Rho激酶抑制剂Y27632促进人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞向多巴胺能神经前体细胞的转化

目的 提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞（hiPSCs-NECs）定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞（DAPs）的效率。方法 将人i PSCs在含有小分子组合[DMH1(10μmol/L)、SB431542(10μmol/L)、音猬因子（SHH 200 ng/mL）、成纤维细胞生长因8(FGF8 100 ng/mL)、嘌吗啡胺（2μmol/L）、CHIR99021(3μmol/L)、N2(1%)]的mTeSRTM培养基中诱导至12 d,细胞分化为原始神经上皮细胞（NECs）。特异性诱导DAPs,将诱导的hiPSCs-NECs用胶原酶IV消化后,在神经分化培养基[添加1%N2、2%B27-A、BDNF(10 ng/mL)、GDNF(10 ng/mL)、AA、TGF-β、cAMP、1%GlutaMax]中加入不同浓度的Rho激酶抑制剂Y27632重新接种,并于次日更换培养基去除Y27632,持续诱导至第28天获得DAPs。结果 人iPSCs可在基质胶上稳定传代,表达多潜能性标记物OCT4、SOX2、Nanog和SSEA1,且碱性磷酸酶染色呈阳性。诱导分化至第13天获得hiPSCs-NE...