卡红染色在电生理学实验脑组织定位中的应用

在中枢神经系统电生理实验中 ,常通过微量沉积浅蓝色的普鲁士蓝和深蓝色的膀胺天蓝来分别标记刺激电极和记录电极尖端的位置 ,并通过专门的组织学染色技术对标记点进行最后的鉴定。本研究在配合 "神经电生理信号多道同步采集和分析系统 "的开发中 ,尝试着用卡红染色法来确定脑组织标记点的位置。该法在脑组织石蜡切片上将海马等结构染成红色 ,与蓝色标记点对比反差大 ,标记点显示清晰 ,是一种宜于大力推广的在电生理学实验中用于鉴定脑组织标记点的好方法。     

膜片钳实验技术在中药血竭现代化研究中的应用

中药现代化就是运用现代高科技,研制、开发和生产现代中药.具体的讲就是用现代科学技术阐明中药的药理效应和作用机理,最终实现中药的大规模工业生产,具备国际竞争力并能为国际市场接受.膜片钳实验技术是利用高输入阻抗、高增益和低噪声膜片钳放大器,通过使玻璃微电极与细胞膜形成"吉欧封接",实现在单个细胞上进行电生理记录.它能使人们透视到胞内的信使转导过程,了解药物对细胞的各种生物学效应,最终从微观分子水平阐述中药的药理作用.     

白细胞介素1β颜面部镇痛效应的分子途径

目的：观察白细胞介素1β对河豚毒素敏感性钠电流的影响，拟从离子通道水平探讨白细胞介素1β调节颜面部痛的分子机制。 方法：于2004-12／2005-11以2月龄左右的昆明种小鼠为实验对象，取双侧三叉神经节，将经分离得到三叉神经节细胞悬液经200目筛网过滤至直径35mm的培养皿内，待细胞贴壁后更换外液两次，应用EPC-9双通道膜片钳放大器行全细胞膜片钳记录。先经DAD给药系统向细胞喷射细胞外液5s，记录正常钠电流，再经DAD给药系统（ALA，USA）向细胞喷射实验用药，并记录给药后的钠通道电流。用细胞外液洗去残余药物，待钠电流恢复正常水平后，再向细胞喷射另一实验药物，进行下一个记录。两次记录之间的时间间隔不短于3min。药物效应观察完毕后，向细胞外喷射1μmol／L河豚毒素，根据被河豚毒素阻断程度判断所记录的钠电流类型。实验在室温22～25℃范围内进行。 结果：①共稳定记录了81个三叉神经节细胞，其中在25．93％（21／81）的三叉神经节细胞上所记录的钠电流可被河豚毒素完全阻断，9．9％（9／81）的三叉神经节细胞上所记录的钠电流不能被河豚毒素阻断，大多数三叉神经节细胞（61．73％，50／81）上所记录的钠电流可部分被河豚毒素所阻断。②人重组白细胞介素1β显著抑制三叉神经节细胞河豚毒素敏感性INa，使INa的电流密度由给药前的（-86．92&;#177;8．08）PA／PF减为给药后的（-35．35&;#177;2．90）PA／PF（P〈0．05）；联合使用人重组白细胞介素1β及白细胞介素1ra也显著降低给药前INa的电流密度[（-79．27&;#177;7．85），（-37．14&;#177;4．05）PA／PF，P〈0．05]。③与给药前相比，人重组白细胞介素1β使河豚毒素敏感性INaⅠ～Ⅴ曲线显著上升，并使钠电流的最大激活电压向去极化方向偏移约10mV。④人重组白细胞介素1β使河豚毒素敏感性钠通道稳态激活曲线向去极化方向偏移，V1／2给药前后去极化偏移差异有显著性意义[（-40．03&;#177;2．75），（-35．35&;#177;3．47）mV，P〈0．05]。⑤人重组白细胞介素1β不影响河豚毒素敏感性钠通道恢复时间常数，给药前后差异无显著性意义[（4．55&;#177;0．58），（5．29&;#177;1．84）ms，P〉0．05]。 结论：白细胞介素1β直接作用于三叉神经节细胞河豚毒素敏感性钠通道，抑制其离子电流，可部分解释白细胞介素1β的颜面部镇痛作用。     

