表皮生长因子受体对苯并芘诱导的人支气管上皮细胞SIRT1活化的影响

目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）在调控苯并芘（B[a]P）诱导人支气管上皮BEAS-2B细胞沉默信息调节因子1（SIRT1）活化中的作用,阐明EGFR/SIRT1信号转导通路与肺癌发生发展的关系。方法：MOTIF Search^TM分析软件预测SIRT1启动子序列上转录DNA结合位点。培养BEAS-2B细胞,设不加苯并芘的细胞为对照组,苯并芘组细胞暴露于苯并茈（8 μmol·L^-1）不同时间（6、12、24和48h）,RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测各组细胞中EGFR mRNA和蛋白表达水平。将SIRT1启动子荧光素酶报告载体转染入BEAS-2B细胞中,采用人表皮细胞生长因子（hEGF）和酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein处理细胞24h,倒置显微镜观察各组BEAS-2B细胞形态表现,荧光素酶报告基因技术检测SIRT1荧光素酶活性。收集相关肺组织临床标本,免疫组织化学法检测肺组织中EGFR蛋白表达水平。结果：SIRT1启动子序列上含有表皮细胞生长因子（EGF）、铁氧还蛋白（2Fe-2S）和血管性血友病因子（vWF）3个转录因子的DNA结合位点。与对照组比较,苯并芘组细胞中EGFR mRNA表达水平升高（P < 0.05）,且在12h达到峰值,同时EGFR蛋白表达水平均不同程度升高（P < 0.05）。与对照组比较,hEGF组和苯并芘组BEAS-2B中细胞SIRT1荧光素酶活性明显增加（P < 0.05）,hEGF联合苯并芘组BEAS-2B细胞中SIRT1荧光素酶活性增加更为明显（P < 0.001）;Genistein大于30 μmol·L^-1时,细胞排列逐渐稀疏,形态改变明显;Genistein（30 μmol·L^-1）能够抑制苯并芘诱导的SIRT1荧光素酶活性的增加,与苯并芘组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。免疫组织化学法,肺癌组织中EGFR蛋白表达水平明显高于正常肺组织（P < 0.001）。结论：苯并芘暴露下,EGFR能够促进SIRT1的表达,从而诱导肺慢性炎症反应,EGFR/SIRT1信号转导通路在肺癌的发生发展过程中发挥一定的作用。