重症监护室耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制和同源性分析

目的探讨安徽医科大学第一附属医院4个重症监护室(ICU)中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制和流行状况,为医院感染控制提供依据。方法收集4个ICU病房中CRKP菌株39株,采用纸片扩散法和Vitek 2 Compact仪器法测定临床常见抗菌药物的敏感性,用Carba NP试验对碳青霉烯酶进行筛选,同时对超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)、碳青霉烯酶基因进行PCR扩增和序列分析,用基质辅助激光解吸电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)技术及多位点序列分型(MLST)进行同源性分析。结果 PCR检测基因型显示36株CRKP以产KPC-2型酶为主,部分菌株同时拥有ESBL和AmpC耐药基因。MALDI-TOF MS将39株CRKP分为3大簇,MLST结果显示35株菌均为ST11型,ST379、ST751、ST307、ST490各有1株,经eBURST在线软件分析ST11与ST379、ST751的亲缘关系较近,来源于同一克隆株。结论 4个ICU病房中CRKP以产KPC-2型酶为主,是CRKP对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制。37株CRKP高度同源,提示不同ICU病房间应进一步加强感染控制。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速检测产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的研究

随机收集54株产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和24株对头孢菌素类抗生素敏感的肺炎克雷伯菌,通过PCR筛选ESBLs基因型,细菌与含有一定浓度的抗生素共同孵育一定时间后,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF MS)检测抗生素水解产物的特征峰.头孢噻肟与头孢曲松水解试验分别在反应1h与2h后,能够很好地鉴别产ESBLs的肺炎克雷伯菌;与ESBLs基因型检测相比,特异性为100％,敏感性为96.3％.MALDI-TOF MS在临床上能够快速准确鉴定病原菌,并且在细菌耐药性检测方面具有巨大潜力,MALDI-TOF MS酶解法能够快速检测产ESBLs肺炎克雷伯菌.     

亚抑菌浓度抗生素对高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因表达的影响

目的探究在亚抑菌浓度抗生素作用下,高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因表达水平的变化。方法采用纸片扩散法、Vitek-2 compact法测定菌株对临床常见抗菌药物的敏感性,并用微量肉汤稀释法检测菌株对头孢西丁和阿米卡星的MIC值。聚合酶链式反应(PCR)对荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)及毒力相关基因(rmpA、aerobactin、kfu、alls、magA、wcaG、fimH、mrkD)进行检测。根据菌株对两种药物的MIC值,配制1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC亚抑菌浓度抗生素梯度。运用qRT-PCR检测1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC浓度头孢西丁、阿米卡星对菌株处理后毒力基因相对表达量的改变,SPSS软件16.0版本对其差异进行比较分析,通过基质辅助激光解吸电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)及ERIC-PCR检测菌株之间的同源性。结果共收集57株高毒力肺炎克雷伯菌,对大多数临床常用抗生素保持敏感,PCR结果显示K1型有17株,K2型21株,K20型2株,K57型8株,有9株未检出血清型。rmpA、aerobactin基因检测全部阳性,wcaG、...     

迟缓埃格特菌的MALDI-TOF MS和16S rRNA鉴定及生物学特征研究

目的 鉴定两株迟缓埃格特菌临床分离株.方法 选取两株厌氧血培养瓶培养出的分离菌株,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和革兰染色鉴定分离株,药敏实验采用琼脂稀释法.同时提取菌株基因组DNA,选用16S rRNA通用引物进行PCR扩增,回收和纯化产物后进行测序,与GeneBank数据库中已知菌...     

铜绿假单胞菌QS系统调控基因和毒力基因的携带、表达及与耐药的相关性

目的 探究临床分离铜绿假单胞菌常见群体感应(QS)系统调控基因和毒力基因的携带和表达情况及与耐药的相关性。方法 收集检验科各类临床标本中分离出的铜绿假单胞菌97株,应用vitek2-compact仪器法及标准纸片扩散法检测抗菌药物的耐药性,运用聚合酶链式反应(PCR)方法检测4种QS系统调控基因及7种毒力基因的携带情况,对结果做统计学分析;荧光定量PCR(qRT-PCR)检测调控基因LasI、Rh1R和毒力基因exoS、PCN的表达情况,对两类基因的相对表达量进行线性分析。结果 97株分离株对11种抗菌药物的耐药率：妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星的耐药率小于10%且阿米卡星最低为2.06%,对其余药物耐药率均在11%以上,最高的为亚胺培南25.77%,43株为多重耐药菌株,且呼吸系统来源的菌株对抗菌药物耐药性更高。PCR基因检测结果显示：4种QS系统调控基因LasI、LasR、Rh1I、Rh1R检出率均为100%;7种毒力基因检出率最高的为exoT 98.97%(96/97),最低的为exoU 13.40%(13/97),PCN 43.30%(42/97),其余毒力基因检出率皆在86%以...