Notch1-NICD胞内结构域真核表达载体的构建及其初步功能分析

目的:构建包含Notch1胞内结构域的Notch1-NICD真核表达载体及绿色荧光蛋白载体并转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706及Eca109,并对Notch1-NICD1在食管鳞状细胞癌中的功能进行初步探索.方法:根据Gen-Bank上的Notch1-NICD序列设计扩增引物,由RT-PCR扩增NICD片段,测序鉴定,并通过Blast进行序列比对,然后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)相连,构建Notch1-NICD真核表达载体pNotch1-NICD1,同时将扩增的NICD与pEGFP-C1载体相连构建绿色荧光蛋白表达载体pENotch1-NICD1,并转染EC9706及Eca109,观察Notch1在细胞巾的定位及其途径的激活状态.同时将pNotch1-NICD1真核表达载体转染EC9706及Eca109,用MTT法分别在24 h、48 h、72 h、96 h及120 h观察外源性Notch1片段的导入对EC9706及Eca109细胞增殖的影响.结果:通过RT-PCR获得1个Notch1胞内区片段,并成功构建了包含Notch1胞内区结构域的绿色荧光蛋白载体及真核表达载体.转染pENotch1-NICD1后,Notch1在胞质和胞核内均有表达,表明Notch1信号通路被激活.此外,MTT结果表明转染Notch1-NICD1片段的食管鳞状细胞癌细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05).结论:成功构建了Notch1绿色荧光蛋白表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体.外源Notch1片段的引入能够明显抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在的分子靶点.     

奈达铂或顺铂联合紫杉醇治疗晚期非小细胞肺癌和食管癌患者的临床疗效比较

目的:比较晚期非小细胞肺癌和食管癌患者采用奈达铂或顺铂联合紫杉醇治疗的临床疗效。方法:选取60例晚期非小细胞肺癌和食管癌患者为研究对象,按照随机数字表法将其均分为两组,对照组(n=30例)采用顺铂联合紫杉醇治疗,观察组(n=30例)采用奈达铂联合紫杉醇治疗,比较两组患者治疗后的临床疗效及生存质量。结果:对照组患者进展15例(50%)、总有效50例(50.00%),观察组进展16例(53.33%)、总有效14例(46.67%),组间差异无统计学意义(P>0.05);对照组不良反应发生率为40.00%,高于观察组的13.33%(P<0.05);观察组治疗后总体生存质量评分高于对照组(P<0.05)。结论:奈达铂或顺铂联合紫杉醇治疗晚期非小细胞肺癌和食管癌患者的临床疗效相当,但奈达铂联合紫杉醇治疗的不良反应发生率较低。     

重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白3基因多态性对食管鳞癌预后的影响

摘 要：［目的］ 探讨重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白3（TNFAIP3）的多态性位点6304 A>G和食管鳞癌预后的相关性。［方法］ 纳入175例接受完全手术切除的食管鳞癌患者。在手术前收集患者的外周血5ml提取基因组DNA,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)的方法对6304 A>G位点进行基因分型,应用SPSS19.0软件对该位点基因型和基线临床资料进行相关性分析,并用Kaplan-Meier方法进行该位点和预后的生存分析。［结果］ 6304 A>G位点在研究人群的基因分布频率为：AA型133例（76.00%）,AG型39例（22.29%）,GG型3例（1.71%）,最小等位基因频率为0.13,三种基因型分布频率符合哈迪温伯格平衡（P=0.942）。野生型AA型相对于AG/GG型患者者具有明显较晚的肿瘤分期（P<0.001）。AA型和AG/GG型患者的复发比例分别为71.43%和52.38%,差异有统计学意义（P=0.022）。AA型患和AG/GG型患者的中位总生存期（OS）分别为36.2个月和48.5个月,差异有统计学意义（P=0.017）。经多变量Cox模型校正后该位点对患者OS具有独立的影响（OR=0.85,P=0.043）。［结论］ TNFAIP36304G>A多态性位点和食管鳞癌患者总生存期显著相关,G等位基因携带者的预后更好。     

Notch1信号途径在食管鳞癌细胞中的激活及对细胞周期的影响

目的 观察Notch1信号途径在食管鳞癌EC9706细胞中的激活状态及 其对细胞周期的影响。方法 通过免疫细胞化学检测Notch1基因在 食管鳞癌细胞株EC9706细胞中的表达,并通过免疫荧光方法研究 Notch1基因在EC9706细胞中的激活状态。并且利用CCK-8试剂检测食管癌细胞的增殖状态。此外,采用RT-PCR和Western blot技术检 测与细胞周期相关基因的表达,最后通过流式细胞仪进一步探索激 活的Notch1信号途径对细胞周期的影响。结果 转染pcNICD后的食 管鳞癌细胞株中发现Notch1基因的表达。免疫荧光结果显示,转染 pcNICD后的食管鳞癌细胞株中Notch1信号途径处于激活状态。与未处理和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细 胞的生长速率明显受到抑制（P<0.01）。此外,与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细胞的CDK2, cyclin D1和E基因的mRNA和蛋白的表达明显下调（P<0.05）。转染pcNICD的EC9706细胞在G0/G1期的比率高达74.5%,而未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞在G0/G1期的比率分别为59.1%和59.0%。细胞周期分析显示瞬时表达NICD的EC9706细胞在G0/G1期比率的增加,提示激活的Notch1信号途径能够诱导细胞静止在G₀/G₁ 期。结论 Notch1信号途径的激活引起食管鳞癌细胞的细胞周期 静止,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。     

白蛋白结合型紫杉醇联合抑癌散结汤治疗胰腺癌的临床疗效

目的:探讨白蛋白结合型紫杉醇联合抑癌散结汤治疗胰腺癌的临床疗效。方法:选取2013年4月至2017年6月郑州大学第二附属医院收治的胰腺癌患者66例,随机分为对照组及观察组,每组33例。对照组患者以GEM化疗方案联合白蛋白结合型紫杉醇治疗,观察组在对照组的基础上联合抑癌散结汤治疗,连续治疗6个月后,统计2组临床疗效及KPS评分;检测并比较治疗前后2组血清肿瘤标志物水平;比较2组患者治疗期间不良反应发生情况。结果:治疗6个月后观察组RR为75.76%,较对照组的51.52%显著升高(P0.05);治疗6个月后,观察组患者KPS评分有效率为87.88%,较对照组的66.67%显著升高(P0.05);且观察组KPS评分亦显著高于对照组(P0.01);与治疗前比较,治疗后2组血清癌胚抗原(CEA)、糖链抗原19-9(CA19-9)、糖链抗原125(CA125)水平均显著降低,且观察组显著低于对照组(P0.05);与对照组比较,观察组治疗期间Ⅰ+Ⅱ级恶心呕吐、转氨酶升高及Ⅲ+Ⅳ血小板减少患者比例均显著降低(P0.05)。结论:白蛋白结合型紫杉醇联合抑癌散结汤可显著降低胰腺癌患者血清肿瘤标志物水平,有效提高患者临床疗效,并减少相关化疗不良反应,改善患者预后。