野生型PTEN 过表达对体外活化肝星状细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨野生型第10 号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）过表达对体外活化肝星状细胞（HSC）内钙离子浓度的影响。方法 体外培养活化大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）,利用腺病毒载体,将野生型PTEN 基因转染活化HSC ;Western blot 及实时荧光定量聚合酶链反应（qrt-PCR）检测HSC 的PTEN 蛋白及mRNA 表达;采用钙离子荧光探针Rhod-2/AM,于激光扫描共聚焦显微镜下检测HSC 内钙离子浓度变化。实验分组：① Control 组：腺病毒转染时以DMEM 代替病毒液;② Ad-GFP 组：转染表达绿色荧光蛋白（GFP）的对照空病毒Ad-GFP ;③ Ad-PTEN 组：转染携带野生型PTEN 基因并表达GFP 的重组腺病毒Ad-PTEN。结果 野生型PTEN 在活化大鼠HSC 大量表达,3 组HSC 内钙离子浓度比较,差异有统计学意义（P <0.05）,Ad-PTEN 组HSC 内钙离子浓度（251.60±90.88）低于Control 组（1 953.95±132.99）及Ad-GFP 组（1 937.57±115.17）,而Control 组与Ad-GFP 组之间HSC 内钙离子浓度比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 野生型PTEN 过表达可降低体外活化大鼠HSC 内钙离子浓度。     

ChemDraw软件在医用化学教学中的应用

医学专业学生在进入学校的第一年都要系统地学习基础化学、有机化学课程,这些课程最大的特点就是知识的抽象性和概括性。一年级的新生在面对这些课程时,总是表现得很茫然,感觉无从下手,例如：基础化学中的原子结构、电子云的图形、共价键的形成;有机化学中有机分子的空间几何结构等。如何将这些复杂、立体、抽象的图形生动地展示给学生,并给学生留下深刻、具体的印象,对教师来说也是困难重重。在黑板匕画,既耗费时间又不美观;使用多媒体,现有的一些软件（Word、PowerPoint等）在绘制这些复杂图形时也表现得有些力不从心。ChemDraw是一款在化学类专业中使用比较广泛的专业性应用软件,它能够轻松地绘制出化学类专业中复杂的分子内部结构图,能对教师在医用化学的教学中提供很大帮助。     

蓝色超小赖氨酸-京尼平纳米粒制备及肿瘤细胞染色

目的 利用京尼平交联制备蓝色超小纳米粒,用于肿瘤细胞染色。方法 将赖氨酸（lysine,Lys）等伯氨基化合物分别置于反相微乳液中和京尼平反应,观察颜色变化,测定产物OD_{585 nm}、粒径大小和分布,筛选伯氨基化合物。考察其浓度、摩尔比及预交联时间对粒径大小和分布的影响,确定最佳制备条件。制备所得纳米粒进行透射电子显微镜观察和表征,考察其在不同pH值和温度下的颜色稳定性、染色胶质瘤细胞U87的能力和对CHO细胞毒性。结果 Lys交联产物颜色最深、粒径最小且分布最窄。Lys浓度和预交联时间对粒径的影响较大,在Lys为30 mg·mL^-1、–NH₂与京尼平摩尔比为1.5∶1和预交联时间2 min下,得到粒径为3.8~6.8 nm的超小球形纳米粒Lys-g NPs。Lys-g NPs溶液在不同pH值和温度下呈蓝色,颜色稳定,能有效染色肿瘤细胞,使细胞团（10⁵）和单个细胞呈肉眼可见的蓝色,没有明显的细胞毒性（≤2.5 mg·mL^-1）。结论 Lys-g NPs是一种蓝色稳定的超小纳米粒,能有效染色肿瘤细胞,具有体内肿瘤染色显像裸眼可视的潜能。     

腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞微丝结合蛋白vinculin、filamin A及cortactin的影响

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）表达对活化肝星状细胞（HSC）的纽蛋白（vinculin）、细丝蛋白A（filamin A）及皮层肌动蛋白（cortactin）的影响。方法:体外培养活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹R...     

腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的影响

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)基因表达对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)纤丝状肌动蛋白(F-actin)的影响。方法:体外培养大鼠活化HSC(HSCT6),将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA(shRNA)]并表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒AdshRNA/PTEN及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP转染HSC,实时荧光定量PCR及Western blotting实验检测HSC的PTEN mRNA及蛋白表达;利用激光扫描共聚焦显微镜检测HSC的形态、F-actin的分布及荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内Ca~(2+)浓度的变化。实验分为对照(control)组(在腺病毒转染步骤以DMEM代替腺病毒液)、Ad-GFP组(转染表达GFP的空病毒Ad-GFP)和Ad-shRNA/PTEN组(转染重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN)。结果:靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,显著下调HSC的PTEN mRNA及蛋白表达(P0.05);PTEN表达下调使活化HSC呈星形向四周伸展,F-actin排列紧密规则,数量增多,伪足充分向外伸展,应力纤维丝增长增粗;Ad-shRNA/PTEN组F-actin的荧光强度较control组及Ad-GFP组显著增强(P0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性;Ad-shRNA/PTEN组HSC内Ca~(2+)浓度较control组及Ad-GFP组明显升高(P0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性。结论:PTEN表达下调使体外活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的形成及细胞骨架的重构增强,并增加了HSC内的Ca~2浓度。