用RT-PCR方法检测登革病毒E基因核酸

目的：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术建立检测登革2型病毒E基因的方法。方法：分别抽提登革2型病毒NGC株和从登革出血热病人血清中分离得到的2型登革热病毒(DV)核酸(RNA)，合成CD-NA第一链，经过RT-PCR得到cDNA产物，用HinfI限制性内切酶酶切鉴定。结果：通过RT-PCR检测登革2型病毒核酸。结论：登革2型病毒E基因核酸的RT-PCR检测方法的建立为快速诊断登革病毒感染提供了可靠的方法。     

聚合酶链反应和原位杂交检测畸胎组织巨细胞病毒DNA

聚合酶链反应和原位杂交检测畸胎组织巨细胞病毒ＤＮＡ左丽郭辉玉为进一步探讨巨细胞病毒（ＣＭＶ）与胎儿畸形相关性及其致畸机制，我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和原位杂交检测了畸胎组织巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＤＮＡ。一、对象和方法１．标本来源：１０例畸胎由贵州省...     

Polymorphic distribution of Y-chromosome haplotype and mitochondrial DNA in the Bouyei people in China

In the evolution of humans, many kinds of mutations in the human genome have been accumulated, providing credible genetic evidence for the study of human origins and migrations. The "out-of-Africa" hypothesis of modern human evolution and the genetic origin of the Japanese has come about by studying mitochondrial DNA.l,2 Recently, researchers have recognized the power of Y-chromosome markers in resolving migratory patterns of modern humans as more and more Y-chromosome single nucleotide polymorphism markers have been found. The markers on the nonrecombinant part of the Y-chromosome allows for the reconstruction of intact haplotypes which are probably the best genetic tools to study human migrations. We can analyze the paternal history of some people in different areas by Y-chromosome haplotypes.     

贵州白纹伊蚊对登革病毒易感性的研究

目的 用细胞、分子生物学技术进行贵州省白纹伊蚊不同地理株对登革病毒(DEN)易感性的研究。方法 采集贵州省9个地(州)市共计15个县(区)白纹伊蚊幼虫标本，饲养为成蚊；取羽化后3～5日龄期的贵州不同地理株白纹伊蚊，用不同型别的DEN分别经口连续感染3d，于首次感染后的4、7、10、14d收集感染成蚊标本；制备蚊悬液，碘化钠法提取RNA，用DENNS1基因区通用引物经逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)检测DEN核酸；蚊悬液接种C6／36细胞进行病毒分离，制作细胞抗原片，经间接免疫荧光法检测DEN抗原；同时感染白纹伊蚊海南株作为对照。结果 DEN1-4型国际参考株感染白纹伊蚊贵州省不同地方株，其感染比率分别为12／15、12／15、8／15和13／15。结论 白纹伊蚊贵州省不同地方株对DEN1-4型国际参考株普遍易感，表明贵州省具备引起登革热流行的条件。     

定量PCR检测黄芪A6组分与无环鸟苷联合抗1型单纯疱疹病毒的协同作用

目的 :探讨抗疱疹病毒药物黄芪A6 组分(A6)和无环鸟苷(ACV)联合抗 1型单纯疱疹病毒(HSV1 )的作用机制。方法 :利用竞争PCR检测A6 和ACV联合抗HSV1 的协同作用 ,并与细胞病变(CPE)抑制法进行比较。结果 :竞争PCR测定A6、ACV和A6 ACV对HSV1 的最小抑制浓度(MIC)分别为 1 88mg/ml、3 3 7μg/ml和 0 47mg/ml 0 84μg/ml;CPE抑制法测定A6、ACV和A6 ACV对HSV1 的MIC分别为 6 2 5mg/ml、5 0 μg/ml和 0 94mg/ml 1 2 5 μg/ml;联合抑制指数的分数(FICI)均小于 0 5 ;显示明显的联合协同抑制作用。结论 :定量PCR是筛选抗病毒药物的有效方法 ;结果还表明A6 和ACV对HSV1 的抑制作用主要表现在病毒增殖周期的复制阶段。     

