儿童末梢血不同放置时间对血常规各参数的影响

目的探讨儿童末梢血不同放置时间对血常规各参数的影响,以此提高临床血常规检测的工作效率。方法收集2015年1月至2016年1月于该院就诊的50名健康儿童的右手无名指末梢血各300μL,室温下(20~25℃)使用全血细胞分析仪于采集即刻(0min),5、10、15、30min进行血常规检验。结果以15min的测定结果为对照,与其他时点的血常规检测结果比较差异无统计学意义(P0.05);与5min的血常规检测结果比较,白细胞计数(WBC)、血小板体积分布宽度(PDW)、淋巴细胞绝对值(LYM)、中性粒细胞绝对值(NEU)、血小板计数(PLT)、红细胞体积分布宽度(RDW)、红细胞压积(HCT)、血小板压积(PCT)差异均具有统计学意义(P0.05)。结论合理安排时间,消除分析前误差,减少末梢血放置时间对血常规各参数的影响,对临床数据的准确判定具有重要意义;建议血常规检测时间控制在10~30min内,以此提高临床检测的工作效率。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及原核表达

目的从分离培养的金黄色葡萄球菌中提取肠毒素A（SEA）基因,亚克隆入表达载体pET-28a（＋）,诱导融合蛋白的表达,为肠毒素A应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEA的序列,设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增SEA,纯化DNA进行BamHⅠ、XholⅠ双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET-28a（＋）连接,转化大肠杆菌BL21,并对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达。结果以金黄色葡萄球菌DNA为模板,成功扩增了SEA基因,基因大小为774bp,重组PET-28a（＋）-SEA双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEA在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.9%。经IPTG诱导后,SDS-PAGE可见pET-28a（＋）-SEA/BL21在相应分子量（约30000Mr）条带大量表达,免疫印迹能检测到目的蛋白条带,说明其与His标签融合表达。结论克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为肠毒素A应用研究奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及原核表达

目的从分离培养的金黄色葡萄球菌中提取肠毒素A(SEA)基因,亚克隆入表达载体pET-28a(+),诱导融合蛋白的表达,为肠毒素A应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEA的序列,设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增SEA,纯化DNA进行BamHⅠ、XholⅠ双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21,并对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达。结果以金黄色葡萄球菌DNA为模板,成功扩增了SEA基因,基因大小为774bp,重组PET-28a(+)-SEA双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEA在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.9%。经IPTG诱导后,SDS-PAGE可见pET-28a(+)-SEA/BL21在相应分子量(约30000Mr)条带大量表达,免疫印迹能检测到目的蛋白条带,说明其与His标签融合表达。结论克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为肠毒素A应用研究奠定了基础。     

广州地区1688例正常儿童静脉血血小板参数参考范围调查

目的建立广州地区正常儿童静脉血血小板5项参数即PLT、MPV、PCT、PDW、P-LCR的正常参考范围。方法应用日本东亚公司的sysmex2100全自动血细胞分析仪采用仪器自动吸样的方式对居住在广州地区的1 688名正常儿童的静脉血血小板五项参数进行检测分析,并与国内部分报道结果进行比较。结果血小板五项参数的参考范围中PLT和PCT存在性别差异（P〈0.05）,男性参考范围为：PLT（174.66~406.30）×1012/L、PCT 0.156%~0.384%;女性参考范围为：PLT（125.49~425.05）×1012/L、PCT 0.134%~0.386%。其余指标参考范围为：MPV 6.9~12.1 fl,PDW 8.54%~17.98%、P-LCR 12.46%~40.54%。结论广州地区儿童女性PLT和PCT均值均低于男性,同性别各年龄阶段的指标也部分存在差异,4~8岁年龄段的血小板数为最高。     

一种线性范围宽、抗干扰能力强的葡萄糖速率测定法

目的:建立一种线性范围宽、抗干扰能力强的血糖测定方法以满足临床高血糖样本测定之需要.方法:通过对葡萄糖速率法的改良,进行精密度试验、线性试验、对比试验和干扰试验以评价改良方法.结果:批内CV为2.04%～2.51%,批间CV为2.53%～3.01%;线性范围0.012 3～60 mmol/L;与终点法比较相关系数(r)为0.999,相关无显著性(P＞0.05),直线回归方程为y=0.996x-0.025;甘油三酯＜20.5 mmol/L、血红蛋白＜4 g/L、总胆红素＜960μmol/L不影响测试结果.结论:该法快速、准确、抗干扰能力强,线性范围宽,适用于全自动生化分析仪,有推广应用价值.     

