木瓜蛋白酶与石膏制动建立兔膝骨关节炎模型的比较

目的 比较木瓜蛋白酶关节腔注射与关节石膏伸直位制动建立兔膝骨关节炎模型的效果.方法 将21只实验兔采用随机区组分组法分为正常组、木瓜蛋白酶组及石膏组,每组7只.木瓜蛋白酶组予6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液于实验开始第1、4、7天行右膝关节腔注射,注射结束4周后造模完成;石膏组予膝关节伸直位固定6周;记录实验期间动物不良情况发生率,造模完成后处死实验兔,取软骨标本进行大体观察、Pelletier评分、Mankin′s评分,免疫组化测定软骨Ⅱ型胶原蛋白含量, ELISA法检测血清和关节液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量.结果 大体观察显示木瓜蛋白酶组与石膏组均出现关节肿胀、关节间隙变窄、软骨缺损、滑膜增生硬化、炎症改变、骨赘形成;Pelletier 评分、Mankin′s 评分、Ⅱ型胶原蛋白含量、血清和关节液中TNF-α、COMP以及MMP-3的含量,木瓜蛋白酶组、石膏组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);木瓜蛋白酶组与石膏组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05).木瓜蛋白酶组动物不良情况发生率明显低于石膏组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 木瓜蛋白酶关节腔注射与石膏关节伸直位制动均能成功建立膝骨关节炎模型,但木瓜蛋白酶关节腔注射法更为快捷、简便,并发情况少,可行性好.     

牛膝醇提物干预BMSC-Exos对OA模型兔局部骨组织超微结构及炎症小体的影响

目的:观察牛膝醇提物含药血清培养的骨髓间充质干细胞来源外泌体对实验兔骨关节炎模型关节局部骨组织超微结构及炎症小体的影响.方法:将20只健康实验兔按照随机数字表法分为空白组、模型组及牛膝醇提物低、中、高剂量组,每组4只,分别予等量蒸馏水及牛膝醇提物低、中、高剂量灌胃1周后采血制备含药血清,用牛膝醇提物不同浓度含药血清连续...     

牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的蛋白组学分析

背景：前期研究发现牛膝醇提物具有诱导骨髓间充质干细胞定向软骨细胞分化的作用,但具体作用蛋白靶点和网络机制不详。目的：观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的蛋白质组学分析及蛋白质相互作用网络构建。方法：采用密度梯度离心联合细胞贴壁法分离培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞,取第3代细胞随机分成5组：空白组、对照组、牛膝醇提物低、中、高剂量组,连续成软骨诱导培养21 d后,用qRT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA表达及甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞形成,应用绝对定量同位素标记(iTRAQ)结合双向液相色谱-串联质谱(2DLC-MS/MS)技术对各组差异表达蛋白质进行鉴定,并对差异蛋白进行GO分析、KEGG分析及蛋白质网络相互作用分析。结果与结论：(1)qRT-PCR结果显示牛膝醇提物高剂量组较其他组Ⅱ型胶原mRNA表达明显增高(P <0.05),牛膝醇提物高剂量组甲苯胺蓝染色阳性,蛋白组学分析共鉴定到1 354个差异蛋白点,上调蛋白633个,下调蛋白721个。(2)根据qRT-PCR结果对空白组、牛膝醇提物高剂量组、对照组3组差异表达蛋白进行生物信息分析。GO分析发现这些差异表达蛋白参与代...     

六味骨痹汤对兔骨关节炎软骨的修复作用及其机制初探

目的:观察六味骨痹汤对兔骨关节炎模型关节软骨形态、Ⅱ型胶原蛋白表达及体液中胶原酶3(MMP-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的影响,探讨其对骨关节炎(OA)软骨的修复作用及其可能机制。方法:取2~3月龄清洁级新西兰兔32只,体质量(2.42±0.23)kg,采用木瓜蛋白酶关节注射法建立兔OA模型,随机区组法分为六味骨痹汤组、硫酸氨基葡萄糖(GS)组和模型组,另设正常组。前两组分别予六味骨痹汤3.83g/(kg·d)、硫酸氨基葡萄糖胶囊77mg/(kg·d)溶于生理盐水10mL灌胃,模型组和正常组均予生理盐水(10mL/d)灌胃。6周后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清及关节液中MMP-13,TNF-α及COMP的含量;处死实验兔,按Pelletier原则对关节软骨大体形态评分;取软骨病理标本,部分予苏木精-伊红染色后用改良Mankin's法予组织形态学观察评分,其他标本免疫组化染色后对其Ⅱ型胶原蛋白表达情况进行观察评分。结果:与模型组相比,六味骨痹汤组血清和关节液中MMP-13,TNF-α及COMP的含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);关节软骨Pelletier评分和改良Mankin's评分显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅱ型胶原蛋白表达有所增加,差异有统计学意义(P<0.05).与GS组相比,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05).结论:六味骨痹汤可促进兔OA模型软骨修复,其机制可能是通过降低兔血清和关节液中MMP-13,TNF-α等因子的含量抑制软骨破坏,从而提高Ⅱ型胶原蛋白的表达来发挥作用。     

