P38MAPK信号通路在大鼠脓毒症致急性肺损伤中的作用及机制研究

目的探讨P38MAPK信号通路在大鼠脓毒症致急性肺损伤中的作用及机制研究。方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、P38MAPK抑制剂组,每组10只。通过盲肠结扎穿刺术(CLP)建立大鼠脓毒症致急性肺损伤模型。予以P38MAPK抑制剂组尾静脉注射SB203580,注射后行CLP。造模后24h处死大鼠,观察大鼠肺病理组织学变化、肺湿/干比重值(W/D)、检测肺组织MDA、SOD含量、通过RT-qPCR和Western blot检测肺组织P38、P-P38的表达。结果模型组可见肺泡结构严重破坏,肺泡内可见出血、渗液,大量炎性细胞浸润。P38MAPK抑制剂组大鼠肺组织病理损伤较模型组轻(P<0.05)。模型组肺组织MDA较假手术组和P38MAPK抑制剂组高(P<0.05);模型组肺组织SOD较假手术组和P38MAPK抑制剂组低(P<0.05);模型组W/D较假手术组升高(P<0.05),P38MAPK抑制剂组W/D较模型组降低(P<0.05)。与假手术组相比,模型组肺P38 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),P-P38蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,P38MAPK抑制剂组P38 mRNA及蛋白表达水平降低(P <0.05),P-P38蛋白表达水平降低(P <0.05)。结论抑制P38MAPK信号通路可以减轻大鼠脓毒症致急性肺损伤。     

辅酶 Q10对脓毒血症休克大鼠血管平滑肌细胞功能的影响

目的探讨辅酶 Q10对脓毒血症休克大鼠血管平滑肌细胞功能的影响及其作用机制研究。方法采用 SD大鼠尾静脉注射脂多糖( LPS)的方法建立脓毒症休克动物模型,分离取出主动脉, 0.2%胶原酶消化分离平滑肌细胞( SMCs),自然纯化及差速贴壁纯化血管平滑肌细胞,将分离后的 SMC分别接种到 96孔板中,分为 4组,分别为正常对照组、正常对照组 +辅酶 Q10、LPS组、 LPS+辅酶 Q10组,分别检测 4组的增殖和氧化应激产物产生情况,在 6、12、24、48 h后分别检测正常对照组、正常对照组 +辅酶 Q10、LPS组、 LPS+辅酶 Q10组 SMCs丙二醛水平,在 48 h后检测 α-肌动蛋白( α-actin)、骨桥蛋白( OPN)的相对表达量。结果随时间推移, LPS组中 SMC细胞凋亡和氧化应激产物均较正常对照组增多,在 48 h时达到峰值,分别增多 11.4倍和 5.6倍; LPS+辅酶 Q10组中氧化应激产物较 LPS组减少近 50%;在 48 h时辅酶 Q10在正常培养环境下对 SMC的 α-actin、OPN蛋白的相对表达量差异无统计学意义( P>0.05),而对脓毒症休克 SD大鼠分离的 SMC可以明显减低氧化应激产物的生成及上调 α-actin蛋白的相对表达量近 1.57倍,下调 OPN蛋白的相对表达量 1.17倍。结论由 LPS所致的脓毒症休克的发病机制与血管中膜平滑肌细胞表型改变密切相关,辅酶 Q10可明显减低氧化应激产物的生成及上调 α-actin蛋白的相对表达量,缓解了因 LPS所致脓毒血症休克的血管病理化转变。收缩型平滑肌细胞是正常情况下血管壁的重要组成部分,而疾病病理血管则表现为合成型,为脓毒血症休克的病理性血管形成提供理论基础。     

原花青素对高糖环境下大鼠内皮祖细胞血管内皮生长因子受体2及其传导通路的影响

目的探讨高糖环境下原花青素(OPC)对体外培养的大鼠内皮祖细胞血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)及其下游相关通路的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离大鼠骨髓内皮祖细胞(EPC);分别检测正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)培养的EPC增殖和氧化应激产物产生情况,再通过在不同原花青素浓度下检测各时间点EPC增殖的方法,筛选出最佳原花青素浓度(30 mg/L);分别用Matrigel基质胶检测正常糖+OPC组、正常糖组、高糖+OPC组、高糖组EPC成管能力;最后在1、3、5、7天分别检测正常糖+OPC组、正常糖组、高糖+OPC组、高糖组EPC的丙二醛水平以及VEGFR-2、p-AKT、核因子κB(NF-κB)和核因子κB抑制蛋白α(IKB-α)的相对表达量。结果随时间推移,高糖组中EPC细胞凋亡和氧化应激产物均较正常糖组逐渐增多;正常糖+OPC组、正常糖组EPC成管数目无明显差异,高糖+OPC组成管数目较高糖组明显增多;在1、3、5、7天时OPC在正常糖浓度下对EPC产生的氧化应激产物及VEGFR-2、p-AKT、NF-κB和IKB-α蛋白的相对表达量没有显著影响,而在高糖环境下可以明显降低氧化应激产物的生成及上调VEGFR-2、p-AKT和NF-κB蛋白相对表达量,下调IKB-α蛋白相对表达量。结论原花青素可能通过缓解高糖环境对EPC的氧化损伤作用,上调内皮祖细胞VEGFR-2及其下游通路蛋白表达,进而促进细胞增殖。     

氧化应激产物对内皮祖细胞的影响

内皮祖细胞（endothelial progenitorcells,EPCs）是干细胞领域的研究热点之一,其可以分化成熟为内皮细胞,参与血管形成及血管内皮损伤后修复,EPCs内活性氧类（Reactive oxygen species,Ros）生成失衡,将导致正常EPCs生长周期紊乱,过多的ROS甚至诱导其凋亡。虽然近年来有关EPCs体外培养及ROS通过细胞信号通路诱导EPCs凋亡的研究已经取得很大进展,但仍有很多问题有待进一步解决,本文主要对EPCs的生物学特性、EPCs相关的ROS增多机制、氧化应激信号通路对EPCs功能影响等问题进行综述。