自身抗体检测的临床应用与质量控制

自身抗体的检验项目种类较多,检验方法也比较丰富,目前已有效应用到多种自身免疫性疾病中以协助临床诊断与治疗,受到临床医师的广泛认可。检测过程中保障严密的操作流程以及相关设备准备,可充分保证良好的检验质量,能够为临床诊治提供更有效依据。     

外周血CD4+CD25+调节性T细胞与乙型肝炎疫苗接种后应答关系的研究

目的 通过检测乙型肝炎(简称乙肝)疫苗接种后弱应答和无应答人外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞(CD4+ CD25+ regulatory T cell,简称Treg细胞)的频率,探讨CD4+ CD25+ 调节性T细胞与乙肝疫苗接种后弱和(或)无应答之间的关系.方法 利用流式细胞分析方法 对25例乙肝疫苗无应答、30例乙肝疫苗弱应答者外周血Treg细胞的频率进行分析,另外选取20例乙肝疫苗强应答者作为对照.结果 强应答组Treg细胞的频率为(4.32±1.21)%,弱应答组Treg细胞的频率为(7.01±1.06)%,无应答组Treg细胞的频率为(12.75±2.01)%,无应答组和弱应答组与强应答组相比Treg细胞频率显著升高(t=8.426,t=3.289,P值均＜0.01).结论 乙肝疫苗接种后无应答和弱应答现象与外周血CD4+ CD25+ 调节性T细胞频率升高存在一定关系.     

抚顺地区妇女妊娠期特异性甲状腺功能参考区间的建立与评价

目的 建立辽宁省抚顺地区妇女妊娠期特异性甲状腺功能检测指标的参考区间,比较与非妊娠妇女参考区间的差异,评估依据非妊娠人群参考区间造成的妊娠甲状腺疾病误诊、漏诊率,探讨妊娠期甲状腺疾病的正确诊断.方法 选取662例妊娠期女性,按照美国临床生化研究院的标准(National Academy of Clinical Biochemistry,NACB)筛选出妊娠早期、中期、晚期妇女各120例,采用DXI 800全自动化学发光免疫分析系统及配套试剂测定TSH、FT3、FT4水平,经数据分析建立甲状腺功能参考区间,并比较其与非妊娠妇女参考区间的差异,计算662例妊娠期女性按非妊娠人群参考区间判定的误诊率.结果 妊娠早期参考区间:TSH(0.08 ～ 5.21) mIU/L,FT3 (2.51～4.67)pmol/L,FT4 (7.17 ～ 15.24) pmol/L;妊娠中期TSH (0.46 ～ 3.64) mIU/L,FT3 (2.18 ～4.13) pmol/L,FT4(6.20 ～10.71)pmol/L;妊娠晚期:TSH(0.32 ～ 4.33) mIU/L,FT3(2.05～3.36)pmol/L,FT4(6.25 ～ 12.20) pmol/L.使用非妊娠人群参考区间判定,妊娠早期将有13.2％ TSH、6.6％FT3和3.9％ FT4被误诊;妊娠中期误诊率分别为3.6％、10.6％和27.0％;妊娠晚期误诊率分别为4.2％、50.0％和22.0％.结论 应用非妊娠正常人群的参考区间判定妊娠妇女甲状腺功能,将会导致部分妊娠妇女被误诊,采用各实验室的设备与方法建立应用本地区妇女妊娠期甲状腺功能特异性参考区间会降低妊娠妇女甲状腺功能异常的误诊率.     

免疫磁珠法分离人外周血CD4+CD25+调节性T细胞

目的 建立人外周血单个核细胞中CD4 CD25 调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离力(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率.方法 采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人周血单个核细胞中的CD4 CD25 调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CIM细胞,再用抗CD25 的磁珠阳性分选CD4 CD25 T细胞.分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;内因子染色检测其转录因子FOXV3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4 CD25-T细脆殖抑制效应.结果 阴性分选CD4 T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4 CD25 Treg细胞的纯度(95.1±1.2)%.胞内因子染色FOXF3在CD4 CD25 Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%.3H-TdR掺入法检测其对CIM CD25-T细胞具有明显的抑制作用.结论 采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4 CIY25 Treg,为进一步研究其功能提供了方便.     

肝癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义

背景与目的CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 regulatoryTcells)在自身免疫耐受、移植和抗肿瘤应答中起着重要的作用,它们在肿瘤患者中的作用机制尚未阐明。本研究分析、探讨肝癌患者肿瘤组织和外周血CD4 CD25 调节性T细胞频率的临床意义。方法应用流式细胞仪分析肝癌患者的肿瘤组织、外周血和非肝癌对照组中单个核细胞(PBMCs)的CD4 CD25 调节性T细胞频率。结果肝癌患者外周血CD4 CD25 T细胞占PBMCs(6.9±2.8)%,肝癌组织CD4 CD25 T细胞占(6.7±1.6)%,均较对照组显著增高。并且CD4 CD25 T细胞的阳性率与淋巴结转移率和TNM分期存在相关性。淋巴结转移阳性和TNM分期越晚,CD4 CD25 T细胞的阳性率越高。结论CD4 CD25 调节性T细胞在肝癌患者中比例升高,可能是肝癌患者细胞免疫功能削弱的机制之一。     

