肠道菌群代谢产物琥珀酸对非酒精性脂肪性肝病小鼠的影响

目的 观察肠道菌群代谢产物琥珀酸对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠血脂、葡萄糖耐量及肝脏病理形态的影响。方法 2021年9月—2022年3月于贵州医科大学实验室进行实验。将雄性C57小鼠40只按随机数字表法分为正常饮食组(ND组)、正常饮食+琥珀酸处理组(ND+Suc组)、高脂饮食组(HFD组)、高脂饮食组+琥珀酸处理组(HFD+Suc组),每组10只,ND组给予正常饮食,ND+Suc组在ND组基础上加用2.5%琥珀酸喂养,HFD组采用高脂饲料喂养建立NAFLD模型,HFD+Suc组另加用2.5%琥珀酸喂养,每周监测小鼠体质量,喂养15周后检测葡萄糖耐量,血清三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平,肝组织苏木素—伊红(HE)染色、油红O染色,观察肝脏脂质沉积及肝细胞病理形态变化。结果 实验15周后,与ND组比较,HFD组体质量、OGTT试验各时间点(0、15、30、60、120min)血糖、血清TG和TC水平均升高(P<0.01);与HFD组比较,HFD+Suc组体质量、OGTT试验各时间点(0、15、30、60、120min)血糖、血清TG和TC水平均降低(P<0.0...     

溶酶体相关膜蛋白3过表达促进肝细胞脂质沉积

目的 探讨溶酶体相关膜蛋白3(lysosome associated membrane protein 3,LAMP3)对肝细胞脂质代谢的作用.方法 以肝癌细胞系Huh7为研究对象,利用qRT-PCR及Western blot法检测游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)0.4 mmol/L处理后肝细胞LAMP3表达变化;过表达LAMP3后,分别使用油红染色及甘油三酯检测试剂盒检测肝细胞内脂滴及甘油三酯沉积情况;采用ATP及β-羟基丁酸检测试剂盒检测细胞内ATP及β-羟基丁酸含量变化;过表达LAMP3,使用qRT-PCR、Western blot法检测脂质合成相关基因PPARγ与SCD-1及脂质分解相关基因CPT1A与PGC-1 α表达变化.结果 FFAs处理后肝细胞Huh7中LAMP3表达显著上调(P＜0.05);过表达LAMP3可显著促进肝细胞内脂滴和甘油三酯的沉积(P＜0.05);过表达LAMP3对肝细胞内ATP及β-羟基丁酸含量的影响差异无统计学意义(P＞0.05);过表达LAMP3可促进PPARγ及SCD-1表达(P＜0.05),但对CPT1A、PGC-1α表达的影响差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LAMP3可通过调控脂肪合成促进肝细胞内脂质沉积.     

不同造模方式诱导的糖尿病小鼠肝肾组织中脂质异位沉积情况的研究

目的：观察比较高脂饮食（high-fat diet, HFD）、链脲佐菌素（streptozocin, STZ）联合HFD(HFD/STZ)、单侧肾脏切除术（unilateral nephrectomy, UNx）+HFD/STZ和db/db小鼠4种糖尿病模型小鼠肝肾组织中脂质异位沉积情况。方法：选取8周龄C57BL/6小鼠,随机分为正常饮食（normal chow diet, NCD）组（n=10）、HFD组（n=10）、HFD/STZ组（n=10）和UNx+HFD/STZ组（n=12）。NCD组给予NCD饲养;HFD组、HFD/STZ组和UNx+HFD/STZ组给予HFD饲养,诱导小鼠出现肥胖和胰岛素抵抗,且HFD/STZ组和UNx+HFD/STZ组给予55 mg/kg STZ腹腔注射,后以HFD饲养至40周龄。选取10周龄db/db小鼠和野生型小鼠各8只,NCD饲养至40周龄。记录分析小鼠血糖和体重变化;收集血液样本测定甘油三酯（triglyceride, TG）含量;肝肾组织样本石蜡包埋后进行苏木精-伊红染色观察组织病理变化;免疫荧光染色和Western blot检测脂滴包被蛋...     

胰岛β细胞Metrnl基因敲除小鼠的鉴定及初步表型分析

目的：基于Cre-LoxP重组酶系统，构建胰岛β细胞Metrnl基因敲除小鼠(Metrnl-KO)，为进一步探究Metrnl基因在糖尿病疾病中的发病机制提供动物模型。方法：将雌雄基因型均为Metrnl^floxp/+的小鼠合笼杂交，筛选出基因型为Metrnl^floxp/floxp的小鼠，将该基因型小鼠与胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶(Ins-2)工具鼠进行杂交繁育，获得基因型为Metrnl^floxp/+;Cre+的小鼠；再将Metrnl^{floxp/+；Cre+}小鼠与Metrnl^floxp/floxp小鼠杂交获得Metrnl^{floxp/floxp;Cre+}小鼠，基因型为Metrnl^{floxp/floxp;Cre+}的小鼠即为目的鼠。采用RT-q PCR检测Metrnl和胰岛素(Ins-1和Ins-2)的m RNA水平；免疫组化和免疫荧光染色观察胰岛组织Metrnl和胰岛素的蛋白表达情况；记录小鼠体重，同时测定小鼠糖耐量和胰岛素耐量。结果：...