激活大鼠右侧尾壳核重建双侧海马癫痫网络的细胞机制

目的　 探讨强直电刺激大鼠右侧尾壳核 (rightcaudateputamen ,RCPu)重建双侧海马 (hippocampus,HPC)癫痫电网络的细胞机制。 方法　 实验共用雄性SD大鼠 10 1只 ,体重 2 0 0～ 2 5 0g。急性强直电刺激 (6 0Hz ,2s,0 .4～ 0 .6mA)RCPu (acutetetanizationoftherightcaudateputamen ,ATRC)或右背HPC(acutetetanizationoftherightdorsalhippocampus,ATRDH) ,同步记录双侧前背HPC神经元单位放电 ,比较激活RCPu或RHPC时 ,神经通路长度对HPC癫痫电网络重建过程中单个神经元电活动的影响。 结果　(1)ATRC和ATRDH均能明显地调制单个HPC神经元的紧张式放电成为节律性爆发式放电。 (2 )ATRC引起的HPC爆发式单位放电串放电时程长[(6 5 0 .738± 5 6 .4 19)ms ,n =12 0 ]、串间隔短 [(interburstinginterval,IBI ,(772 .6 0 0± 4 6 .6 6 5 )ms,n =90 ) ;相反 ,ATRDH引起HPC的爆发式单位放电特征是串放电时程短 [(2 70 .6 12± 19.917)ms,n =12 3](T =6 .35 3,P <0 .0 0 1)、IBI长 [(1373.6 6 3± 12 1.2 36 )ms,n =10 3](T =4 .6 2 7P <0 .0 0 1)。 (3)ATRC诱发的海马细胞单位后放电时程长 [(7.0 6± 0 .776 )s,n =10 4 ]、潜伏期长 [(8.77± 1.2 31)trains ,n =30 ],而ATRDH诱发的单位后放电时程短 [(3.93± 0 .6     

家犬颈部血淋巴结的发现和形态学观察

目的　证实哺乳动物颈部血淋巴结的存在 ,并探讨其形态学特征。方法　取健康雄性家犬颈部淋巴结 13个 ,行常规HE染色 ,光学显微镜下观察其形态。结果　所获取的 13个淋巴结中有 6个是血淋巴结 ,表现为髓窦内含有大量红细胞 ;而其他 7个普通淋巴结内罕见红细胞。结论　该研究结果表明哺乳动物颈部也存在着血淋巴结 ,可能参与了哺乳动物颈部的防御性反应     

三叉神经节细胞电压门控通道研究中的钙电流振荡活动

目的 :探讨三叉神经节细胞电压门控性钙通道电流特性。方法 :在急性分离的三叉神经节细胞膜上 ,阻断电压门控性延迟整流钾通道和电压门控性钠通道 ,在 - 70mV的钳制电位下 ,给予 1 0mV步幅递增、80ms步宽的去极化脉冲刺激 ,进行全细胞膜片钳记录。结果 :在仅阻断电压门控性延迟整流钾通道时 ,- 1 0mV的去极化脉冲刺激激活了三叉神经节细胞膜上继快钠电流之后的慢内向电流 ,呈重复开闭的振荡特性 ;同时阻断电压门控性延迟整流钾通道和电压门控性钠通道 ,在 - 2 0mV的去极化脉冲刺下 ,也可记录到呈振荡特性的慢内向电流。振荡电流可被细胞外喷射的 1mmol·L-1 尼福地平所阻断。结论 :三叉神经节细胞膜上高电压激活的重复开闭慢内向电流可能为电压门控性钙电流 ,其振荡特性可能与感觉信息中枢传入的初级加工有关。     

