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本文对41例健康儿童和17例反复上呼吸道感染患儿外周血淋巴细胞腺苷脱氨酶(ADA)活性进行了检测。在此基础上筛选出2例反复上感伴ADA活性低下患儿。在体外对这2例患儿的外周血T淋巴细胞进行培养后,以Lipofectin(脂质体)介导的方法对其进行了外源性ADA基因的基因转移。结果显示:2例患儿体外培养淋巴细胞ADA活性较转基因前升高。同步进行的标志基因pBLacZ的基因转移的检测结果也直观地证实了Lipofectin介导的基因转移是成功的。该研究为ADA-SCID淋巴细胞基因治疗的研究提供了初步的体外实验资料。 相似文献
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ADA活性紫外吸收测定法的改良及复感儿淋巴细胞该酶活性的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
检测了42例健康儿童和17例反复上呼吸道感染患儿(复感儿)的血淋巴细胞腺苷脱氨酶(ADA)活性,结果表明:复感儿的血淋巴细胞中ADA活性较健康儿童低下,且大多同样伴有不同程度的免疫功能低下;从复感儿组中筛选了两侧ADA活性和免疫功能明显低下的患儿,拟采用这两例患儿的血淋巴细胞进行ADA-SCID基因治疗的实验研究。 相似文献
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氯化锂离心纯化质粒DNA方法的建立及其效果评价 总被引:1,自引:0,他引:1
本文建立了一种采用氯化锂离心纯化质粒DNA的方法。该法不需要特殊的仪器设备和昂贵的试剂材料,操作简便易行。用此法对pUC和pGEM等多种系统的质粒进行了提取纯化。结果表明:纯化的质粒DNA无RNA、蛋白质和染色质DNA污染,其得率与氯化铯超离心法相近;酶切效果良好;可直接用于哺乳动物细胞的基因转移并获得有效表达。 相似文献
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转染人CD80基因的黑色素瘤细胞生长特性及免疫原性探讨 总被引:3,自引:0,他引:3
】 ObjectivesTo investigate the
effects of the CD80 costimulatory molecule expression on the immunogenicity and biological
characteristics of poorly immunogenic B16 melanoma cells,explore the relationship between
the immunogenicity of tumor cells and cell surface molecules. MethodsHuman
CD80 cDNA was transfected into B16 melanoma cells by lipofectin-mediated gene transfer
before the expansion of tumor cells were tested by MTT method in vitro;C57BL/6 mice were
inculated subcutaneously either mock-transfected B16 cells (B16-neo)or CD80-transfected
B16 cells (B16-CD80),then the latency,survival times and tumor mass growth were
investigated.The lymphocytes were examined for both proliferation indices (PI) and
specific cytotoxic activity by MTT method and improved LDH-releasing method,after syngenic
Mixed Lymphocyte tumor cultures (MLTCs). ResultsIn the B16-CD80
cells,in which CD80 expression were detected by SABC method, demonstrated slower growth
rate than B16-neo Clles in vivo (P<0.05),though they didn't in vitro. Compared with
B16-wt and B16-neo cells,B16-CD80 cells more effectively induced the proliferation of
effector lymphocytes and the generation of specific lytic activity against B16-wt cells. ConclusionsThe
CD80 (B7-1) expression in poorly immunogenic tumor cells can increase their immunogenicity
and decrease their tumorigenicity,the effects are associated with the expression of ICAM-1
and MHC molecules on tumor cells surface. 相似文献
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ADA—LacZ融合基因直接注射导入大鼠骨骼肌后的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
ADA-LacZ融合基因经直接注射导入大鼠骨骼肌内,用X-gal和ADA组化染色方法检测的结果表明:在大鼠骨骼肌细胞中,可检测到由pFP表达的ADA和β-gal活性。这提示有望探索出一条对某些遗传性疾病、肿瘤及其它多种疾病导入外源基因实施基因治疗的便捷、可行的途径 相似文献
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采用醋酸纤维薄膜电泳分辨人、鼠淋巴细胞与红细胞中的腺苷脱氨酶(ADA)同工酶。对已进行人ADA基因转移并筛选后的鼠T淋巴细胞株Yac-I进行分析检测,发现该细胞株出现一条泳动速率与人ADA同工酶相同的电泳带,证实外源性人ADA基因可导入体外培养的鼠T淋巴细胞株Yac-I并表达人的ADA。 相似文献
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p53基因结构和表达的改变与慢性粒细胞性白血病急变的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
应用PCR- SSCP、Northern blot和免疫细胞化学方法,对30例临床各期慢性粒细胞性白血病(CML)和K562、HL-60细胞系进行p53基因突变与表达的研究。结果发现,17例慢性期CML中仪1例有外显子6的突变和细胞内P53蛋白的聚积,所有病例均可检测到p53的mRNA表达。而4例加速期和9例急变期CML中各有2例分别在外显子5、6、7上发现突变,有p53表达的仅7例,1例加速期患者的P53蛋白呈强阳性。K562和HL-60细胞系中P53蛋白和mRNA均呈阴性。CML恶化进程中p53基因突变和表达频率的改变表明P53基因的改变至少在部分CML急变中起着重要作用。 相似文献
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本文对GAA的纯化进行了改良,通过CM-SephadexC-50离子交换、酸化沉淀、(NH_4)_2SO_4分段盐析和SephadexG-100亲和层析等步骤,从人胎盘中提纯了GAA,其比活性为698,729nmol(mgPto.h)~(-1),纯化倍数达3319.4倍,获得率为10.58%。IEF证明已达电泳单点纯,PI=4.7。PAGE上呈现两条蛋白带,与酶染位点一致,分子量分别为110kD和76kD。 相似文献