苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexinⅤ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P<0.01）。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡[（42.50±2.63）%,P...     

Sublytic C5b⁃9刺激上调KLF4促进肾小球系膜细胞生成IL⁃23的作用

目的：研究转录因子KLF4调控sublytic C5b?9刺激肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）诱导促炎因子白介素?23（IL?23）生成的作用。方法：构建KLF4的短发夹状小干扰RNA（shKLF4）及过表达质粒（pIRES2?KLF4）。将pIRES2?KLF4或shKLF4 转染GMC后再行sublytic C5b?9刺激,用qPCR、Western blot和ELISA法检查沉默或过表达KLF4基因后对GMC产生IL?23的影响。此外,构建IL?23基因近端启动子全长质粒,行荧光素酶报告基因实验测定沉默或过表达KLF4基因后对IL?23启动子活性的影响。结果：①Sublytic C5b?9刺激GMC后能明显促进IL?23的生成,而沉默KLF4基因后,由sublytic C5b?9诱导GMC产生的IL?23明显减少,但过表达KLF4后IL?23的水平则显著增加。②Sublytic C5b?9刺激GMC能显著上调IL?23的启动子活性,而沉默KLF4基因后由sublytic C5b?9诱导的IL?23启动子活性明显降低,但过表达KLF4后又能显著升高IL?23的启动子活性。结论：Sublytic C5b?9刺激诱导IL?23的生成可通过其刺激上调转录因子KLF4的表达而实现。     

血源性单核巨噬细胞对小鼠脊髓损伤局部巨噬细胞分化的影响

目的:探讨血源性单核巨噬细胞对小鼠脊髓损伤(SCI)局部巨噬细胞分化的影响.方法:将6～8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为两组:SCI+PBS脂质体组(SCIP组)、SCI+氯磷酸二钠脂质体(Chlodrolip)组(SCIL组).两组小鼠分别注射相同剂量两种脂质体.采用流式细胞术(FCM)检测手术前外周血中单核细胞比...     

KLF4调控sublytic C5b-9诱导肾小球系膜细胞IL-23基因启动与表达的作用

目的： 研究转录因子KLF4调控sublytic C5b-9刺激肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell, GMC)诱导促炎因子IL-23生成的作用。 方法：构建KLF4的短发夹状小干扰RNA(shKLF4)及过表达(pIRES2-KLF4)质粒。将pIRES2-KLF4转染GMC或将shKLF4 转染GMC后再行sublytic C5b-9刺激,用qPCR、Western blot(WB)和ELISA法检查沉默或过表达KLF4基因后对GMC产生IL-23的影响。此外,构建IL-23基因近端启动子全长质粒,行荧光素酶报告基因实验测定沉默或过表达KLF4基因后对IL-23启动子活性的影响。结果：(1)Sublytic C5b-9刺激GMC后能明显提高IL-23的生成,而沉默KLF4基因后,由sublytic C5b-9诱导GMC产生的IL-23明显减少,但过表达KLF4后IL-23的水平则显著增加。(2)Sublytic C5b-9刺激GMC能显著上调IL-23的启动子活性,而沉默KLF4基因后由sublytic C5b-9诱导的IL-23启动子活性明显降低,但过表达KLF4后又能显著升高IL-23的启动子活性。结论：转录因子KLF4确能调控sublytic C5b-9刺激 GMC 诱导IL-23的基因启动与表达。     

沉默大鼠KAT7 基因对亚溶解型 C5b⁃9 刺激 GMC 诱导趋化因子 MCP⁃1 生成的影响

目的：研究沉默大鼠赖氨酸乙酰基转移酶7（lysine acetyltransferase 7,KAT7）基因对亚溶解型（sublytic）C5b?9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞（glomerular messangial cell,GMC）诱导单核趋化蛋白?1（monocyte chemotactic protein?l,MCP?1）生成的影响。方法：针对KAT7 基因不同位点,用DNA 重组技术设计4 个小发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）,分别克隆到真核表达载体pGCsi?U6/Neo/GFP/shRNA中。之后,用NeonTM电转仪将上述质粒转染至体外培养的GMC中,再给予sublytic C5b?9 刺激。行Western blot实验检查筛选出针对KAT7基因且有最佳沉默效率的shRNA。此外,用real?time PCR和ELISA法分别检测GMC行不同分组处理后MCP?1的mRNA和蛋白水平。结果：核酸测序表明,重组的shKAT7质粒构建成功。Western blot显示,shKAT7?2 是具备最佳沉默效率的shRNA。用shKAT7 转染GMC后,由sublytic C5b?9 刺激GMC诱导的 MCP?1 基因表达水平显著下降。结论：成功构建了大鼠KAT7 shRNA真核表达质粒,并初步证实KAT7基因的表达能够促进sublytic C5b?9刺激大鼠GMC诱导趋化因子MCP?1的合成与分泌。