初治鼻咽癌患者的治疗分析:附130例报告

目的:探讨初治鼻咽癌患者的治疗方法、疗效及晚期损伤。方法:选择2006年1月—2011年1月收治的130例首程放疗鼻咽癌患者,其中122例患者接受化疗,生存预后的单因素分析采用Kaplan-Meier法,并行Log-rank检验,采用Cox比例风险模型进行多因素分析,采用美国肿瘤放射治疗协作组织(Radiation Therapy Oncology Group,RTOG)/欧洲癌症治疗研究组织(European Organization for Research on Treatment of Cancer,EORTC)标准评价晚期损伤。结果:初治鼻咽癌患者的中位随访时间为56个月,5年总生存率、局部区域无复发生存率、无瘤生存率分别为64.8%、74.3%、58.2%。单因素分析结果表明,同期化疗是影响鼻咽癌患者5年总生存率、局部区域无复发生存率和无瘤生存率的有利因素。多因素分析结果表明,同期化疗是鼻咽癌患者局部区域无复发生存率和无瘤生存率的独立影响因素。130例患者均有不同程度口干,听力明显下降15例,放射性脑病2例,张口困难5例。结论:同期化疗有助于提高初治鼻咽癌患者的放疗后局部区域无复发生存率和无瘤生存率。     

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸1826对Lewis肺癌放疗联合作用及其剂量-效应关系

目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmethylated cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN) 1826对X射线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的联合作用及其剂量-效应关系.方法 在C57BL/6J纯系小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型.将64只荷瘤小鼠按完全随机化方法随机分为对照组、X射线照射(IR)组、低剂量CpG ODN1826组(0.15 mg)、中剂量CpG ODN1826组(0.30 rag)、高剂量CpG ODN1826组(0.45 mg)、低剂量CpG ODN826+ IR组(CPG1826 0.15 mg+ IR)、中剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.30 mg+ IR)和高剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.45 mg+ IR),每组8只.实验的第1、2、9天注射CpG ODN1826.实验的第2天开始X射线照射,1次/d,2.50 Gy/次,总剂量12.50 Gy.观察各组移植瘤生长速度和各治疗组肿瘤生长延迟时间(TGD),用DNA断裂的原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 成功建立荷瘤小鼠Lewis肺癌模型,成瘤率为100％.经治疗后,各组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小,CpG ODN1826 0.45 mg+ IR组移植瘤体积最小.DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡率分别为(2.40±0.55)％、(5.50±0.76)％、(7.13±0.83)％、(11.63±1.06)％、(19.13±0.83)％、(12.88±0.83)％、(20.57±2.37)％和(28.17±3.31)％.各治疗组都明显高于对照组(t=11.15、7.91、17.82、39.48、24.73、16.61和17.05,P＜0.05),不同剂量CpG ODN1826 +IR组显著高于IR组(t=13.78、15.08和17.47,P ＜0.05)和不同剂量CpG ODN1826组(t=18.53、9.66和7.51,P ＜0.05).结论 CpG ODN1826能明显地抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,且呈剂量-效应关系.     

CpG ODN对卡铂治疗Lewis肺癌小鼠移植瘤的增敏效应

目的：探讨含胞嘧啶-磷酸盐-鸟嘌呤基序的寡脱氧核苷酸（cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpGODN）对卡铂治疗Lewis肺癌荷瘤小鼠的化疗增敏作用。方法：在小鼠右前肢腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型,将32只荷瘤小鼠随机分为4组：对照组,不做任何处理;卡铂治疗组,第1~5天每天腹腔注射卡铂注射液0.32mg;CpG组,第1~5天每次腹腔注射CpGODN（1826）0.05mg;CpG＋卡铂组,每次卡铂注射前6h腹腔注射CpGODN（1826）。观察各组移植瘤生长速度和重量,HE染色法观察移植瘤组织病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果：成功建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。各治疗组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小（P〈0.01）,其中CpG＋卡铂组移植瘤体积最小;卡铂组、CpG组、CpG＋卡铂组的抑瘤率分别为23.35%、21.47%、48.43%;HE染色法观察到各治疗组移植瘤的坏死均较对照组明显,其中CpG＋卡铂组最明显。TUNEL法检测对照组瘤组织细胞凋亡率为2.75%±0.89%,卡铂组为4.87%±1.13%,CpG组为7.63%±1.41%,CpG＋卡铂组为32.63%±4.66%,各治疗组瘤细胞凋亡率均明显高于对照组（P均〈0.01）,其中CpG＋卡铂组显著高于单独卡铂组和单独CpG组（P均〈0.01）。结论：CpGODN（1826）能明显提高Lewis肺癌移植瘤对卡铂治疗的化疗敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。     

