开心散对小鼠抑郁样行为及海马中脑源性神经营养因子的影响

目的 观察开心散对悬尾模型小鼠行为学、脑内单胺类递质及海马中脑源性神经营养因子(BDNF)水平的影响,探究开心散的抗抑郁效果与海马中BDNF含量的相关性.方法 采用小鼠悬尾实验,观察不同剂量开心散对小鼠不动时间的影响;HPLC法测定脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)的含量;蛋白质印迹法检测小鼠海马中cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB、BDNF的表达;RT-PCR检测海马中BDNF mRNA的表达,Pearson相关性检验确定开心散的抗抑郁作用与海马中BDNF蛋白和mRNA水平的相关性.结果 开心散可缩短悬尾小鼠不动时间(P＜0.05),可增加小鼠脑内单胺类递质(DA、5-HT)和海马中CREB、p-CREB、BDNF的含量(P＜0.05),其抗抑郁作用与海马中BDNF水平呈良好相关性(蛋白质:r＝－0.694,P＜0.01;mRNA:r＝－0.547,P＜0.01).结论 开心散对小鼠的抗抑郁作用与海马BDNF水平呈正相关性,提示开心散可能通过增加海马中BDNF表达发挥抗抑郁作用.     

开心散对5-HT合成、代谢及重摄取的影响

目的中药复方开心散(KXS)抗抑郁作用明显。本文观察KXS对慢性应激大鼠脑匀浆液中色氨酸羟化酶(TPH)、5-羟色氨酸脱羧酶(AADC)、单胺氧化酶(MAO)、5-羟色胺转运体(SERT)等含量或活性的影响,探讨KXS对5-HT合成、代谢及重摄取的作用,明确KXS升高5-羟色胺(5-HT)含量的机制。方法选择Open-filed评分相近的雄性Wistar大鼠,采用孤养结合慢性不可预见性中等强度应激(CUMS)连续刺激3周造模,将CUMS大鼠随机分为模型组,KXS高剂量(676 mg·kg-1)组和KXS低剂量(338 mg·kg-1)组,连续灌胃给药3周,空白组和模型组动物给予生理盐水代替。给药结束后取脑组织匀浆,采用高效液相色谱法检测5-HT和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测色氨酸(Trp)和AADC的含量,Western blotting法检测TPH和SERT的含量,化学发光法检测脑线粒体MAO-A和MAO-B的活性。结果与模型组相比,KXS 676 mg·kg-1和338 mg·kg-1均能显著升高CUMS大鼠脑匀浆液5-HT的含量(P<0.01);但5-HT的代谢产物5-HIAA的含量没有显著升高,用化学发光法进一步检测了KXS给药3周后大鼠脑线粒体中MAO-A和MAO-B活性的影响,发现KXS组MAO-A和MAO-B的活性无明显降低;Western blotting法检测SERT的含量并对蛋白条带进行灰度分析发现,KXS不能显著升高大鼠脑匀浆液中SERT蛋白的含量;但是,KXS 676 mg·kg-1和338 mg·kg-1均能升高CUMS大鼠脑匀浆液中Trp(P<0.05),AADC(P<0.05)及TPH(P<0.01)蛋白含量。结论开心散对5-HT重摄取和代谢无抑制作用,其可能是通过促进5-HT合成,升高CUMS大鼠脑5-HT含量,进而发挥抗抑郁作用的。     

胡椒碱及其衍生物对小鼠的抗抑郁作用研究

目的以胡椒碱为母核进行结构修饰,观察胡椒碱及其衍生物5-(3',4'-次甲二氧苯基)-戊烯酰丙胺的抗抑郁活性。方法采用小鼠强制游泳实验、悬尾实验,观察胡椒碱和5-(3',4'-次甲二氧苯基)-戊烯酰丙胺对小鼠悬尾不动时间、游泳不动时间的影响。结果胡椒碱(10,20mg kg-1)和其衍生物5-(3',4'-次甲二氧苯基)-戊烯酰丙胺(10,20mg kg-1)给药后,均能明显缩短小鼠在行为学实验中的不动状态时间(P<0.01),且5-(3',4'-次甲二氧苯基)-戊烯酰丙胺较胡椒碱更为明显。结论胡椒碱和5-(3',4'-次甲二氧苯基)-戊烯酰丙胺具有明显的抗抑郁作用,且5-(3',4'-次甲二氧苯基)-戊烯酰丙胺的抗抑郁作用优于胡椒碱。     

