CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞在原发眼附属器MALT淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的 探讨原发眼附属器MALT淋巴瘤(ocular adnexal MALT,OAML)患者外周血中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)的临床意义。方法 回顾性分析笔者医院44例初诊OAML患者外周血Treg细胞比例与临床特征、预后等因素的关系。结果 共入组44例患者,男女性别比为1.75,发病年龄为20～79岁,中位发病年龄为60岁。OAML患者外周血Treg细胞比例为7.63%±3.77%,高于正常对照(6.09%±1.02%),两者比较,差异有统计学意义(P=0.015)。伴有眼外组织受累OAML患者外周血Treg细胞比例高于病变局限于眼附属器患者(P=0.030),骨髓受累患者Treg细胞比例明显高于无骨髓受累患者(P<0.001)。低Treg细胞患者组(n=28)3年无进展生存(progression free survival, PFS)率为92.9%,高Treg细胞患者组(n=16)3年PFS率为66.8%(P=0.155)。结论 Treg细胞在...     

鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者血清潜伏膜蛋白1/EB病毒核抗原1检测的临床意义

目的 检测鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKL)患者血清EB病毒核抗原1(EBNA1)、潜伏膜蛋白1(LMP1),探讨其与ENKL的关系.方法 选取首都医科大学北京同仁医院2010年8月到2013年8月新诊断ENKL患者36例、健康对照者20例,以EBNA1、LMP1为目的基因,采用实时定量PCR方法分别检测ENKL患者治疗前后和健康对照者外周血EBNA1、LMP1.结果 治疗前,ENKL患者血清EBNA1中位数为1.9×104(0 ～ 11.0×104)拷贝/μl,健康对照组为8.0(0 ～43.8)拷贝/μl;ENKL患者LMP1中位数为3.9 ×103(118.3 ～24.0×103)拷贝/μl,健康对照组为3.3(0～33.3)拷贝/μl.治疗前ENKL患者EBNA1、LMP1均显著高于健康对照组(P均＜0.01).治疗后,ENKL患者血清EBNA1中位数为1.0×103(0 ～2.0×103)拷贝/μl,LMP1为300.8(0 ～825.7)拷贝/μl,两者较治疗前均显著降低(P＜0.05).治疗有效患者的治疗后EBNA1、LMP1中位数均低于治疗无效的患者(P＜0.05).治疗前ENKL患者EBNA1、LMP1与血清乳酸脱氢酶水平呈正相关(r=0.364、0.546,P=0.040、0.012).EBNA1、LMP1低于临界值(EBNA1:1.3×104拷贝/μl; LMP1:3.0×103拷贝/μl)患者的2年总生存率和无进展生存率优于EBNA1、LMP1高于临界值者,但差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 (1)检测ENKL患者血清EBNA1和LMP1对评判治疗效果具有一定价值;(2)ENKL患者血清EBNA1、LMP1可反映肿瘤负荷.     

过表达热休克蛋白22抑制造血系统恶性肿瘤细胞生长的研究

目的 探讨过表达热休克蛋白22（HSP22）对造血系统恶性肿瘤细胞生长和凋亡的影响.方法 构建含HSP22或空载体的慢病毒表达载体,感染K562和Namalwa细胞;荧光显微镜及流式细胞术观察感染效率;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot鉴定HSP22表达.采用细胞计数法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,甲基纤维素半固体集落形成实验测定集落数,Annexin VPE／7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡.在裸鼠皮下注射K562和Namalwa细胞进行成瘤实验以观察成瘤体积.结果 与转导空载体的对照细胞相比,HSP22过表达能抑制Namalwa和K562细胞集落形成,每孔平均集落数转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的K562细胞为108,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFPHSP22的K562细胞为72,两者差异有统计学意义（P=0.000 16）;转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的Namalwa细胞为125,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-HSP22的Namalwa细胞为80,两者差异有统计学意义（P=0.000 37）.HSP22还能抑制Namalwa细胞体外增殖（第5天,P=0.015;第6天,P=0.042;第7天,P=0.048）,抑制K562细胞体内增殖（第21天,P=0.022）.K562、Namalwa细胞HSP22转导组与对照组间G0～G1期、G2～M期及S期细胞所占百分比差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）.结论 过表达HSP22能够抑制造血系统恶性肿瘤K562和Namalwa细胞的生长.     