登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白多克隆抗体的制备

目的制备登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白的小鼠多克隆抗体并进行鉴定。方法利用SDS-PAGE电泳的方法将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,切割目的条带并研磨制成抗原,皮下多点分次注射BALB/c小鼠,采用Western-Blot、间接免疫荧光法对小鼠血清多克隆抗体进行鉴定。结果经SDS-PAGE电泳成功地将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,并获取了抗登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白的多克隆抗体。结论本实验中所用到的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白为可溶性抗原,通过切胶研磨制成颗粒性蛋白抗原能获得良好的免疫效果,该方法制备的抗原浓度及纯度高,由此获得了高效价高特异性的多克隆抗体。     

肝素钠体外抗凝敏感性分析

肝素钠除抗凝及溶栓外 ,还具有降血脂、抗补体、抗炎、抗过敏、抗动脉粥样硬化等作用 ,但其出血作用限制了肝素钠的应用[1] 。由于疾病、患者药物的生物利用度等原因 ,每个人的凝血状态极不一致 ,有时 ,出血倾向已经形成 ,给病人造成痛苦和危险。因此 ,本文对个体体外肝素的敏感性进行研究分析。1　仪器与试剂ＳＹＳＭＥＸ全自动凝血分析仪 (日本东亚公司 ) ;活化部分凝血活酶时间 (ＡＰＴＴ) ,凝血酶时间 (ＴＴ)试剂均为日本东亚公司产品 ,批号分别为 5 2 7132 ,5 15 45 9;肝素钠 (徐州万邦生化制药有限公司 ,批号 0 110 115 )。2　方法与…     

异常增加的α-突触核蛋白对帕金森病模型小鼠黑质及结肠多巴胺受体D1的表达影响

目的 探讨异常增加的α-突触核蛋白(α-Syn)对小鼠脑及结肠多巴胺受体D1(D1DR)表达的影响.方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照及模型组,纹状体立体定位注射α-Syn预成型纤维(PFF)制备小鼠帕金森病(PD)模型,对照组注射等体积PBS;术后6个月进行平衡杆、爬杆及旷场实验检测小鼠行为学差异;通过West...     

改良人原代脐静脉内皮细胞的分离及鉴定

目的:优化人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的分离及培养方法。方法:在传统HUVECs分离的基础上进行改进,通过Ⅰ型胶原酶消化分离HUVECs,利用倒置显微镜观察其生长状况、免疫组织化学方法及流式细胞术检测所培养细胞的纯度。结果:改良实验步骤和精简操作后,HUVECs分离不受影响,分离的HUVECs在体外2~4 d可长成单层,倒置显微镜下可见细胞呈"鹅卵石"状排列,Ⅷ因子免疫组化实验阳性,流式细胞术检测细胞纯度达99.37%。结论:用胶原酶消化法分离HUVECs具有培养周期短,所获得的HUVECs纯度较高的优点,有利于体外血管内皮细胞模型的建立。     

髓母细胞瘤组织MEF2C表达与预后相关性分析

目的：探讨肌细胞增强因子2C（myoeyte enhancer factor2C，MEF2C）表达情况与髓母细胞瘤患者预后的关系。方法：选取3家三级甲等医院2001-01—01—2007—12-31病理确诊的髓母细胞瘤患者56例，其中泰安市中心医院12例．齐鲁医院26例，山东省立医院18例；对照组脑组织取自泰安市中心医院2010-01-01-2010—12—3112例非肿瘤脑外伤患者。免疫组织化学法检测56例髓母细胞瘤患者肿瘤组织和12例非肿瘤患者脑组织中MEF2C的表达；收集髓母细胞瘤患者临床资料，应用统计学方法对髓母细胞瘤患者进行生存分析。结果：髓母细胞瘤患者肿瘤组织MEF2C相对高表达率为53．6％（30／56），非肿瘤患者脑组织MEF2C相对高表达率为0（0／12），两组比较差异有统计学意义，χ2=11．50，P=0．001；肿瘤患者肿瘤组织MEF2C相对高表达组与相对低表达组间生存时间的差异有统计学意义，χ2=4．34，P=0．037。MEF2C相对高表达（p=0．023）、肿瘤转移（P=0．042）与患者3年生存率降低显著有关，而患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位与患者3年生存率无关，P值均〉0．05。结论：MEF2C在患者肿瘤组织中的高表达可降低患者3年生存率，是患者预后不良的危险因素之一。