基于慢病毒介导短发夹状RNA沉默BDNF基因研究开心散的作用机制

目的阐明脑源性神经营养因子(BDNF)在抑郁症发病中的分子机制以及经典复方开心散对RNA干扰(RNAi)沉默BDNF基因后的影响作用及分子机制。方法体外构建四条能表达针对BDNF外显子的shRNA干扰序列的慢病毒载体,将这四条慢病毒载体转染入自然表达BDNF的大鼠神经胶质瘤细胞(C6)中,通过qPCR和Western Blot筛选出BDNF基因敲减的最佳慢病毒干扰序列。将体外验证的慢病毒载体或阴性对照载体微量注射到SD大鼠双侧海马齿状回区,通过一系列行为学方法评价该模型,并研究开心散对其影响及作用机制。结果在C6细胞水平上,LVshBDNF-3的干扰作用最显著,有效敲减率达81%。在体内实验中有效沉默BDNF基因的最佳试验时间为10～33 d。微量注射慢病毒干扰载体10 d后,海马BDNF蛋白表达出现了显著的降低,同时糖水偏嗜度,open field评分水平活动和垂直活动均明显减少,而开心散能促进海马DG区BDNF沉默大鼠的体重增加和糖水摄入,显著提高水平运动和垂直运动得分,增加海马BDNF表达。Morris水迷宫实验显示沉默海马DG区BDNF基因能导致大鼠空间学习能力的显著下降,但其并不能减低大鼠的记忆能力;开心散能够明显修复RNAi所致的DG区BDNF沉默大鼠获得性学习能力的损伤,但对大鼠空间记忆的保留方面的损伤没有观察到明显的修复作用。结论海马BDNF表达与抑郁症呈负关联关系,内源性BDNF的减少能导致抑郁症的发生。开心散能够明显拮抗LVsh-BDNF-3沉默所致的低表达的海马BDNF水平,从而发挥抗抑郁作用并改善学习障碍。     

肝胆两益汤镇静催眠作用及其机制研究

目的:研究肝胆两益汤对小鼠的镇静催眠作用及其作用机制.方法:将KM小鼠随即分为正常组、安定组(1.3mg· kg-1)、百乐眠组(0.3g·kg-1组)和肝胆两益汤组(5.2,2.6,1.3,0.65 g·kg-1),按照10 mL·kg-1 ig给药,连续给药7d,正常组ig等量蒸馏水.观察肝胆两益汤对小鼠ip戊巴比妥钠阈剂量;采用转棒法观察肝胆两益汤对小鼠运动协调性的影响,观察肝胆两益汤对小鼠自主活动的影响;高效液相色谱法检测肝胆两益汤对小鼠脑组织中氨基酸类神经递质[天门冬氨酸(Asp),谷氨酸(Glu),甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)]含量的影响.结果:肝胆两益汤2.6,1.3g·kg-组能显著缩短小鼠入睡潜伏期、显著延长小鼠睡眠持续时间和显著减低小鼠自主活动次数(P＜ 0.05或P＜0.01),而对小鼠运动协调性没有明显的影响.肝胆两益汤5.2 g·kg-1组能显著升高小鼠脑组织中GABA,Asp,Glu的含量(P＜0.05或P＜0.01),2.6g·kg-1组能显著增加小鼠脑组织中GABA,Gly的含量(P＜0.05或P＜0.01),而1.3 g·kg-1组能显著升高小鼠脑组织中GABA的含量(P＜0.01).结论:肝胆两益汤有显著的镇静催眠作用,其作用机制可能与增加脑组织中抑制性氨基酸GABA和Gly的含量有关.     

肝胆两益汤镇静促眠作用研究

目的探究《辨证录》·肝胆两益汤的镇静促眠作用,为研发镇静促眠新药提供实验依据。方法小鼠分别灌胃给予肝胆两益汤(水提冻干粉)2500,1250和625 mg·kg-1.d-1,连续灌胃给药1周,用小鼠自主活动仪观察其对小鼠自主活动的影响;以腹腔注射戊巴比妥钠方法,观察肝胆两益汤对阈剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡潜伏期和睡眠持续时间的影响及其对戊巴比妥钠阈下剂量致小鼠入睡率的影响。结果与正常组相比,肝胆两益汤2500 mg·kg-1.d-1和1250 mg·kg-1.d-1均可显著减少小鼠自主活动次数(P<0.01)并且能够显著缩短阈剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡潜伏期(P<0.01)和显著延长小鼠睡眠持续时间(P<0.05,P<0.01),阈下剂量戊巴比妥钠试验显示,1250 mg·kg-1.d-1组可明显提高阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率(P<0.01)。结论肝胆两益汤2500 mg·kg-1.d-1和1250 mg·kg-1.d-1剂量对小鼠具有显著的镇静促眠作用。     

镇心省睡益智方对快动眼睡眠剥夺大鼠促醒和认知功能的影响

目的研究镇心省睡益智方（省睡方）的促醒和提高认知能力作用。方法采用改良多平台水环境法复制96h快动眼睡眠剥夺（REMSD）大鼠模型,利用旷场实验和Morris水迷宫实验评价省睡方的促醒作用和提高认知能力作用,并考察省睡方对REMSD大鼠一般情况和体质量的影响。结果本实验成功复制了96h大鼠REMSD模型,省睡方可提高REMSD大鼠水平和垂直得分;也可抑制REMSD导致的定位导航试验的潜伏期延长,并可明显增加穿越平台次数、平均速度、目的象限游泳路程和时间百分比。结论省睡方可提高REMSD大鼠兴奋性和探究活动,有促醒和提高REMSD大鼠认知功能的作用,其中最佳有效剂量为250mg·kg^-1。