魔芋提取物对大鼠胃溃疡的治疗作用及其机制研究

【立题依据】 魔芋的主要成分为魔芋葡甘聚糖,且吸水后具有凝胶性质。国内外有研究表明魔芋葡甘聚糖具有促进消化道黏液分泌,抗炎,抗氧化,促进细胞增生,抗癌等作用,据此提出本研究假设:魔芋提取物通过其抗炎,促增生,促黏液分泌及抗凋亡作用可以在胃溃疡的损伤修复和治疗过程中发挥较好的作用,且其机制可能与EGF-EGFR信号通路有关。 【设计思路】 采用大鼠胃溃疡模型,比较不同剂量的魔芋粉治疗组、EGFR阻断剂AG1478联合不同剂量魔芋治疗组和对照组之间的胃溃疡损伤与细胞增生修复的程度差异,以此证实魔芋提取物对于胃溃疡具有治疗作用,且初步明确其作用机制。 【实验内容】 (1)模型建立:采用无水乙醇灌胃诱发急性胃溃疡大鼠模型。(2)给药处理:实验设正常对照组,胃溃疡模型组,自然恢复组,低、中、高浓度魔芋粉治疗组,AG1478对照组,低、中、高浓度魔芋粉联合AG1478治疗组。(3)取材检测:给药5 d,断食不断水1 d后处死大鼠,采血,分离血清;取最大溃疡边缘胃组织,分别进行相关蛋白检测和制备石蜡切片备用。(4)实验观察:形态学观察胃黏膜损伤指数(UI),胃黏液变化,组织病理改变;ELISA法检测血清TNF-α、IL-8含量;免疫组织化学法染色进行PCNA表达检测;蛋白质印迹检测EGF、EGFR、BCL-2蛋白、Bax蛋白、K-ras蛋白表达情况。 【材料】 SD大鼠,魔芋粉,阿尔新蓝染液,AG1478,及TNF-α、IL-8、EGF、EGFR、BCL-2、Bax、K-ras等相关检测试剂盒。 【可行性】 (1)学校具备完善的配套仪器设备是本实验研究顺利开展的有力保障。(2)实验所用药品及试剂盒均可直接购得。(3)通过前期实验准备,本团队已掌握研究所需的实验技术。(4)前期预实验结果表明,魔芋提取物治疗后,胃黏液量及中性胃黏膜比例增加,炎症因子减少,细胞增殖增加,这与本研究假设相符合,提示本实验有较好的研究前景。 【创新性】 目前国内外对魔芋的药用研究较少,本研究则根据魔芋抗炎,促增生,促黏液分泌及抗凋亡等功效,首次将其应用于胃溃疡治疗并探讨其作用机制,具有较强的创新性。     

地西他滨对造血系统肿瘤细胞热休克蛋白22表达的影响

 目的　探讨地西他滨（Aza-C）对造血系统肿瘤细胞热休克蛋白22（HSP22）表达的影响及可能的机制。方法　半定量反转录聚合酶链反应（PCR）法检测HSP22在造血系统肿瘤细胞系以及造血系统肿瘤患者骨髓单个核细胞中的表达水平；去甲基化药物Aza-C（2 μmol／L）诱导上述细胞HSP22的表达；甲基化特异PCR法检测造血系统肿瘤细胞系、造血系统肿瘤患者和健康供者的骨髓单个核细胞中HSP22基因启动子甲基化状态。结果　在检测的13个造血系统肿瘤细胞系、20例不同类型的造血系统肿瘤患者以及10名健康供者骨髓单个核细胞中均未发现HSP22基因的表达；Aza-C能诱导造血系统肿瘤细胞系及造血系统肿瘤患者骨髓单个核细胞中的HSP22表达；Aza-C处理过的造血系统肿瘤细胞系中HSP22基因启动子处于部分去甲基化状态，健康供者及造血系统肿瘤患者骨髓单个核细胞HSP22基因启动子处于高甲基化状态。结论　Aza-C通过使HSP22基因启动子去甲基化诱导造血系统肿瘤细胞HSP22的表达。