LRP16基因过表达对卵巢癌细胞HO8910生长及E-钙黏着素的影响

目的:探讨过表达肿瘤相关基因LRP16对卵巢癌细胞株HO8910生长的影响.方法:将含有LRP16基因真核表达载体pcDNA3.1-LRP16及空载体质粒转染卵巢上皮癌细胞株HO8910使其稳定过表达,用MTT法测各组细胞生长曲线,用Western blot方法检测E-钙黏着素(E-cadherin)蛋白的表达.结果:LRP16基因过表达对HO8910细胞增殖无影响,LRP16基因过表达的HO8910细胞的E-钙黏着素( E-cadherin)蛋白表达水平明显下降.结论:LRP16基因对卵巢上皮癌细胞HO8910的增殖无影响,但使E-钙黏着素( E-cadherin)表达明显下降.     

LRP16基因过表达对卵巢癌细胞H08910生长及E-钙黏着素的影响

目的：探讨过表达肿瘤相关基因LRP16对卵巢癌细胞株H08910生长的影响。方法：将含有LRP16基因真核表达载体pcDNA3．1-LRP16及空载体质粒转染卵巢上皮癌细胞株H08910使其稳定过表达,用MTT法测各组细胞生长曲线,用Westernblot方法检测E-钙黏着素（E—cadherin）蛋白的表达。结果：LRP16基因过表达对H08910细胞增殖无影响,LRP16基因过表达的H08910细胞的E-钙黏着素（E—cadhefin）蛋白表达水平明显下降。结论：LRP16基因对卵巢上皮癌细胞H08910的增殖无影响,但使E-钙黏着素（E—cadhefin）表达明显下降。     

白血病相关蛋白16亚细胞定位的研究

目的:研究白血病相关蛋白LRP16基因编码蛋白在真核细胞内的亚定位分布.方法:将LRP16全长基因序列(长型/L型)与LRP16天然缺失体编码序列(短型/S型)融合到绿色荧光蛋白pEGFP真核表达载体的N端,转染鼠成纤维NIH3T3、人乳腺癌MCF-7细胞株,观察绿色荧光的分布;采用细胞免疫荧光染色(CIF)方法和激光共聚焦显微镜进一步鉴定内源性LRP16蛋白在上皮起源性肿瘤乳腺癌MCF-7、宫颈癌Hela,人胚肾293T细胞株的亚细胞分布.结果:绿色荧光融合蛋白LRP16-pEGFP L型在NIH3T3细胞系中以细胞浆型分布为主,在MCF-7中以细胞核型分布为主,绿色荧光融合蛋白LRP16-pEGFP S型在真核细胞内呈核浆均匀分布;CIF染色结果表明内源性LRP16(长型/L型)蛋白在MCF-7、Hela和293T细胞中分别亚定位于细胞核.结论:LRP16是在上皮起源性肿瘤细胞中作为核因子参与其进展,野生型LRP16(长型/ L型)前82个氨基酸在决定LRP16亚定位方面发挥关键作用.     

人类白血病相关性基因LRP16及与肿瘤关系的研究进展

LRP16（Leukemia related protein16）是韩卫东等人于2000年从健康成人外周血淋巴细胞中克隆并首先在国际Genbank中登陆的一个新的白血病相关性基因。随后对其进行了大量的研究，结果表明LRP16基因是ER信号通路上的应答基因，雌激素能刺激LRP16的表达，并参与乳腺癌的增殖、转移、侵袭。研究表明LRP16与子宫内膜癌，卵巢癌等其他恶性肿瘤相关。目前有关LRP16与恶性肿瘤的研究还未见报道，因此本文对国内LRP16基因研究进展进行综述。     

雄激素受体功能表位表达载体的构建

目的:构建雄激素受体(AR)功能表位表达载体,为深入研究AR与LRP16体外相互作用机制奠定基础。方法:用真核表达质粒pCMV-AR为模板进行常规PCR扩增,产物纯化后将连入pGEM-T载体,挑取阳性克隆扩增培养后测序并进行酶切鉴定;回收酶切后AR目的片断最终与BamHⅠ/XhoⅠ双酶切的pcDNA3.1( )载体相连接。结果:测序结果表明四个AR功能表位表达载体插入片段与GenBank中报道的序列完全一致。结论:在克隆AR基因的基础上,成功构建了一组雄激素受体AR功能表位表达载体,可以用于AR与LRP16在体外转录翻译方面的研究。     

