，以指导合理用药。方法：采用ＷＨＯ体内四周法及体外微量测定法，在云南南部勐腊县进行敏感性纵向监测。结果：１９８４－１９８５年和１９９５年体内观察分别为３６例和３９例，其平均退热时间分别为３２．７ｈ±１６．０ｈ和５６．２ｈ±２７．４ｈ。无性体转阴时间分别为６４．２ｈ±２２．９ｈ及５５．３ｈ±１１．８ｈ。复燃率分别为１５．２％（５／３３）和３７．５％（９／２４）。１９８８、１９９０、１９９２和１９９５年体外测得ＩＤ５０分别为１３．０ｎｍｏｌ／Ｌ、２０．０ｎｍｏｌ／Ｌ、３２．０ｎｍｏｌ／Ｌ和４０．０ｎｍｏｌ／Ｌ。ＩＤ９５依次为４８．０ｎｍｏｌ／Ｌ、１３６．０ｎｍｏｌ／Ｌ、３２５．０ｎｍｏｌ／Ｌ和３３０．０ｎｍｏｌ／Ｌ。抗性率分别为０、８．８％、１３．８％及３６．４％。结论：当地恶性疟原虫对咯萘啶的敏感性呈下降趋势。     

云南省恶性疟原虫对青蒿素类药物及咯萘啶与氯喹敏感性的体外测定

目的 :了解恶性疟原虫对青蒿素类药物及咯萘啶与氯喹等抗疟药的敏感性。方法 :采用Rieckmann体外微量法检测。结果 :滇东南、滇南、老挝、滇西及缅甸恶性疟原虫对氯喹的抗性率为79%— 96% ,半数抑制量 ( ID50 )为 12 2— 2 4 0 nmol/L;对咯萘啶的抗性率为 2 0 %— 35% ,ID50 为16— 32 nmol/L ;来自老挝感染的恶性疟原虫对青蒿素类药物 (青蒿琥酯 ,还原青蒿素、蒿乙醚、蒿甲醚 )均敏感 ,其他各地抗性率为5%— 16%。结论 :云南恶性疟原虫对氯喹普遍存在抗性 ,大部分原虫对青蒿素类药物及咯萘啶敏感 ,但也有部分原虫产生了低度抗性。     

云南省恶性疟原虫对氯喹、氨酚喹、哌喹、甲氟喹、奎宁敏感性的体外测定

目的：了解云南省恶性疟原虫对氯喹、氨酚喹、哌喹、甲氟喹及奎宁的敏感性。方法：采用Ｒｉｅｃｋｍａｎｎ体外微量法测定采自云南省瑞丽１１个县、市的恶性疟原虫对以上药物的敏感性。结果：云南省南部、东南部及西部恶性疟原虫对氯喹抗性率分别为９６．７％、７８．９％及９５．７％,ＩＤ５０依次为１２５ｎｍｏｌ／Ｌ、１３６ｎｍｏｌ／Ｌ、及１７６ｎｍｏｌ／Ｌ;对氯酚喹的抗性率分别为１００％、８５．３％及８８．９％,ＩＤ５０依次为５２ｎｍｏｌ／Ｌ、５４ｎｍｏｌ／Ｌ及７２ｎｍｏｌ／Ｌ;对奎宁均为敏感,ＩＤ５０依次为４８０ｎｍｏｌ／Ｌ、３５２ｎｍｏｌ／Ｌ及６０８ｎｍｏｌ／Ｌ。南部及东南部原虫对哌喹的抗性率分别为６８及８８ｎｍｏｌ／Ｌ;结论：云南省恶性疟原虫对４－氨基喹啉类药物普遍产生抗性,其抗性程度来自滇西及其相连的缅甸感染的疟原虫明显高于滇东南;对奎宁及甲氟喹敏感。氯喹、氨酚喹及哌喹目前已不适应于云南恶性疟的治疗     

云南省恶性疟原虫对氯喹、氨酚喹、哌喹、甲氟喹、奎宁敏感性的体外测定

目的：了解云南省恶性疟原虫对氯喹、氨酚喹、哌喹、甲氟喹及奎宁的敏感性。方法：采用Ｒｉｅｃｋｍａｎｎ体外微量法测定采自云南省瑞丽１１个县、市的恶性疟原虫对以上药物的敏感性。结果：云南省南部、东南部及西部恶性疟原虫对氯喹抗性率分别为９６．７％、７８．９％及９５．７％,ＩＤ５０依次为１２５ｎｍｏｌ／Ｌ、１３６ｎｍｏｌ／Ｌ、及１７６ｎｍｏｌ／Ｌ;对氯酚喹的抗性率分别为１００％、８５．３％及８８．９％,ＩＤ５０依次为５２ｎｍｏｌ／Ｌ、５４ｎｍｏｌ／Ｌ及７２ｎｍｏｌ／Ｌ;对奎宁均为敏感,ＩＤ５０依次为４８０ｎｍｏｌ／Ｌ、３５２ｎｍｏｌ／Ｌ及６０８ｎｍｏｌ／Ｌ。南部及东南部原虫对哌喹的抗性率分别为６８及８８ｎｍｏｌ／Ｌ;结论：云南省恶性疟原虫对４－氨基喹啉类药物普遍产生抗性,其抗性程度来自滇西及其相连的缅甸感染的疟原虫明显高于滇东南;对奎宁及甲氟喹敏感。氯喹、氨酚喹及哌喹目前已不适应于云南恶性疟的治疗     

恶性疟原虫对咯萘啶敏感性的体外微量测试方法

目的 研究并建立恶性疟原虫对咯萘啶敏感性的体外微量测试方法。 方法 研制咯萘啶涂药板和便于现场使用的培养基，先在实验室用体外连续培养的恶性疟原虫（FCC1/HN）测试，证明咯萘啶涂药板和培养基的效果稳定可靠后，在疟疾流行高峰季节赴海南省及云南省现场，取恶性疟现症病人血样，测试恶性疟原虫对咯萘啶的敏感性，并设体内四周法为对照。 结果 研制的咯萘啶涂药板及现场用的培养基效果稳定，咯萘啶涂药板4 ℃贮存有效期为6个月，4 ℃贮存的安瓿封装液体培养基及瓶装冰冻干燥培养基有效期分别为2个月和2年。经过多年现场测试，不但掌握了我国恶性疟原虫对咯萘啶敏感性的基线数据，同时还显示，在目前咯萘啶临床治疗效果仍较满意的情况下，恶性疟原虫对咯萘啶的敏感性已在逐渐降低，而且体外完全抑制裂殖体形成的平均药浓度提高了2～4倍。 结论 恶性疟原虫对咯萘啶的敏感性可用体外微量法测试，较体内四周法更为方便和敏感。     

ICR小鼠妊娠期能量需要研究

本试验采用头产ICR妊娠母鼠,饲喂5个能量水平的日粮.研究妊娠母鼠对能量的利用率,观察不同能量日粮对妊娠母鼠的日增重的影响,探讨妊娠期小鼠日粮的适宜能量水平.