基于p38 MAPK信号通路探讨苍膝通痹胶囊对KOA大鼠关节软骨的保护作用

目的:观察苍膝通痹胶囊治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:将60只4周龄SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为空白组,模型组,二甲基亚砜(DMSO)组,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组,每组10只。除正常组外,其余各组采用改良Hulth法建立KOA模型,造模成功后,苍膝通痹胶囊组每日给予0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊溶液灌胃,SB203580组每日给予0.015 g·kg~(-1)的SB203580溶液灌胃,苍膝通痹胶囊联合SB203580组组每日给予含0.015 g·kg~(-1)SB203580及0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊的混合溶液灌胃,DMSO组给予1%DMSO溶液灌胃,模型组和空白组给予生理盐水灌胃,用药干预4周后处死、取材。苏木素-伊红(HE)染色观察软骨组织形态学改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血上清液中白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-tine PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨组织中p38 MAPK信号通路中相关因子p38,p-p38,基质金属蛋白酶-13(MMP-13),Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)mRNA及蛋白的表达水平,免疫组化法检测p-p38的定位表达。结果:与正常组比较,模型组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著上调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著下调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著上调(P0.01);与模型组比较,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著下调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著上调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著下调(P0.01)。结论:苍膝通痹胶囊可有效保护KOA大鼠软骨组织,其机制可能与靶向阻断p38 MAPK信号通路有关。     

苍膝通痹胶囊治疗膝骨性关节炎的临床疗效观察

目的探讨苍膝通痹胶囊治疗膝骨性关节炎的疗效。方法选取山东中医药大学附属医院2017.9-2018.5收治的膝骨性关节炎患者60例,分成实验组与对照组两组。实验组给予苍膝通痹胶囊规范治疗,对照组给予抗骨增生胶囊规范治疗。采用膝关节AKS评分进行疗效评价。结果治疗组AKS评分高于对照组,且差异有统计学意义(P0.05)。结论苍膝通痹胶囊治疗膝骨性关节炎临床疗效确切。     

LncRNA MALAT1通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭北大核心

目的:观察LncRNA MALAT1对Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:干扰LncRNA MALAT1在Saos-2细胞中的表达水平,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞凋亡及周期情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭改变,透射电镜观察自噬小体,Western Blot、RT-PCR检测自噬相关因子Beclin1、LC3、p62表达差异及LncRNA MALAT1对Wnt/β-catenin通路的影响。结果:干扰LncRNA MALAT1后,Saos-2细胞自噬水平明显升高,Beclin1、LC3表达水平明显升高(P<0.05),而p62的表达水平显著下降(P<0.05);细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05),Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt3a、β-catenin的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1可以通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移和侵袭。     

基于肝脂调控为核心的中药调血脂活性和评价方法研究

目的 构建适宜于评价中药以“肝脂调控”为核心的调血脂活性和评价的“多细胞来源”“稳定性好”的非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）体外细胞模型,以利于精准发现中药脂代谢调控活性物质并评价其调血脂药理学作用特征。方法 选择人肝癌HepG2细胞系及小鼠肝实质AML12细胞系,对造模试剂（油酸及棕榈酸）、造模方法、作用浓度以及作用时间和溶媒选择进行文献和实验研究,并以CCK-8及油红O实验确定最佳造模浓度,进而循形人体肝脂代谢轮廓,采用Western blotting法检测细胞中脂代谢相关蛋白的表达情况,作为模型评价标准。结果 经文献和实验研究发现,10%无脂肪酸牛血清白蛋白（fatty acid free bovine serum albumin,BSA）为油酸溶媒,20% BSA为棕榈酸溶媒稳定性好;500 μmol/L油酸及500 μmol/L油酸＋棕榈酸（体积比2∶1）造模,作用24 h,可显著增加细胞内脂质积累（P＜0.001）,且不影响细胞活性,证明造模成功;单独使用棕榈酸造模,对2种细胞损伤都较大,模型不适宜于调血脂物质发现与评价;500 μmol/L油酸及500 μmol/L油酸＋棕榈酸造模后,脂肪从头合成相关蛋白固醇调节元件结合蛋白-1（sterol regulatory element-binding protein-1,SREBP-1）、乙酰辅酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylase,ACC）及脂肪酸合酶（fatty acid synthase,FASN）的表达无显著变化,脂肪分解相关蛋白三酰甘油脂肪酶（adipose triglyceride lipase,ATGL）的表达显著升高（P＜0.05、0.001）,激素敏感脂肪酶（hormone sensitive lipase,HSL）的磷酸化显著降低（P＜0.05、0.01）,脂肪酸氧化相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα）的表达无显著差异,肉碱棕榈酰转移酶1A（carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A）的表达显著增加（P＜0.05）。结论 500 μmol/L油酸及500 μmol/L油酸＋棕榈酸（体积比2∶1）造模24 h,均可显著增加HepG2、AML12细胞中的脂质积累,成功构建NAFLD体外细胞模型,且具有稳定、经济、高效的特点。     

