低氧对Hep-2细胞肿瘤干细胞特性和化疗抵抗的影响及其作用机制

目的 探讨低氧对Hep-2细胞肿瘤干细胞特性和化疗抵抗的影响,并分析其相关机制.方法 构建针对低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)的短发夹RNA重组质粒,转染Hep-2细胞,经筛选建立HIF-1 α基因敲除的Hep-2细胞并检测HIF-1α表达的变化;观察低氧条件培养的Hep-2细胞增殖、克隆形成、细胞周期、凋亡及CD133表型等细胞生理学特性变化;流式细胞仪分选CD133+细胞,观察CD133+细胞克隆形成及顺铂杀伤情况,并检测相关基因Oct-4、p53及survivin表达变化.用方差分析及两样本均数比较的t检验进行统计分析.结果 成功建立HIF-1α基因敲除Hep-2细胞,HIF-1 α在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调;低氧培养Hep-2细胞具有较高的增殖活性及克隆形成能力,凋亡率降低,细胞周期GO/G1期阻滞、CD133表达升高,而HIF-1α基因敲除后上述变化减弱;成功分选出Hep-2细胞中的CD133+细胞,CD133+细胞克隆形成能力高、顺铂杀伤抗性强,而HIF-1α基因敲除后上述能力降低,并出现Oct-4表达下调,p53表达上调,survivin表达下调.结论 低氧能够诱导和强化Hep-2细胞的肿瘤干细胞特性,增强CD133+细胞的增殖分化和化疗抵抗能力,其作用机制可能与HIF-1α及其诱导的相关基因表达变化相关.     

Survivin反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞放疗的增敏作用

目的探讨SUrvivin在放疗诱导喉癌细胞凋亡中的作用以及Survivin反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASODN）技术对HeP-2细胞株增殖、凋亡及其放疗敏感性的影响。方法人工合成硫代SurvivinASODN,通过脂质体法转染人喉鳞状细胞癌Hep一2细胞株后,采用：①流式细胞法测定SurvivinASODN转染Hep一2细胞的转染率;②RT-PCR法检测基因转染后SurvivinmRNA的表达情况变化;③流式细胞仪检测射线照射后细胞凋亡率及Survivin蛋白的变化。结果①各浓度带FITC标记的SurvivinASODN转染细胞后6小时,取转染细胞制成的单细胞悬液,于流式细胞仪进行检查,发现转染效率均为94％～98％;②各浓度SurvivinASODN作用于Hep-2细胞24小时后,均出现SurvivinmRNA的表达下调,并呈剂量依赖关系,同时伴有细胞凋亡率的升高;③放疗~DSurvivinASODN转染组细胞凋亡率均显著高于单纯放疗组细胞凋亡率（P〈0．05）,随着SurvivinASODN剂量的增加,细胞凋亡率逐渐增加（P〈O．01）。放疗加ASODN转染组细胞Survivin蛋白表达率低于单纯放疗各组细胞Survivin蛋白表达率（P〈0．05）。各实验组与对照组中凋亡率的变化与Survivin蛋白荧光指数的变化呈负相关。结论喉癌细胞对放疗的抵抗作用与Survivin蛋白的表达水平有关,Survivin反义寡核苷酸转染Hep-2细胞株能够提高细胞对放疗的敏感性。     

梅尼埃病患者外周血IL-10、IL-4、IFN-γ、IL-17水平的研究

目的 通过检测梅尼埃病(Meniere’s disease, MD)患者外周血清Ⅰ型变态反应相关因子的表达,探讨Ⅰ型变态反应在MD发病机制中可能的作用。方法 以31例MD患者为MD组(年龄33～77岁),耳科正常受试者18例为对照组(年龄30～69岁),用酶联免疫吸附法检测两组血清中白介素-10(interleukin-10,IL-10)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-17(interleukin-17,IL-17)、总免疫球蛋白E(total immunogloblin E,tIgE)水平,比较两组结果。结果 MD组tIgE阳性率明显高于对照组(51.61%vs 16.67%,P<0.05),两组间血清IL-4、IFN-γ、IL-17、IL-10浓度差异无统计学意义(P>0.05)。MD组IL-4/IFN-γ高于对照组(1.00±0.23 vs 0.73±0.23),IL-17/IL-10高于对照组(0.29±0.07 vs 0.24±0.07),差异均有统计学意义(P<0.05)。结...     

机器学习模型k近邻算法分析脑电图对主观性耳鸣的诊断价值

目的探讨机器学习模型k近邻算法分析脑电图对主观性耳鸣的诊断价值。 方法纳入主观性耳鸣患者87例(耳鸣组),健康受试者91例(对照组)。使用MATLAB和EEGLAB工具箱、小波包变换和样本熵相结合的方法分析两组δ、θ、α1、α2、β1、β2、β3、γ频段在耳鸣发生网络相关7个区域的样本熵差异。对耳鸣脑电图特征数据使用Python的scikit-learn包进行k近邻算法分析,使用准确率、召回率、精确度和F1得分评估k近邻算法对主观性耳鸣的诊断价值。 结果两组样本熵在左听觉、左额叶、中央、右顶叶和左顶叶等区域差异有显著性(P＜0.05)。耳鸣组δ、α2和β1节律平均熵大于对照组,θ、α1、β2、β3和γ节律平均熵小于对照组(P＜0.05)。耳鸣组和对照组样本熵在FC5、C1、CP1和P4单通道中差异有显著性(P＜0.05)。k近邻算法对主观性耳鸣的诊断准确率为91.98%,召回率为90.24%,准确率为96.28%,F1得分为93.12%。 结论机器学习模型k近邻算法分析脑电图结果可以辅助临床医生对耳鸣进行诊断。     

