体细胞克隆巴马小型猪部分生理生化指标的初步测定

目的探讨体细胞克隆巴马小型猪的生理生化指标特性。方法采用全自动血球计数仪和全自动生化仪,对体细胞克隆巴马小型猪血液的部分生理和生化指标进行测定和分析。结果体细胞克隆巴马小型猪生理生化指标和同期普通巴马小型猪没有显著差异,与人类大部分指标接近。结论体细胞克隆巴马小型猪和人类的生理生化特性有一定的相似性。     

小型猪克隆胚的构建及胚胎移植研究

目的建立小型猪的体细胞核移植技术,为开展转基因小型猪动物模型研究提供技术支撑。方法应用体细胞核移植技术,以小型猪胎儿成纤维细胞和枫泾猪耳成纤维细胞作为供体细胞进行体细胞核移植,并将两种重构胚混合后进行胚胎移植。结果两种供体细胞在体外发育能力上无显著差异（P〉0．05）;电融合后进行化学激活能部分提高囊胚发育率,但差异不显著（P〉0．05）。两种方法生产的小型猪和枫泾猪克隆胚胎混合后,经胚胎移植均能顺利产下4只健康后代。经微卫星亲缘关系鉴定,克隆猪lOO％与供体细胞相同,与代孕母猪无关。结论建立的克隆平台能够用于克隆猪的生产。     

蚜肠霉素处理及细胞传代数对小型猪体细胞核移植胚胎发育的影响

目的 为优化小型猪体细胞核移植技术（SCNT）技术,探讨供体细胞不同类型、不同传代数以及蚜肠霉素（Aphidicolin,APC）处理各供体细胞对重构胚体外发育的影响.方法 小型猪输卵管上皮细胞（OEC）,耳成纤维细胞（EFC）和卵丘细胞（CC）分别经血清饥饿或血饥饿后再使用0.1μg/mlAPC处理.核移植重构胚体外培养7d,以检测其发育能力.结果 OEC经APC处理后,重构胚的卵裂率和囊胚形成均显著高于仅血清饥饿处理组（61.82％ vs 56.25％,24.55％ vs 17.86％; P＜0.05）.以EFC为供体细胞,APC组重构胚卵裂率显著高于血清饥饿组（63.36％ vs 57.01％; P＜0.05）.注入CC,APC处理能显著提高重构胚的囊胚形成率（29.63％; P＜0.05）.三种细胞经APC处理,CC作为核供体,重构胚的卵裂率和囊胚形成率最高.三种细胞中,无论哪一种作为核供体,其传代数对重构胚的发育没有影响.结论 以CC为供体细胞,血清饥饿后再使用APC处理,更适合小型猪的体细胞核移植.     

5ml大管低温冷冻对猪精子顶体和质膜超微结构的影响

目的:探讨猪精液5ml大管冷冻法与颗粒法、0.25ml细管法冷冻后效果是否存在差异,以及5ml大管冷冻后猪精子的超微结构变化。方法:比较5ml大管、颗粒和0.25ml细管3种剂型冷冻猪精液的效果,利用透射电镜技术,观察5ml大管精液超低温冷冻前后猪精子的形态和超微结构。结果:5ml大管冷冻后精子活动率、存活率和顶体完整率与其它两种剂型差异不显著;5ml大管法冷冻后精子的顶体膜和质膜肿胀,大都呈泡状化,部分局部断裂。结论:猪精液5ml冷冻效果接近0.25ml细管和颗粒法冷冻效果,该冷冻方法仍对猪精子品质和超微结构造成一定的损伤。