Sortilin在糖尿病血管钙化演进中的作用机制

目的探究分拣蛋白(Sortilin)在糖尿病血管钙化中的作用机制。方法选取2015年6月至2017年6月在江苏大学附属医院骨科因糖尿病足截肢治疗的患者30例,根据钙定量检测胫前动脉钙化情况并分为对照组(钙定量2μmol/mg,n=15)和钙化组(钙定量≥2μmol/mg,n=15)。Western blot测定两组Sortilin水平,并对患者血清学及临床指标进行相关分析。基于人主动脉平滑肌细胞株(HA-VSMC)构建糖尿病血管钙化体外模型,利用茜素红染色检测钙化程度,Western blot检测该模型中Sortilin表达水平。而后用Sortilin及Sortilin中和性抗体处理该钙化模型,用钙盐染色和钙结节长径测定的方法显示Sortilin对于钙化模型的影响。结果钙化组胫前动脉钙化是对照组的4.9倍,同时Sortilin表达量也增加3.92倍。用含有羧甲基赖氨酸(CML)和氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)的钙化培养液处理HA-VSMC后,钙化明显增加。在Sortilin重组蛋白刺激下,HA-VSMC钙化程度进一步加重,钙结节长径明显增加,同时组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)表达水平也显著提高。结论 Sortilin促进糖尿病血管钙化,并使其向大钙化发展。     

CML促进高脂诱导糖尿病ApoE－/－小鼠非酒性脂肪肝进展的研究

研究 Nε-羧甲基赖氨酸(CML)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响并探索其作用机制。首先通过体外实验,观察不同浓度CML对HepG2细胞脂质蓄积的影响。以6周龄雄性ApoE－/－小鼠腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg/day连续五天,2周后将血糖水平≥300 mg/dL的小鼠纳入实验研究;用免疫组化染色法检测CML的表达,HE染色观察肝脏形态以及检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的变化。结果显示,不同浓度CML处理后,上调肝组织中CML表达。CML浓度依赖性升高小鼠血清TC、TG、AST、ALT、MDA 的含量,降低血清中 SOD、GSH-Px含量,加重肝脏脂肪变性,并增加HepG2细胞内脂质蓄积。结果表明CML促进高脂诱导糖尿病ApoE－/－小鼠非酒性脂肪肝进展。