消瘀散及其拆方治疗急性软组织挫伤的实验研究

目的:观察消瘀散及其拆方对急性软组织挫伤的疗效差异,选取治疗急性软组织挫伤最优的中药复方。方法:通过正交t值法主药分析表将消瘀散拆方分为12组(其中拆方组11组为A^E和G^L组,全方组为F组),将72只新西兰大白兔造成急性软组织挫伤模型后,随机分配到12组中,各组用药后第3,5天做大体观察评分、光镜下组织病理评分、血液流变检测和血清IL-1β及IL-6含量测定,评分数据用SPSS 17.0统计软件统计。结果:第3,5天各组间的大体观察评分、光镜下组织病理评分、血液流变检测和血清IL-1β及IL-6含量测定均有不同程度的降低,其中B组、K组及全方F组明显优于其余拆方组(P<0.01),K组、F组优于B组(P<0.05),K组、F组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:B组、K组及全方组对治疗急性软组织挫伤均有较好的疗效,其中K组及全方F组疗效更佳。     

六味骨痹汤对兔骨关节炎滑膜组织的影响及与软骨修复的相关性研究

【目的】通过观察六味骨痹汤对骨关节炎(OA)模型兔关节液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)含量,滑膜、关节软骨形态及软骨Ⅱ型胶原蛋白表达的影响,探讨其对OA滑膜组织的修复作用及与关节软骨修复的相关性。【方法】将32只新西兰兔随机分为正常组、模型组、六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组,每组8只。采用木瓜蛋白酶关节注射法建立兔OA模型。成功造模后,前2组每日给予10 mL生理盐水灌胃,后2组每日分别对应给予六味骨痹汤(剂量为3.8 g·kg-1·d-1)及硫酸氨基葡萄糖胶囊(剂量为77.0 mg·kg-1·d-1)灌胃。给药6周后,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测各组实验兔关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,按照Krenn标准及改良Mankin’s法分别对滑膜炎症程度及软骨损伤程度进行评分,并评价软骨标本中Ⅱ型胶原蛋白表达情况,最后分析关节滑膜炎症程度与软骨修复的相关性。【结果】六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,滑膜炎症Krenn评分,关节软骨Mankin’s评分均较模型组显著降低(P0.01),Ⅱ型胶原蛋白表达评分显著升高(P0.05);2给药组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。各组滑膜炎症的缓解与软骨的修复程度成较强的正相关性。【结论】六味骨痹汤对兔OA模型滑膜炎症有缓解作用,并且这种改变与Ⅱ型胶原蛋白高表达及OA软骨的修复程度相关。本研究明确了补肝肾、强筋骨类方药治疗OA滑膜炎的疗效及与软骨修复的相关性,也为中药治疗滑膜炎及软骨损伤性疾病提供数据支持及新的思路。     

牛膝对人软骨细胞体外增殖的影响

目的:探讨牛膝对人关节软骨细胞体外增殖的影响。方法:膝骨关节炎患者口服不同浓度牛膝醇提物,收集不同浓度牛膝含药血清,取膝骨关节炎行关节置换手术患者的关节软骨,剪碎后,采用Ⅱ型胶原酶溶解消化软骨细胞,甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在。将第3代软骨细胞分别接种于4组:空白对照组、含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组。荧光倒置相差显微镜观察软骨细胞形态和结构,采用CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,RT-PCR法分析软骨细胞基因Ⅱ型胶原mRNA表达水平。结果:牛膝含药血清高、中剂量组细胞增殖率高于对照组(P0.05),含药血清低剂量组与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05);RT-PCR法检测结果显示牛膝含药血清高、中、低剂量组均高于空白对照组(P0.05)。结论:牛膝含药血清能促进人软骨细胞体外培养增殖和Ⅱ型胶原的合成。     

基于多组学整合分析牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的生物网络机制研究

目的：观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）软骨分化的多组学生物网络机制。方法：将12只实验兔随机分为空白组、牛膝醇提物组、阳性对照组,每组4只,制备含药血清。再用密度梯度离心联合骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs,取P3代细胞随机分成3组：空白组、牛膝醇提物组、阳性对照组,用不同组别含药血清连续诱导培养21 d后,用同位素标记相对和绝对定量（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification,iTRAQ）结合双向液相色谱-串联质谱技术测定不同组别差异表达蛋白质,用转录组测序筛选不同组别差异表达基因。采用生物信息学进行三组整合韦恩分析、基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及网络拓扑学分析,并构建生物网络蛋白质-蛋白质相互作用图。结果：韦恩分析显示牛膝醇提物组vs.空白组共有14个蛋白/基因,阳性对照组vs.空白组共有48个蛋白/基因,阳性对照组vs.牛膝醇提物组共有25个蛋白/基因;富集分析显示牛膝醇提物组vs.空白组共富集...