NF2蛋白518位丝氨酸磷酸化状态对其分子内相互作用机制的结构生物学及生物化学研究

 目的  揭示NF2 (neurofibromatosis type 2)蛋白518位丝氨酸的磷酸化如何对其结构与功能进行调节。  方法  解析野生型NF2^WT(无模拟磷酸化突变)和突变型NF2^S518D(模拟518位丝氨酸被磷酸化的突变体)蛋白的晶体结构,进一步利用体外Pull-down实验及荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)实验检测了NF2的分子内相互作用。  结果  由于NF2的C-端在结晶过程中降解,未能观察到NF2^WT和NF2^S518D两种蛋白质构象的差异,结构分析发现NF2的N-端FERM(Four-point one,Ezrin,Radixin,Moesin)结构域与已有结构报道的FERM结构域具有相似的空间构象。体外Pull-down实验证明生化实验结果提示,相对NF2^WTC-端蛋白质而言,NF2^S518D的C-端蛋白质与NF2的N-端蛋白质结合更强。FRET实验在波长525 nm处,检测到全长NF2^S518D比全长NF2^WT产生更强的FRET信号。  结论  野生型NF2^WT处于“开放”状态而模拟磷酸化的突变型NF2^S518D处于“闭合”状态。     

兔出血症病毒（RHDV）McAb的研制及初步应用

用酒石酸钾-甘油梯度离心纯化的RHDV抗原免疫BALB／C小鼠．取脾细胞与SP2／0融合，获得4株稳定分泌RHDV McAb的杂交瘤细胞株(1F7，1H4，2A9．2D6)。经检测，所分泌的抗体亚类分别为IgG 2a(1F7．1H4，2D6)和IgG1(2A9)。应用双抗体夹心ELISA法检测70份标本，并与直接免疫荧光法和HA法比较．取得较好的实验结果。