荔枝果实中泛变应原profilin基因的克隆及序列分析

目的克隆荔枝果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)同源基因。方法采用生物信息学方法对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过RT-PCR和3'-RACE技术克隆荔枝果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。结果获得了一个全长的新基因(689bp)。该基因开放阅读框为396个碱基,编码131个氨基酸残基,经分析该蛋白等电点为4.98,分子量约为14060。此序列已被GenBank收录,登陆号为DQ309464。序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(与桦树和橡胶花粉泛变应原profilin的同源性分别为80%和84%,与桃子profilin的同源性为85%),因此认定其为泛变应原基因。结论从荔枝果实中成功地克隆出了一个泛变应原基因,为进一步的蛋白表达奠定了基础。     

芒果果实中泛变应原profilin的克隆、表达及免疫学活性鉴定

目的　克隆并表达芒果果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)并了解其免疫学活性。方法利用RT-PCR结合:RACE技术克隆芒果果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个芒果profilin的开放阅读框,将其与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了芒果profilin的2个型。每个型的cDNA都包括一个编码131个氨基酸的开放阅读框。序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(>70%)。根据变应原的命名规则,将它们分别命名为Man i 3.01和Man i 3.02,并将这两个基因提交到GenBank数据库中,其登录号分别为DQ270547和DQ400579。重组芒果profilin在大肠杆菌中高效的表达,进一步经Ni2 亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功地克隆和表达了芒果profilin,并证明与芒果过敏者血清有特异IgE应答。     

荔枝果实中profilin的表达纯化及其与桦树花粉Bet v 2的交叉反应性研究

目的 表达和纯化荔枝果实profilin,并对其免疫学活性及交叉反应性进行研究.方法采用RT-PCR获得整个荔枝profilin的开放阅读框,将其与PET28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western-blot检测其IgE结合活性,并通过ELISA抑制实验对其与桦树花粉profilin的交叉反应性进行研究.结果成功的构建了原核表达载体,并在大肠杆菌中大量的表达了荔枝profilin,纯化后的重组蛋白进行免疫印迹,结果显示15个荔枝过敏患者中有5个存在重组pofilin的特异性IgE抗体.ELISA抑制实验发现它们之间存在很高的交叉反应性.结论 成功的表达了荔枝profilin,经纯化后具有很好的免疫学活性,为进一步的深入研究奠定了基础.     

樟树花粉泛变应原基因的克隆与序列分析

目的从樟树花粉中克隆泛变应原基因。方法通过对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据保守区域序列设计简并性引物,利用RT-PCR结合RACE技术对樟树花粉中的泛变应原基因进行克隆。结果从樟树花粉中克隆到一个新的基因。序列分析显示:所克隆到的基因与其它植物的泛变应原肌动蛋白结合蛋白基因有很高的同源性,因此认为该基因为泛致敏原基因,命名为Cinc1。其在GenBank数据库中的登录号为DQ335252。结论采用简并引物从樟树花粉中克隆到一泛变应原基因,为进一步研究该变应原奠定了理论基础。