p38 MAPK信号通路在膝关节骨性关节炎中医药诊疗中的作用

骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)是以关节软骨进行性退变、滑膜炎症和疼痛为主要特征的关节类疾病。其发病机制目前尚未完全明确,一般认为是年龄、性别、肥胖、创伤、炎症、遗传易感性等力学及生物学因素共同作用导致软骨细胞、细胞外基质以及软骨下骨3者降解和合成偶联失衡的结果。近年来,信号通路在KOA软骨细胞增殖、凋亡的研究中成为了热点,且信号通路在KOA发病机制和靶向治疗的研究也逐渐起步,通常会涉及KOA软骨细胞中细胞因子、相关基因和蛋白的表达等。这些关于信号通路与KOA的研究主要集中在软骨细胞的增殖和凋亡、细胞外基质的合成和降解以及软骨下骨的硬化等方面,其中研究比较多的是p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路。文献研究表明,p38 MAPK信号通路可调控软骨细胞增殖、凋亡,维持细胞外基质代谢平衡,调节基质金属蛋白酶、促炎症因子的产生,参与胶原蛋白和蛋白多糖降解,在KOA病理进程中起重要的调控作用。而以整体观念和辨证施治理论为指导的中医药疗法治疗该病针对性强,疗效显著,可以从根本上控制病情的发展,为治本之道。本文从p38 MAPK与KOA发病机制的关系入手,对p38 MAPK信号通路在KOA中医药诊疗中的研究进展作一综述,为KOA的临床诊疗提供新的分子靶点。     

独活-牛膝药对治疗膝骨关节炎的网络药理学机制及实验验证

【目的】应用网络药理学及分子对接技术探讨独活-牛膝药对治疗膝骨关节炎（KOA）的作用机制，并通过体外实验进行验证。【方法】检索TCMSP、中国药典、BATMAN-TCM数据库获取独活、牛膝的活性成分，筛选去重后应用TCMSP数据库确定作用靶点，运用GeneCards和OMIM数据库筛选KOA相关的靶点。采用Cytoscape构建药物活性成分-KOA-靶点网络模型并进行分析；运用STRING数据库构建蛋白质相互作用（PPI）网络，通过R 4.0.2软件对交集靶点进行基因本体论（GO）分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集；运用AutoDockTools对前5位的核心靶点进行分子对接。进而通过体外细胞实验验证有效成分槲皮素对核心靶点的调控作用。【结果】通过筛选得到14个有效活性成分、171个活性成分靶点、2 040个KOA靶点和99个交集靶点。GO分析结果显示独活-牛膝药对治疗KOA关键靶点的生物功能主要涉及炎症反应、细胞代谢、调节蛋白激酶及磷酸酶活性等。KEGG通路主要富集到肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、白细胞介素17(IL-17)信号通路、癌症通路等。分子对接结果显示独活...