三维适形再程放疗同步联合奈达铂加氟尿嘧啶治疗放疗后复发食管癌临床效果观察

目的观察三维适形再程放疗同步联合奈达铂加氟尿嘧啶（5-Fu）治疗放疗后局部复发食管癌患者的疗效及副反应。方法54例放疗后局部复发的食管癌患者,随机分成两组：研究组27例,行三维适形再程放疗（50～56Gy／25～28F）同步联合奈达铂80mg／（m^2·d）,静脉滴注,第1天加5-FU350mg／（m^2·d）,第1—5天化疗;于放疗中及放疗后配合奈达铂加5一Fu化疗。对照组27例,行三维适形再程放疗（50—56Gy／25～28F）序贯联合奈达铂80mg／（m^2·d）,静脉滴注,第1天加5-FU350mr／（m^2·d）d1。5）化疗;于放疗后使用奈达铂加5-FU化疗。两组患者化疗均3～4周为1个周期,共2—4个周期。结果（1）两组近期疗效：研究组与对照组的近期疗效（CR＋PR）分别为59．2％（16／27）和55．5％（15／27）,两组比较差异无统计学意义（x^2=0．076,P=0．5）。（2）生存率：研究组与对照组的1、2、3年生存率分别为54．2％、26．4％、15．7％和40．3％、19．7％、10．8％,两组比较差异有统计学意义（x^2=6．87,P=0．032）。（3）毒副反应：研究组血液系统毒副反应高于对照组,差异有统计学意义（x^2=5．882,P=0．043）;两组非血液系统毒副反应差异无统计学意义（x^2=4．25,P=0．75）。（4）放射性食管炎：两组差异无统计学意义（x^2=0．869,P=0．661）。结论三维适形再程放疗同步联合奈达铂与5-Fu化疗对放疗后复发食管癌有较好疗效,可提高生存率。     

放射抗拒Lewis肺癌细胞系的建立

目的 通过X射线反复照射体外培养的Lewis肺癌细胞系(LLC),建立其放射抗拒细胞系(R-LLC),并比较两种细胞系间Survivin蛋白的表达及分泌细胞因子水平的差异。方法 应用6MV X射线反复照射Lewis肺癌细胞系,5 Gy/次,共6次,30 Gy。采用CCK-8实验及克隆形成实验测定两种细胞系的放射敏感性;Western blot法检测两种细胞系Survivin蛋白表达的差异;ELISA法检测两种细胞系培养液上清细胞因子TNF-α、IL-12的浓度。结果 R-LLC及LLC细胞系的平均致死剂量D₀分别是(1.397±0.128)和(1.053±0.214)Gy,外推值N分别是2.680±1.179和4.149±0.785,D_q值分别为1.038和1.988 Gy,SF₂值分别为0.353±0.092和0.682±0.092,显示了明显的辐射抗性;Western blot结果显示,R-LLC细胞株的Survivin蛋白表达水平较LLC细胞株升高,差异有统计学意义(t=15.310,P<0.05);ELISA结果显示,R-LLC细胞上清液TNF-ɑ和IL-12浓度较LLC细胞明显升高,差异有统计学意义(t=2.867和3.014,P<0.05)。结论 反复照射使肿瘤细胞获得了辐射抗性,同时又促进了Lewis肺癌细胞Survivin蛋白及细胞因子的表达,为放射增敏及肿瘤免疫相关的研究提供依据。     

