抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义

目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB／c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体（mAb）,用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵（SAS）纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb：7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。     

葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响

 目的 探讨葡萄糖和胰岛素浓度的变化对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β₁的影响。 方法 体外常规培养Colon26肿瘤细胞,根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞分为12组,培养48小时后收集上清液,ELISA法检测TGF-β₁的浓度。 结果 (1)D组上清液TGF-β1的浓度明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而B、C组上清液TGF-β1的浓度与A组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。（2）E、F、G组上清液TGF-β₁的浓度与A组相比,对Colon26肿瘤细胞上清液TGF-β₁的分泌差异无统计学意义(P>0.05)。（3）L、M、N组上清液TGF-β₁的浓度均明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01); 而H、K组上清液TGF-β₁的浓度与A组相比差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 （1）高浓度的葡萄糖能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清TGF-β₁的分泌。（2）不同浓度的胰岛素不影响Colon26肿瘤细胞TGF-β₁的分泌。     

PBL教学模式在医学在职研究生免疫学教学中的应用

以问题为基础的学习(Problem-Based Learning,PBL)是一种以学生为中心的教学模式,已被应用到医学各学科的教学中。在医学在职研究生免疫学教学中实施PBL教学,提高了学生学习的主动性,促进了免疫学基本理论与具体工作的结合,增进了师生间的互动与交流,为医学在职研究生教学提供了新思路。     

syk真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MHC-I类分子表达的影响

目的：构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体，转染人乳腺癌细胞，使其在细胞中稳定表达，以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC—Ⅰ类分子表达的影响。方法：以RT-PCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出叼击编码序列基因片段，将其克隆到真核表达载体pcDNA3-1D／V5-His—TOPO中。对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后，以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA-MB-231，经G418筛选，构建syk基因稳定表达的细胞株，通过Westernblot、RT-PCR和流式细胞术检测转染乳腺癌细胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAMⅠ的表达。结果：构建了hsyk真核表达载体pcDNA3-1D／V5-His-TOPO／hsyk，并在人乳腺癌细胞MDA—MB-231中获得稳定表达。表达Syk的MDA—MB-231细胞同时可以高表达MHC-Ⅰ和ICAMⅠ。结论：成功地构建了syk真核表达载体并在真核细胞中表达，为进一步的肿瘤免疫研究奠定了实验基础。     

葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响

目的 探讨葡萄糖和胰岛素浓度的变化对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响.方法 体外常规培养Colon26肿瘤细胞,根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞分为12组,培养48小时后收集上清液,ELISA法检测TGF-β1的浓度.结果 (1)D组上清液TGF-β1的浓度明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而B、C组上清液TGF-β1的浓度与A组相比差异均无统计学意义(P>0.05).(2)E、F、G组上清液TGF-β1的浓度与A组相比,对Colon26肿瘤细胞上清液TGF-β1的分泌差异无统计学意义(P>0.05).(3)L、M、N组上清液TGF-β1的浓度均明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而H、K组上清液TGF-β1,的浓度与A组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 (1)高浓度的葡萄糖能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清TGF-β1的分泌.(2)不同浓度的胰岛素不影响Colon26肿瘤细胞TGF-β1的分泌.     

葡萄糖和胰岛素对Colon 26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA表达的影响

目的本试验模拟糖尿病病程不同阶段患者体内葡萄糖和胰岛素浓度的变化,研究不同浓度的葡萄糖和胰岛素对Colon 26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA表达的影响。方法体外常规培养Colon 26肿瘤细胞。根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞共分12组：A组（对照组）RPMI 1640培养液;B组加5 mmol/L葡萄糖;C组加10 mmol/L葡萄糖;D组加25 mmol/L葡萄糖;E组加5μIU/ml胰岛素;F组加25μIU/ml胰岛素;G组加125μIU/ml胰岛素;H组加5 mmol/L葡萄糖＋5μIU/ml胰岛素;K组加5 mmol/L葡萄糖＋125μIU/ml胰岛素;L组加25 mmol/L葡萄糖＋125μIU/ml胰岛素;M组加25 mmol/L葡萄糖＋5μIU/ml胰岛素;N组加25 mmol/L葡萄糖＋1.25μIU/ml胰岛素。每组设3个复孔,置37℃5%CO2饱和湿度的培养箱培养48 h,收集细胞后抽提总RNA,RT-PCR同时扩增目的片段TGF-β1和内参照β-actin,琼脂糖凝胶电泳,扩增产物在凝胶成像系统上扫描分析,计算TGF-β1 mRNA相对表达量。整个实验过程均重复3次。结果D组TGF-β1 mRNA的表达（0.768±0.017）高于A组（0.540±0.012）,差异有显著性（P〈0.01）;而B、C组TGF-β1 mRNA的表达（0.545±0.033、0.558±0.035）与A组相比均无显著性差别（P〉0.05）。E、F、G组对Colon 26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA的表达（分别为0.566±0.039、0.549±0.030、0.531±0.022）与A组相比无显著性差别（P〉0.05）。L、M、N组的TGF-β1 mRNA表达（分别为0.889±0.028、0.764±0.027、0.752±0.035）均高于A组（0.540±0.012）,差异有显著性（P〈0.01）;而H、K组的TGF-β1 mRNA表达（0.550±0.037、0.537±0.025）与A组相比均无显著性差别（P〉0.05）。结论高浓度的葡萄糖能够上调Colon 26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA的表达,不同浓度的胰岛素不影响Colon 26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA的表达,高浓度的葡萄糖和胰岛素同时作用能够上调Colon 26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA的表达     