广州儿童血清总蛋白、白蛋白、球蛋白及A/G比值参考值调查

目的建立广州地区健康儿童血清总蛋白、白蛋白、球蛋白及A/G比值的参考范围。方法应用日立7600全自动生化分析仪对广州地区2 960名健康儿童的血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)进行检测,计算球蛋白(GLB)、A/G比值,对结果进行统计分析。结果 TP、ALB、GLB、A/G均不存在性别差异(P0.05)。儿童蛋白各参考范围为TP 60.17～74.13 g/L,ALB 39.43～48.47 g/L,GLB 18.21～28.29 g/L,A/G 1.46～2.36。各年龄段的蛋白参考范围有统计学差异,TP、ALB、GLB与年龄呈正相关,A/G比值与年龄呈负相关。结论旧的参考范围已不适用于当今儿童,各地、各实验室应测定一批健康儿童的标本,统计出本实验室的参考范围。     

定量比值法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性的实验评价

目的:对定量比值法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性的方法进行实验评价.方法:用日立7600型生化分析仪对改良C6PD定量比值法试刺盒进行精密度、线性、干扰和稳定性实验,对该方法作出评价.结果:G6PD酶活性在800～10 000 U/L、6PGD酶活性在1100～5 000 U/L之间批内CV小于10%:G6PD酶在0～10000 U/L和6PGI)酶在0～5 000 U/L活性之间线性良好;干扰实验显示对胆红素、血红蛋白、甘油三酯均具有较强的抗干扰能力;稳定性实验显示标本2～8℃存放10 d结果稳定.结论:该方法、精密度良好、线性、抗干扰能力和稳定性能都较好,能够满临床常规检验的需要.适合常规推广使用.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ldh-1基因的序列分析及原核表达

目的对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株携带的ldh-1基因进行克隆、表达,为L．乳酸脱氢酶（L．LDH）功能研究奠定基础。方法根据金黄色葡萄球菌Newman菌株的基因序列,设计一对特异性引物,以MRSA临床分离株（菌株号：1758）DNA为模板PCR扩增ldh-1,纯化DNA进行BamHI、Xhol I双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET一28a（＋）连接,转化大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用1PTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达。诱导表达后的重组菌经超声破碎离心后,使用Ni2＋_NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。结果成功构建重组表达质粒pET．28a—ldhl,基因测序结果显示,扩增的ldhl基因全长956bp,与金黄色葡萄球菌Mu50株ldhl基因的序列同源性为100％。IPTG诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳在39-103Mr处见目的条带,Westernblot验证了重组蛋白L．LDH的表达。该蛋白呈可溶性表达,纯化后获得0．5g／L的重组蛋白。结论在MRSA（菌株号：1758）1~床分离株中成功克隆及表达了ldh．1基因,获得了纯化的重组蛋白．为进一步进行L．LDH的功能研究奠定了基础。     

广州地区围生期孕妇B族链球菌感染情况及对妊娠结局的影响

目的 探讨广州地区围生期孕妇B族链球菌(GBS)的感染情况及对妊娠结局的影响.方法 选取2019年于该院产科行产前检查的围生期孕妇共2812例为研究对象.采集研究对象阴道及肛周分泌物,采用层析法及培养法检测GBS,并对培养法检出的菌株进行药敏试验.比较GBS阳性及阴性孕妇的不良妊娠结局.结果 培养法检出GBS阳性178例(6.3％),层析法检出GBS阳性354例(12.6％),两种方法检出的GBS阳性率比较,差异有统计意义(χ2=64.309,P<0.05).培养法检出的178株GBS菌株对青霉素、万古霉素、利奈唑胺的敏感率为100.0％,对氨苄青霉素和呋喃妥因的敏感率分别为98.9％和94.4％.层析法检出的354例GBS阳性孕妇早产、胎膜早破、宫内感染发生率均明显高于GBS阴性孕妇,差异有统计学意义(P<0.05).结论 GBS感染增加了围生期孕妇早产、胎膜早破等不良妊娠结局的发生率,故临床需加强对围生期孕妇的GBS检测,并积极完善药敏试验,合理选择抗菌药物进行治疗.     

婴幼儿血培养分离细菌及其耐药性分析

目的分析住院婴幼儿(≤3个月)血培养分离病原菌的分布及其耐药情况,为临床合理选择抗菌药物治疗血流感染提供参考。方法收集2011年1月至2015年5月该院疑似血流感染住院婴幼儿(≤3个月)血培养阳性标本分离病原菌299株,采用VITEK 2Compact全自动微生物分析仪进行菌株鉴定和药物敏感试验,分析菌株的构成及耐药情况。结果分离的299株病原菌中革兰阳性球菌169株(占56.5%),主要为凝固酶阴性葡萄球菌95株(占31.8%),其次为金黄色葡萄球菌28株(占9.4%);革兰阴性杆菌120株(占40.1%),主要为大肠埃希菌53株(占17.7%);真菌8株(占2.7%);革兰阳性杆菌2株(占0.7%)。药敏结果显示,除万古霉素、利奈唑烷外,革兰阳性球菌对其他所测试的抗菌药物均呈现耐药性;革兰阴性杆菌除对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南高度敏感外,对其他所测试的抗菌药物均有耐药性;真菌对所有抗真菌药物高度敏感。结论住院婴幼儿血液感染病原菌以革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌为主,耐药情况严峻,临床需合理选择抗菌药物,以提高疗效并减少耐药菌株的产生。