突发性聋与炎症因子的关系研究进展

<正>目前,突聋发病的病因尚不清楚,在众多学说中,内耳微循环障碍为许多学者所认同,所以当前治疗突聋多采用针对循环障碍的措施,如：糖皮质激素、改善循环、扩血管及营养神经等综合性治疗。因此,各种能够导致内耳微循环障碍的因素也得到越来越多的重视。已有大量研究^[1-4]表明突聋患者外周血中的部分炎症相关指标存在异常,表明炎症因子可能与内耳微循环障碍引发突聋有关。故本文针对炎症因子致内耳微循环障碍的发病机制综述如下。     

组织缺氧诱导因子-1α及相关靶基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达

目的 检测喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织缺氧诱导因子-10α( hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter protein-1,GLUT-1)、血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)的蛋白表达情况,并通过体外实验进一步验证低氧对喉鳞癌细胞HIF-1α及其下游靶基因GLUT-1、VEGF的表达上调方面的重要促进作用.方法 采用SP免疫组织化学和免疫细胞化学方法检测喉鳞癌组织和Hep-2细胞中HIF-1α、GLUT-1、VEGF蛋白的表达,分析HIF-1α与GLUT-1、VEGF表达的相关性.结果 35例喉癌患者组织切片中16例HIF-1α表达阳性(45.7％),16例GLUT-1表达阳性(阳性率45.7％),19例VEGF表达阳性(阳性率54.3％).HIF-1α和VEGF的表达水平与喉癌病理分级和淋巴转移有关(P值均＜0.05);GLUT-1表达水平与淋巴转移有关(P＜0.05).体外实验结果显示,Hep-2细胞在低氧条件下HIF-1α、GLUT-1、VEGF的蛋白表达明显增加(P值均＜0.05).结论 HIF-1α可作为转录调控因子参与调控GLUT-1、VEGF的表达,进而在喉癌的发生、侵袭、转移过程中发挥重要作用.     

缺氧诱导因子1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌的放疗增效作用

目的探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）反义寡核苷酸结合放射对人喉鳞状细胞癌（简称喉癌）裸鼠移植瘤生长抑制敏感性的影响。方法对25只裸鼠建立喉癌裸鼠模型,分为5组：A组（正义放疗）、B组（反义放疗）、C组（空脂质体放疗）、D组（放疗）和E组（空白对照）,治疗期间每3 d测量1次鼠重、瘤体最大长径及最大垂直径,治疗21 d后将实验鼠脱颈处死,瘤体称重后应用流式细胞仪、免疫组化观察抑瘤、凋亡情况及相关蛋白表达。结果反义放疗组瘤重（1.037±0.106）g明显低于其余4组（P〈0.05）,抑瘤率（50.21±8.10）%和凋亡率（34.52±4.159）%明显高于其余4组（P〈0.05）。免疫组化PV法染色显示：HIF-1α正义放疗组胞浆有大量棕色颗粒沉积着色,而反义放疗组表达较少;正义放疗组p53表达于胞核呈棕色颗粒浓染,而反义放疗组表达较少;VEGF正义对照组胞浆有大量棕色颗粒沉积着色,而反义放疗组表达较少。流式细胞仪检测结果显示：反义放疗组的HIF-1α、p53、VEGF蛋白表达的荧光指数（fluorescen-ceindex,FI）分别为0.98±0.28、2.13±0.03、1.09±0.36明显低于其余4组（P〈0.05）。结论 HIF-1α反义寡核苷酸结合放疗可以抑制喉癌异体移植瘤的生长,增加肿瘤细胞凋亡率,其机制之一可能是HIF-1α的下调降低了喉癌组织中p53、VEGF的蛋白表达,因此HIF-1α反义寡核苷酸增加喉癌对放疗的敏感性。     

自体骨粉加PALVA瓣填塞开放式乳突根治术21例近期疗效观察

目的:观察使用自体骨粉加PALVA瓣填塞巨大乳突腔的开放式乳突根治术患者近期疗效.方法:回顾性分析2004年10月～2007年10月,有巨大乳突腔的胆脂瘤患者21例,由同一术者行自体骨粉加PALVA瓣填塞开放式乳突根治术.其中,12例一期同时行Ⅲ型鼓室成型术(Sheehy,P.O.P).另9例为再次手术患者,内有6例为巨大乳突残腔引流不良术后一直不干耳的患者,3例为巨大乳突残腔引流不良并发胆脂瘤复发患者.按生理盐水灌注法评判术后乳突残腔容积大小.将大于8 ml的乳突残腔容积确定为巨大乳突腔.结果:12例一期手术患者,11例术后平均27 d之内均获干耳.同时,这些患者听力平均提高约17.5 dB,骨气导间距小于20dB.1例术后感染,骨粉流出,术后55 d获干耳,但植入的人工听骨移位,听力改善不明显.9例二次手术的患者,均在术后18 d获干耳,外耳道乳突腔缩小,保持或略有听力改善.结论:该术式能明显缩短乳突根治术后干耳时间,术后乳突外耳道残腔小,便于长期保持术腔自洁.同期对有适应证患者行鼓室成型术,近期疗效较为理想,远期有待进一步观察.