脾源性酪氨酸激酶抗肿瘤侵袭迁移的作用机制

目的：研究脾源性酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）抗人乳腺癌肿瘤细胞的侵袭迁移能力,并对其作用机制进行初步探讨。方法：将全长SykcDNA经脂质体介导转染Syk表达阴性的高侵袭性人乳腺癌细胞MDA-MB-231,Transwell小室法检测转染前后肿瘤细胞侵袭迁移能力的变化,流式细胞术及酶联免疫吸附测定法检测与侵袭转移相关的血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9的表达情况。结果：转染Syk全长基因的MDA-MB-231细胞与转染空载体及未转染的MDA-MB-231细胞相比,侵袭及迁移实验中的穿膜细胞数（总迁移细胞数/5个高倍视野）均明显减少（P〈0.05）;血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶-9的表达量亦明显减少（P〈0.05）。结论：转染SykcDNA可通过降低转染肿瘤细胞血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶-9的表达,参与其抗肿瘤侵袭迁移作用。     

外泌体在肝癌耐药中的研究进展

肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是原发性肝癌（primary liver cancer,PLC）的主要类型,由于患者初期常无明显自觉症状,易被人们忽视,大部分肝癌患者被确诊时已经到了疾病的中晚期,失去了根治性手术的机会。随着分子靶向药物和免疫疗法的出现,中晚期肝癌患者的治疗有了新的治疗方案。但也伴随了耐药现象的产生,主要表现为治疗过程中肿瘤持续增长,药物减量或停药后肿瘤的远处转移。目前上述耐药现象的具体机制仍未完全阐明。外泌体是近年来受到关注的一类小分子囊泡,研究数据表明,外泌体作为信息传递的重要媒介,与肿瘤的发生发展及耐药性密切相关,并且因外泌体组织相容性好、半衰期长、不易被酶降解等优点,可作为药物递送载体被应用于癌症的治疗。本文就外泌体在肝癌耐药发生及治疗中的作用展开综述。     

葡萄糖、胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌VEGF的影响

目的：观察不同浓度的葡萄糖和胰岛素对结直肠癌细胞株Colon26肿瘤细胞分泌VEGF的影响．方法：体外培养Colon26肿瘤细胞,根据培养液中加入的葡萄糖和胰岛素终浓度的不同,将实验所用细胞分成12组．每组设3个复孔,培养48h,收集细胞培养上清,ELISA法检测VEGF的浓度．结果：B,C,D组（培养液分别加5,10,25mmol／L的葡萄糖）的VEGF浓度与A组（培养液未加葡萄糖和胰岛素,为对照组）的VEGF浓度相比无显著性差异（P〉0．05）．G组（培养液加125mU／L的胰岛素）的VEGF浓度明显高于A,E,F组（培养液分别加0,5,25mU／L的胰岛素）的VEGF浓度,差异有显著性（P〈0．01）,而A组、E组与F组之间无显著性差异（P〉0．05）．K、L组（培养液分别加5,25mmol／L的葡萄糖和125,125mU／L胰岛素）的VEGF浓度均明显高于A组的VEGF浓度,差异有显著性（P〈0．01）,而K、L组组间无差异．H,M,N组（培养液分别加5,5,1．25mU／L的胰岛素和5,25,25mmol／L的葡萄糖）的VEGF浓度与A组相比无显著性差异（P〉0．05）．结论：葡萄糖的浓度对Colon26肿瘤细胞分泌VEGF无明显影响．高浓度的胰岛素可增加Colon26肿瘤细胞VEGF分泌．     

syk真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响

目的:构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在细胞中稳定表达,以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响.方法:以RTPCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO中.对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后,以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,经G418筛选,构建syk基因稳定表达的细胞株,通过Western blot、RT-PCR和流式细胞术检测转染乳腺癌细胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAM-Ⅰ的表达.结果:构建了hsyk真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,并在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得稳定表达.表达Syk的MDA-MB-231细胞同时可以高表达MHC-Ⅰ和ICAM-Ⅰ.结论:成功地构建了syk真核表达载体并在真核细胞中表达,为进一步的肿瘤免疫研究奠定了实验基础.