放疗同步联合NP方案化疗治疗食管癌

目的:观察放疗同步联合NP方案化疗治疗食管癌的疗效。方法::对符合条件的62例食管癌患者,按序列随机分成2组,放疗同步联合NP方案化疗(综合治疗组)30例,于放疗中及放疗后配合"顺铂 盖诺"方案化疗3～4疗程;单纯根治性放疗组(单纯放疗组)32例。结果::综合治疗组与单纯放疗组的近期疗效(CR PR)分别为83.0%和78.0%(P>0.05),1、2、3年生存率分别为76.6%、55.5%、40.0%和49.0%、31.0%、21.0%,两组比较有显著性差异(P<0.05);综合治疗组1、2、3年无瘤生存率分别为70.2%、43.2%、22.0%,单纯放疗组分别为42.0%、20.5%、18.0%,两组比较有显著差异(P<0.05)。毒副作用发生率综合治疗组(30.0%)高于单纯放疗组(6.3%),(P<0.05)。结论:放疗联合NP方案化疗对中晚期食管癌治疗有较好疗效,可提高生存率。     

沉默乙酰肝素酶联合那屈肝素对肺癌细胞的抑制作用及其机制

目的:研究慢病毒转染沉默乙酰肝素酶(HPA)联合那屈肝素(nadroparin)的协同抗肿瘤作用,并探讨其潜在的分子机制。方法:以肺癌A549细胞系为研究对象,探讨利用慢病毒介导沉默HPA和/或联合那屈肝素处理后对A549细胞的影响。抑制试验共设6组,分别为空白对照组(A549细胞)、阴性对照组(转染阴性对照shRNA序列)、沉默HPA组(转染HPA shRNA)、空白对照+那屈肝素组、阴性对照+那屈肝素组和shRNA+那屈肝素联合组。分别采用CCK-8检测各组细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液中转化生长因子(TGF-β1)含量,体外侵袭实验(transwell)检测各组细胞迁移和侵袭能力的差异,Western blot检测各组细胞TGF-β信号通路中主要蛋白TGF-β1、磷酸化Smad2/3、锌指E盒结合同源框1(ZEB-1)、锌指转录因子SNAIL、TWIST相关蛋白、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况。结果:通过慢病毒转染shRNA,成功建立了HPA沉默的A549细胞株。与2个对照组相比,各组细胞经沉默HPA和/或联合那屈肝素处理后,CCK-8检测结果显示,单独抑制HPA或那屈肝素处理可轻微抑制细胞活力,而联合处理会显著抑制细胞活力(P<0.05);单独处理后TGF-β1的表达减少(P均<0.05),联合组TGF-β1表达减少更显著(P<0.05);单独HPA沉默或那屈肝素均能抑制细胞迁移和侵袭能力,两者联合时效果更显著(P<0.05)。Western blot同样证实了HPA沉默或那屈肝素均可不同程度诱导TGF-β1、p-Smad2/3、ZEB-1、TWIST、SNAIL、N-cadherin和MMP-2表达下调(P均<0.05),E-cadherin表达上调(P<0.05),且联合处理组效果更显著(P<0.05)。结论:沉默HPA联合那屈肝素可显著抑制肺癌细胞侵袭和迁移,并上调E-cadherin表达。此过程可能与TGF-β1介导上皮细胞转化过程中关键转录因子ZEB-1、TWIST和SNAIL的抑制有关。     

