产蛋下降综合症(EDS76)病毒基因克隆及其核酸探针的研究

鸡产蛋下降综合症(EDS76)病毒经增殖、分离提纯、蛋白酶K和SDS消化、苯酚抽提、乙醇沉淀,分离出EDS76病毒DNA。用HihdⅡ、BamHⅠ、PstⅠ、EcoRⅠ进行病毒DNA酶切。选择PstⅠ限制酶酶切片段与pUC19质粒载体连接,转化大肠杆菌,筛选带有插入片段的白色菌落进行增菌培养。分离含插入片段的质粒DNA用光敏生物素标记制成DNA探针,检测人工感染EDS发病鸡的粪便、蛋、输卵管样品,以新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊炎病毒(IBDV)、包涵体肝炎病毒(IBHV)作对照。结果显示,探针能特异地检出EDS病鸡粪便、输卵管、蛋清样品中的病毒,与NDV、IBV、IBDV、IBHV均呈阴性反应。探针灵敏度达10pgEDSV-DNA。     

用生物素标记幽门螺旋菌寡核苷酸探针及应用

幽门螺旋菌(Helicobacter pylori,HP)与慢性胃炎、消化性溃疡的关系密切.对HP 感染的实验室诊断,除细菌培养外也建立了多克隆或单克隆抗体的间接免疫荧光试验,快速尿素酶试验等.为了从     

用PCR鉴定性别的绵羊胚胎移植试验

采用deletion-enrichment的方法建立富含绵羊Y染色体DNA文库,筛选出特异克隆,经序列分析,合成一对引物,用PCR扩增Y染色体上特异片段约130bp。在实验室,用初步建立的PCR鉴定胚胎性别技术,对已知性别的6只公绵羊和5只母绵羊的血液样品进行性别鉴定,准确率为100％。在内蒙古牧区生产现场,用研究成功的简易胚胎取样技术和胚胎取样过程中的防污染措施,从绵羊胚胎切取一定数量的细胞经PCR性别鉴定后移植于受体母羊,移植成功18只受体母羊,共怀25只羔羊,有20只羔羊的实际性别与胚胎性别鉴定结果一致,准确率为80％(20/25),其中,公羔与鉴定为雄性胚胎的符合率为87.5％(7/8);母羔与鉴定为雌性胚胎的符合率为76.5％(13/17)。