角蛋白KRT18对LRP16亚细胞定位的影响

目的:通过构建LRP16绿色荧光蛋白(GFP)融合子,观察LRP16蛋白在乳腺癌MCF-7、小鼠成纤维NIH3T3细胞株中的亚细胞定位,研究角蛋白18(Cytokeratin 18 ,KRT18)对LRP16亚细胞定位的影响,并利用Western-blot对KRT18能够调控LRP16核浆穿梭进一步验证.方法:构建真核表达载体pEGFP-LRP16,经脂质体介导pEGFP-LRP16质粒单独转染,与携带KRT18基因的Flag-pCDNA3-KRT18质粒共同转染NIH3T3、MCF-7细胞,荧光显微镜观察LRP16的亚细胞分布变化.Western-Blot法进一步验证在KRT18过表达和小干扰(siRNA)技术沉默掉KRT18后对内源性LRP16蛋白核浆分布的影响.结果:成功构建pEGFP-LRP16融合载体,荧光显微镜观察LRP16蛋白在MCF-7细胞呈核型分布为主,在NIH3T3细胞呈浆型分布为主.与KRT18共同转导后LRP16亚细胞分布趋向细胞浆.Western blot分析证实角蛋白18会介导内源性LRP16由核向浆穿梭的生物学功能.结论:KRT18通过与LRP16相互作用将LRP16扣留在细胞浆,是影响LRP16亚细胞分布的关键因子.为进一步研究KRT18对LRP16翻译后核功能执行的调控机制奠定了基础.     

角蛋白KRT18对LRP16亚细胞定位的影响

目的：通过构建LRP16绿色荧光蛋白（GFP）融合子，观察LRP16蛋白在乳腺癌MCF-7、小鼠成纤维NIH3T3细胞株中的亚细胞定位，研究角蛋白18（cytokeralin 18，KRT18）对LRP16亚细胞定位的影响，并利用Western—blot对KRT18能够调控LRP16核浆穿梭进一步验证。方法：构建真核表达载体pEGFP—LRP16，经脂质体介导pEGFP—LRP16质粒单独转染，与携带KRT18基因的Flag—pCDNA3-KRT18质粒共同转染NIH3T3、MCF-7细胞，荧光显微镜观察LRP16的亚细胞分布变化。Western—Blot法进一步验证在KRT18过表达和小干扰（siRNA）技术沉默掉KRT18后对内源性LRP16蛋白核浆分布的影响。结果：成功构建pEGFP—LRP16融合载体，荧光显微镜观察LRP16蛋白在MCF-7细胞呈核型分布为主，在NIH3T3细胞呈浆型分布为主。与KRT18共同转导后LRP16亚细胞分布趋向细胞浆。Western blot分析证实角蛋白18会介导内源性LRP16由核向浆穿梭的生物学功能。结论：KRT18通过与LRP16相互作用将LRP16扣留在细胞浆，是影响LRP16亚细胞分布的关键因子。为进一步研究KRT18对LRP16翻译后核功能执行的调控机制奠定了甚础．     

Id蛋白N末端突变体真核表达载体的构建及其三维空间模型预测

目的:构建Id家族蛋白N末端突变体的真核表达载体,并模拟其突变前后的三维空间模型。方法:用带有突变的引物从质粒中扩增出两段突变序列,用拼接PCR的方法将两段突变序列合成一条N末端包含两个突变点的Id序列。应用Swiss-PdbViewer3.7(SP5)软件模拟其突变前后的三维结构模型。结果:构建了一系列Id家族N末端突变体的pcDNA3.1( )真核表达载体。预测出其三维结构的变化。结论:构建Id蛋白家族N末端突变的pcDNA3.1( )真核表达载体,为进一步研究Id蛋白N末端结构的生物学功效奠定基础。