血竭总黄酮对三叉神经节细胞河豚毒素不敏感型钠电流峰值的浓度依赖性抑制：血竭镇痛效应的有效部位

目的：三叉神经节细胞河豚毒素不敏感型钠通道与颜面部痛觉产生有关，是外周镇痛药物作用的理想靶点。观察血竭总黄酮对其的干预效应，以阐明血竭产生镇痛效应的有效部位。方法：实验于2004-01在中南民族大学生物医学工程研究所膜片钳实验室完成。选择1月龄左右的昆明种小鼠，酶解消化法急性分离小鼠三叉神经节细胞，应用全细胞膜片钳技术，在小鼠三叉神经节细胞膜上观察不同浓度（0．01，0．1，1g/L）血竭总黄酮对河豚毒素不敏感型钠通道电流的影响。结果：血竭总黄酮对河豚毒素不敏感型钠通道电流的峰值具有浓度依赖的抑制作用，质量浓度为0．01，0．1，1g／L时其抑制率分别为（13．90&;#177;2．15）％，（31．61&;#177;3．03）％，（50．12&;#177;3．72）％，半数抑制浓度，IC50为0．9216g/L，且抑制作用可逆；高浓度（1g/L）的血竭总黄酮加速该类钠通道电流的失活过程（半失活电压向超级化方向偏移11．72 mV），延迟其复活过程，而对激活过程无显著影响（半激活电压向去极化方向偏移0．99 mV）。结论：血竭总黄酮是血竭抑制三叉神经节细胞河豚毒素不敏感型钠通道电流的有效部位，且这种抑制效应发生在通道的失活过程而非激活过程，并具有浓度依赖性。     

复方二精灵多糖抗脑缺血缺氧损伤的分子机理

目的：研究复方二精灵多糖抗脑缺血损伤的分子机理。方法：采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的小鼠海马CA1区神经元电压门控性钠电流，观察复方二精灵多糖对钠电流的影响，拟从离子通道水平揭示复方二精灵的抗缺血缺氧脑损伤作用。结果：0．1％复方二精灵多糖显著抑制海马神经元电压门控性钠通道电流锋值，使钠电流的半激活电压向去极化方向偏移，不影响钠电流的稳态失活及复活曲线。结论：复方二精灵多糖对海马神经元电压门控性钠电流的抑制作用可能为复方二精灵抗缺血缺氧脑损伤的重要机理。     

龙血竭对免疫调节功能相关性Kv1.3通道的抑制作用

目的拟调查龙血竭对免疫调节功能相关性Kv1.3通道的影响。方法运用全细胞膜片钳实验检测龙血竭对Kv1.3通道电流及Jurkat细胞膜电位的影响;运用ELISA实验检测龙血竭对细胞炎性因子白细胞介素-2释放的影响。结果龙血竭对外源性表达在HEK293T细胞及内源性表达在Jurkat T细胞上的Kv1.3通道产生了浓度依赖性抑制作用;龙血竭尚可以诱导Jurkat T细胞膜电位发生去极化改变,抑制植物血凝素激活的Jurkat T细胞炎性因子白细胞介素-2的释放。结论该研究首次报道了Kv1.3通道是龙血竭赖以产生免疫抑制作用的受体靶蛋白,部分阐明了龙血竭产生免疫抑制效应原细胞和分子机制。     

组织学实验教学资源的网络化管理

目的:率先制作网络管理平台,实现对组织学实验教学资源的网络化管理,填补国内这一研究领域的空白。方法:采用Apache HTTP Server+MySQL Server+PHP黄金组合工具,进行组织学实验教学信息网络管理平台的构建。结论:测试结果表明通过该套网络管理平台,可以及时更新组织学实验教学资源,而学生(会员)则可以通过计算机网络自由下载这些教学资源,有效实现师生之间的教学信息互动。