自发性脾破裂1例

1病历摘要 男，40岁。因腹痛1h入院，于1h前用力大便时突然出现左上腹疼痛，并逐渐蔓延至全腹，呈持续性发作，伴恶心，无呕吐。查体：BP90／60mmHg，面色苍白，心肺无异常，腹膨隆，对称，未见肠型及蠕动波，无腹壁静脉曲张，腹肌紧张，肝脾肋缘下未触及，全腹压痛反跳痛，叩全腹呈鼓音，移动性浊音呈阴性，听诊肠鸣音弱。     

对肝癌患者组织中自然呈递的MAGE-3表位进行鉴定和定量分析

目的 尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-3表位进行检测和分析。方法 肝癌细胞和肝细胞取自同1名男性肝癌患者，弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段；利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-3理论侯选肽；检测MAGE-3mRNA的表达；肽混合物进行高压液相纯化分离和差异比较；筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱检定和定量分析；最后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应。结果 MAGE-3在肝癌细胞样品中表达阳性，在肝细胞中阴性；随后从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位抗原肽：FLWGPRALV（38—39拷贝／细胞），并从患者外周血中检测出针对该表位的特异性T细胞反应。结论 本实验从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位，并揭示了该表位的潜在应用价值，同时也初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点。而这些特点对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计是非常重要的。     

Sirt1在缺氧条件下对心肌细胞线粒体融合与分裂中的作用

目的 探讨缺氧条件下线粒体动态学变化及Sirt1在其中的作用.方法 ①收集2014年于新桥医院心血管外科行手术治疗的先心病患儿29例,其中非紫绀型先心病14例,紫绀型先心病15例,取术中所切除的右室流出道心肌组织为心肌标本,Western blot检测促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达情况.②将H9c2心肌细胞置入缺氧培养箱(94％N2,5％ CO2,1％ O2)中进行培养,检测缺氧0、2、4、8、12 h后促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1的表达水平.③将线粒体靶向质粒分别同空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒共转染H9c2细胞,常氧或缺氧培养箱中培养12 h后,激光共聚焦显微镜下观察线粒体融合、分裂情况;④运用腺病毒Ad-Sirt1和慢病毒Lv-Sh-Sirt1分别在H9c2细胞中过表达或干扰Sirt1后,将细胞置于缺氧培养箱中培养12 h,检测Drp1与Fis1表达水平;⑤分别转染空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒至H9c2细胞后,缺氧培养12 h,LDH试剂盒检测细胞毒性.结果 ①同非紫绀组相比,紫绀组心肌中Drp1与Fis1表达显著增高,Drp1相对灰度值:[(0.47±0.11)vs(0.76±0.12)、Fis1相对灰度值(0.53 ±0.02)vs (0.83 ±0.03),P＜0.05];②细胞水平研究结果显示Drp1与Fis1的蛋白表达随缺氧的时间的延长呈递增趋势;③激光共聚焦结果表明,Sirt1过表达后能够一定程度地缓解缺氧诱导的线粒体分裂(P＜0.05),而当Sirt1受到干扰后,缺氧所诱导的线粒体分裂水平明显提高(P＜0.05);④在缺氧条件下,过表达Sirt1能够抑制Drp1与Fis1蛋白表达水平(P＜0.05),而Sirt1被抑制后,Drp1与Fis1蛋白表达水平增加(对照组,过表达组,低表达组Drp1相对灰度值依次为[(0.47 ±0.02)vs(0.36±0.02) vs (0.78 ±0.04);Fis1相对灰度值依次为(0.64±0.02) vs (0.42±0.02) vs (0.80±0.04),P＜0.05];⑤Sirt1过表达能够降低缺氧刺激后H9c2心肌细胞的死亡率.结论 Sirt1可能通过调控促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达水平促进心肌细胞在缺氧条件下的适应.     

HLA-A2限制性NY-ESO-1b肽段诱导的CD8+ T细胞对稳定表达NY-ESO-1的HepG2肝癌细胞系的杀伤效应

目的:分析体外诱导的NY-ESO-1特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系的杀伤效应,为进一步分析NY-ESO-1蛋白作为疫苗用于治疗HCC的可能性提供实验支持.方法:从HLA-A2阳性的肝癌患者体内分离出外周血单个核细胞,用NY-ESO-1肽段体外诱导特异性杀伤性T淋巴细胞,并通过酶联免疫斑点法分析特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的HCC细胞系HepG2细胞的杀伤效应.结果:转染了NY-ESO-1的HepG2细胞(HLA-A2 )可有效地被NY-ESO-1157-165抗原肽诱导的特异性CD8 T淋巴细胞所识别.效应细胞中大量GrB的释放表明其对稳定转染了NY-ESO-1基因的HepG2细胞有很强的杀伤作用.结论:HepG2细胞中表达的NY-ESO-1蛋白可被此肝癌细胞有效地加工处理,而且HLA-A2限制性的抗原肽NY-ESO-1157-165也可被有效地提呈到细胞表面,从而被效应T细胞所识别.     

酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答试验条件的优化

目的：探讨酶联免疫斑点（ELISPOT）实验特异性及敏感性的因素，优化酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的实验条件。方法：HLA－A2阳性正常人的外周血单个核细胞在体外经流感病毒抗原肽诱导1周后，观察不同实验条件对酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的影响。结果：CTL诱导时，效应细胞先分离出CD8^＋T细胞组获得的Flu抗原特异的细胞频数要高于CTL诱导后再分离出CD8^＋T细胞组（P＜0．05），自体DC（树状细胞）作APC（抗原提呈细胞）比自体CD8^-PBMC作APC，CTL的诱导效率高且特异（P＜0．05）；使用细胞因子组合（IL－7＋IL－2＋IL－6）优于单纯使用IL－2。CTL行ELISPOT检测时，T2－2细胞较T2－1细胞具有更强抗原提呈功能，增加Flu抗原特异的CD8^＋T细胞频数（P＜0．05）。结论：优化了酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的试验条件，优化的方法在临床肿瘤疫苗的研究中具有应用价值。     

CD28协同刺激分子对T细胞受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响

目的：分析anti-TCRαβmAb anti-CD28mAb诱导小鼠胸腺淋巴细胞不同亚群的凋亡及凋亡程度，分析CD28协同刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响。方法：新鲜分离胸腺细胞，加入anti-TCRαβmAb-anti-TCRαβmAb anti-CD28mAb等培养20h，进行多重染色，流式细胞仪分析。结果：与胸腺细胞自发凋亡的结果相比较；（1）双信号刺激可明显增加胸腺细胞凋亡的数目，尤其是CD4^ CD8^ 胸腺细胞的凋亡数目。（2）凋亡的CD4^ CD8^ 亚群，CD4^ CD8^-亚群细胞表面CD28的表达均增多。结论：CD28共刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响与细胞的成熟程度有关，CD28共刺激分子能明显增强不成熟皮质胸腺细胞的凋亡。     

NY-ESO-1和MAGE-A3抗原肽诱导肝癌患者的免疫应答研究

目的利用合成的HLA-A02限制性NY—ESO-1 p157—165或MAGE—A3p271—279抗原肽,体外通过抗原递呈细胞诱导HCC患者外周血T淋巴细胞,从而成功诱导出特异性CD8^＋T淋巴细胞免疫应答。方法通过SSP方法筛选20例HLA—A＊02的HCC患者的HLA亚型;通过逆转录多聚酶链反应和测序分析NY—ESO-1和MAGE—A3在肝癌组织中的表达以及多肽表位密集区的核苷酸变异状况;体外用细胞因子培养HCC患者外周血来源的树突状细胞（DC）;人工合成HLA—A＊02限制性NY—ESO-1p157—165或MAGE—A3 p271—279多肽,直接或用去除CD8^＋T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外同T淋巴细胞孵育16d后,利用Elispot、细胞内细胞因子染色和四聚体实验检测T细胞免疫应答。结果20例HLA—A＊02患者中,NY-ESO-1mRNA阳性患者为11例,MAGE—A3mRNA阳性患者12例。中国HCC患者表达的NY—ESO-1和MAGE—A3序列高度保守。经多肽直接或用去除CD8^＋T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外活化外周血T淋巴细胞,4例（36．4％）NY—ESO-1阳性HCC患者以及4例（33．3％）MAGE．A3患者产生针对多肽特异性的CD8’T细胞免疫应答。不同HLA—A＊02亚型HCC患者可产生针对NY—ESO-1p157—165或MAGE—A3p271—279抗原肽的免疫应答。结论NY—ESO-1p157-165或MAGE—A3p271—279抗原肽可以诱导出针对抗原肽的特异性CD8^＋T淋巴细胞免疫应答。提示HLA—A＊02限制性的NY-ESO-1 p157-165或MAGE—A3p271—279抗原肽可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗。     

急性有机磷农药中毒误诊3例分析

现对我院误诊的有机磷农药中毒3例分析如下。     

肌萎缩侧索硬化99例诊断过程分析

目的探讨影响肌萎缩侧索硬化 (ALS)诊断过程及误诊的主要相关因素 ,从而寻找可能的解决办法。方法回顾性分析 1999— 2 0 0 3年我院收治的 99例ALS患者 ,对其临床特点及诊断过程进行统计学分析。结果患者平均确诊时间为 (13 1± 7 5 )个月 ,肌电图检查的时间与确诊时间正相关。患者来我院之前的误诊率为 5 8 6%,最常见的误诊疾病为颈椎病。 40— 5 9岁年龄段患者的误诊率要高于其他年龄段 ,以上肢和球部症状起病患者的误诊率低于以下肢症状起病患者。早期行颈椎MRI检查的患者误诊率偏高。结论导致ALS患者误诊的原因 ,主要是医生对此病认识不足、对影像和电生理检查结果的错误解释等。     

对等设计微型甲瓣整形性修复指尖毁损伤的疗效分析

目的探讨对等设计微型甲瓣整形性修复手指尖毁损伤的临床疗效。方法病例系列报告。纳入2015年5月—2020年5月海军第971医院及青岛市市立医院收治的应用对等设计微型甲瓣进行整形性修复的手指尖毁损伤患者56例(56指)。56例患者中, 男36例, 女20例, 年龄30～50(40.2±5.4)岁;拇指指尖毁损20例, 示指指尖毁损17例, 中指指尖毁损10例, 环指指尖毁损9例;门挤压伤36例、机器挤压伤20例。指尖软组织缺损范围为0.60 cm×1.00 cm～0.80 cm×1.50 cm, 甲床缺损0.40 cm×0.70 cm～0.60 cm×0.80 cm。受伤至手术时间为2～7(4.8±1.4)h。对等设计微型甲瓣的大小为0.71 cm×1.22 cm～0.88 cm×1.71 cm。记录手术情况及术后并发症, 计算甲瓣成活率。术后定期随访, 记录指甲生长时间, 观察手指外观及质地;按照Zook甲床修复评定标准评价指甲修复情况, 记录Semmes-Weinstein触压觉、两点分辨觉;应用中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准评价手术疗效。结果所有患者手术顺利, 手术时...