附子提取物对肺癌A549细胞增殖抑制及放射增敏作用的研究

目的: 观察附子提取物对人肺癌A549细胞增殖及放射敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法: 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度附子提取物作用后细胞增殖情况,并选择IC₂₀(30μg/mL)作为后续实验浓度。集落形成实验检测A549细胞的存活分数,单机多靶模型拟合细胞存活曲线计算平均致死剂量(D₀)及放射增敏比(SER)。将细胞分为对照组、附子组、X射线照射组和附子处理后X射线照射组。对照组给予培养基,附子组给予30μg/mL附子提取物处理24 h,X射线照射组采用10 Gy的X射线照射,附子处理后X射线照射组先采用30μg/mL附子提取物处理24 h后,再给予10 Gy的X射线照射。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果: CCK-8法检测结果显示,小于20μg/mL的附子提取物对A549细胞存活率有增强作用,但随着附子提取物浓度到达30μg/mL,开始对人肺癌A549细胞生长具有抑制作用,且与附子提取物浓度相关。集落形成实验结果提示附子处理后X射线照射组存活曲线起始处肩部稍窄,表明联用附子提取物后,引起细胞死亡所需的放疗剂量逐渐减小,X射线照射组和附子处理后X射线照射组D₀值分别为1.83和1.48 Gy,SER为1.24。流式细胞术检测结果提示附子处理后X射线照射组细胞凋亡率显著增加,高于附子组和X线照射组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,附子组与X射线照射组较对照组细胞Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降。附子处理后X射线照射组较对照组细胞Bax、Bcl-2蛋白含量变化更加显著(P<0.01)。结论: 30μg/mL的附子提取物对人肺癌A549细胞具有增殖抑制作用和放射增敏作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸1826对大鼠放射性肺纤维化的预防作用

目的 初步探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸（CpG ODN）1826对大鼠放射性肺纤维化的防护作用。方法 采用6MVX射线单次左肺照射20Gy,建立大鼠放射性肺纤维化模型。SD大鼠按完全随机法分为健康对照组、单纯照射组和药物干预组3组,每组30只。在照后0、1、3、5和7d,腹腔注射CpGODN1826。照后5、15、30和90d,取材,记录肺系数。照射肺石蜡切片HE染色、Masson染色,行肺纤维化评分。ELISA法检测血清TGF-β1浓度,碱化水解法检测肺组织羟脯氨酸（Hyp）浓度。结果 成功建立了放射性肺纤维大鼠模型。照后5d,健康对照组肺系数低于单纯照射组和药物干预组（t=3.046、2.252,P<0.05）。照后15、30和90d,药物干预组肺系数低于单纯照射组（t=4.120、5.226和5.719,P<0.05）。单纯照射组及药物干预组照后30d肺系数最高。药物干预组肺纤维化评分低于单纯照射组（t=3.212、4.959,P<0.05）。药物干预组血清TGF-β1浓度低于照射组（t=4.138、5.924、5.294和4.076,P<0.05）。单纯照射组照射肺Hyp含量高于药物干预组（t=7.527、8.416,P<0.05）。结论 CpGODN1826可以降低放射性肺纤维化大鼠血清TGF-β1浓度及Hyp含量,预防放射性肺纤维化。     

PKM2基因沉默对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的 探讨通过siRNA干扰技术沉默丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)基因表达对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,根据PKM2 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染A549细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测PKM2基因的表达。设PKM2 siRNA干扰组,阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量6 MV X射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡率。每组实验重复3次。结果 RT-PCR和Western blot显示,PKM2 siRNA干扰组较空白对照组的PKM2 mRNA和蛋白表达都明显下降(t=20.91、47.00,P<0.01),抑制率分别为(70.27±1.38)%和(70.42±1.18)%;集落形成实验显示,PKM2 siRNA干扰+IR组A549细胞 D₀、D_q、N和SF₂值均低于空白对照+IR组(t=43.82、28.44、15.60、29.63,P<0.01),放射增敏比(SER)为1.27。流式细胞仪分析显示,PKM2 siRNA干扰组G₂/M期细胞的百分率明显高于空白对照组(t=8.35,P<0.01),经10 Gy X射线照射,G₂/M期细胞比例也明显升高(t=27.87,P<0.01)。两者联合使用后G₂/M期阻滞更加明显。siRNA干扰组细胞凋亡率较空白对照组无显著升高,空白对照+IR组较空白对照组凋亡率明显升高(t=23.99,P<0.01);PKM2 SiRNA干扰+IR组较空白对照+IR组和PKM2 siRNA干扰组差异均有统计学意义(t=9.42、65.21,P<0.01)。结论 特异性沉默PKM2基因表达能够增加A549细胞的放射敏感性,推测其机制可能与改变细胞周期分布及使射线诱导细胞凋亡的作用增强有关。