p16真核表达载体的构建及其稳定表达的NIH3T3细胞株的建立

目的　构建pCR○R3 1 p16真核表达质粒 ,并建立其稳定表达的NIH3T3细胞株。方法　将人的p16cDNA亚克隆至pCR○R3 1,将该重组质粒转化DH5α感受态大肠埃希菌 ,筛选阳性克隆 ,进行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定及DNA测序 ,将已鉴定的pCR○R3 1 p16经脂质体介导转染至NIH3T3细胞中。结果　重组质粒双酶切后 ,出现约 80 0bp片段 ,提示p16cDNA片断已插入pCR○R3 1多克隆位点内 ,DNA测序显示p16cDNA按照正确方向和阅读框插入表达载体pCR○R3 1。通过pCR○R3 1 p16转染NIH3T3细胞 ,获得 10个G4 18抗性克隆 ,其中 2个为RT PCR阳性。结论　成功构建pCR○R3 1 p16真核表达载体并建立了其稳定表达的NIH3T3细胞株。为建立p16转基因鼠奠定基础。     

影响小鼠冻融精子体外受精率的主要因素探讨

目的分析影响小鼠精子冷冻成功的因素。方法用含3％脱脂奶和18％棉子糖的冷冻保护剂分别冷冻C57BL／6J、FVB／NJ、B6D2F1、KM和ICR小鼠精子。复苏后，评价小鼠精子的冷冻效果和受精能力。结果各品系小鼠精子冷冻前后的受精率不同；新鲜精子体外受精时，C57BL／6J、FVB／NJ、B6D2F1，KM和ICR五个品系的小鼠的受精率分别为81．4％、87．2％、90．4％、82．7％和79．4％而冻融精子的体外受精率分别为6．7％、46．0％、76．8％、59．2％和31．9％，差异极显著（P〈0．01）。结论遗传背景不同的小鼠品系，精子的受精能力及对冷冻的耐受能力不同。