肺癌细胞株A549培养上清诱导CD4+CD25+调节性T细胞频率增高

目的研究肺癌细胞株A549培养上清是否能够诱导外周血CD4 CD25 调节性T细胞(简称:Treg细胞)频率增高。方法选择20例健康人并分离其外周血PBMC,设上清组和对照组,上清组用A549培养上清和用PHA(植物血球凝集素) A549培养上清分别诱导,对照组设空白和单用PHA诱导,用流式细胞仪技术检测两组PBMC不同诱导条件Treg细胞的频率变化。结果用A549培养上清诱导后,上清组Treg细胞的频率与对照组空白孔相比,差异有统计学意义(P<0.05);用PHA A549培养上清诱导后,上清组Treg细胞的频率与对照组PHA孔相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌细胞株A549培养上清能够诱导CD4 CD25 调节性T细胞频率增高。     

肱骨骨折合并桡神经损伤的治疗体会

我院1998年5月～2004年5月间，共治疗肱骨骨折患者237例，其中肱骨骨折合并桡神经损伤59例，并对其中46例患者进行随访，现就治疗方法、结果及随访情况总结分析如下。     

利用CRISPR/Cas9技术制备TCR V基因敲除小鼠

目的利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术建立TCR V基因敲除小鼠。方法针对Trbv13-3、Trbv19基因编码序列分别设计向导RNA(single guide RNA,sg RNA),制备相应质粒,将表达sg RNA和cas9蛋白的质粒用Lipo2000转染进小鼠成神经瘤细胞N2A中,通过药物筛选获得细胞库。经过单克隆测序检测细胞库中基因组的突变效率,筛选出效率最佳的sg RNA。体外转录获取sg RNA和Cas9 m RNA,进行小鼠受精卵的显微注射,提取出生的小鼠的基因组DNA进行测序鉴定。结果 6号小鼠Trbv13-3和Trbv19基因各有1个bp的增加和减少,形成移码突变,Trbv13-3和Trbv19基因的表达被破坏。结论成功构建出Trbv13-3和Trbv19基因敲除小鼠,为深入研究Trbv13-3和Trbv19基因与TCR谱系形成的关系提供了小鼠模型。     

整合法预测HBV相关抗原的HLA-A* 0201限制性结合肽

目的 预测HBV的相关抗原HBsAg、HBcAg、DNA polymerase新的HLA-A*0201限制性结合肽.方法 选取SYFPEITHI、BIMAS、SVMHC、IEDB、EpiJen预测工具以及整合法预测抗原对应蛋白序列P03146,P03138,P03156的HLA-A*0201限制性结合肽,并与现有表位数据库中的结合肽比较.结果 整合法与单个预测算法相比提高了预测的灵敏度和特异性,对3种抗原的预测准确性均有提高,MR(misclassification rate)值分别降为1.14%、3.41%、1.46%;利用此方法发现3种抗原尚未得到实验验证的HLA-A*0201结合肽,分别为,HBcAg:ELMTLATWV(64-72)、LMTLATWVGV(65-74);HBsAg:LMT-LATWVGV(246-254)、IIFLFILLL(244-252)、FLFILLLCU(246-255)、SLYSILSPFL(367-375)以及LLCLIFLLvL(251-260);DNA polymerase:SLFTAVTNFL(513-522)、GLLGFAAPFT(554-563);在HBsAg蛋白序列中发现了31个氨基酸的免疫热点区域FIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLI(243-273).结论 整合法比单个预测算法性能更好,能够更准确地预测抗原的HLA限制性结合肽,采用该方法所发现的9条可能表位和1个免疫热点区域为后续HBV新表位的鉴定及其功能研究提供了有价值的线索.     

胃癌、食管癌中NY-ESO-1抗原特异性免疫应答与生存率的关系研究

目的 分析胃癌、食管癌中NY-ESO-1抗原基因的表达分布、NY-ESO-1157-165表位引发的特异性细胞免疫应答的状态与生存率的关系.方法 利用RT-PCR方法检测112例胃癌和76例食管癌患者肿瘤标本和正常胃黏膜中NY-ESO-1抗原基因的表达,应用多色流式分析结合HLA-A2限制性表位肽/五聚体复合物技术对胃癌、食管癌患者外周血NY-ESO-1157-165表位特异性CTL进行精确定量.回顾分析20例NY-ESO-1+/HLA-A2+患者,随访3年,比较不同免疫应答状态对生存率的影响.结果 食管癌患者中NY-ESO-1 mRNA表达频率(36.8%)明显高于胃癌(13.4%).在20例检测到的NY-ESO-1+HLA-A2+患者中,强反应者(CD8+pentamer+cells ≥0.5%)生存率明显高于弱反应者(CD8+pentamer+cells<0.5%)(P<0.01).结论 胃癌、食管癌患者均有不同程度表达NY-ESO-1,其特异性免疫应答被检测到,并与生存率有关.