一株胃癌耐药细胞系的建立及其耐药的可能机制

本采用大剂量阿霉素诱导出一株对阿霉素耐药的胃癌细胞系SGC7901／Adr。SGC7901／Adr对长春新碱、丝裂霉素C有交叉耐药性，其中对长春新碱耐药性最高，但对5-Fu依然存在敏感性，应用流式细胞术检测细胞阿霉索荧光强度，发现SCG7901／Adr细胞内阿霉索浓度明显低于SGC7901，提示细胞内药物蓄积减少是导致SGC7901／Adr产生多药耐药性的主要原因。     

b-arrestin 1对CD4^＋ T细胞存活和自身免疫的调控

在获得性免疫中，CD4^＋T细胞发挥着重要作用，其调控的失常会导致自身免疫性疾病的发生。机体对外周活化的CD4^＋T细胞的调控是十分严格的，其产生和消亡间保持着微妙的平衡。在哺乳动物中，CD4^＋T细胞的死亡主要由两条不同的通路介导：一条是细胞表面受体，如TNF、TRAIL受体和Fas；另一条是Bcl-2蛋白家族介导的通过调控线粒体的途径。     

胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型ScFv的制备

目的 制备胃癌单抗MGd1的单链可变区片段（single chain variable fragment,ScFv),为胃癌体内诊疗研究提供候选靶向载体分子。方法 从MGd1杂交瘤分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VLDNA）,二者经linkerDNA连接形成ScFvDNA,将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv,以高表达MGd1结合抗原的细胞株KATOⅢ对重组噬菌体抗体ScFv进行峡谷轮筛选后;随机挑取克隆经ELISA筛选MGd1ScFv单克隆,并对其结合抗原的能力进行鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp,经两轮亲和筛选后,在随机筛检的30个克隆中得到12个噬菌体呈现型MGd1ScFv单克隆,其中结合抗原能力强的克隆有5个。结论 用噬菌体呈现技术成功地获得了单抗MGd1的ScFv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。     

CA-50 IRMA在病毒性肝炎中的临床应用

CA-50是一种以唾液酸糖酯和唾液酸糖蛋白为主要成份的糖类抗原，在肝癌、卵巢癌、结肠直肠癌和肺癌中有较高的阳性捡出率，是诊断肿瘤的一项血清学标志。我们对170例各临床型病毒性肝炎进行了检测，结果123例(72.0％)的：CA-50值超过正常，同时发现其阳性结果与血中检出AFP有良好的伴随关系。在同一病倒的病程观察中，发现CA-50的消长与AFP相似。现报道如下。     

RNF43通过β-catenin抑制黑色素瘤细胞PD-L1表达并促进CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应

目的探讨环指蛋白43(RNF43)对黑色素瘤中CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的调节作用。方法利用慢病毒感染技术对小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA进行RNF43基因过表达与敲低;通过小鼠皮下成瘤实验检测Lv-Ctrl-OE组、Lv-RNF43-OE组、Lv-Ctrl-KD组和Lv-RNF43-KD组小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA体内增殖情况,通过流式细胞术检测黑色素瘤肿瘤免疫微环境中CD8^(+)T细胞穿孔素和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平;采用实时荧光定量PCR实验检测细胞中β-catenin和程序性死亡受体配体1(PD-L1)mRNA的表达水平;通过双荧光素酶报告基因实验检测RNF43对PD-L1的转录调控作用。结果本研究成功构建RNF43稳定过表达与敲低的小鼠黑色素瘤细胞株Lv-RNF43-OE和Lv-RNF43-KD。小鼠皮下成瘤实验结果显示,Lv-RNF43-OE组瘤体质量为(0.08±0.06)g,明显小于Lv-Ctrl-OE组的(1.04±0.52)g,差异有统计学意义(t=3.71,P=0.032);Lv-RNF43-KD组瘤体质量为(1.94±0.29)g,与Lv-Ctrl-KD组的(1.15±0.74)g相比差异无统计学意义(t=-1.70,P=0.164)。流式细胞术结果显示,Lv-RNF43-OE组CD8^(+)T细胞穿孔素荧光强度为9034±2628,明显高于Lv-Ctrl-OE组的3847±1637,差异有统计学意义(t=-3.35,P=0.015);Lv-RNF43-KD组CD8^(+)T细胞穿孔素荧光强度为966±247,明显低于Lv-Ctrl-KD组的2226±646,差异有统计学意义(t=3.16,P=0.034);Lv-RNF43-OE组CD8^(+)T细胞IFN-γ荧光强度为2422±429,明显高于Lv-Ctrl-OE组的1688±324,差异有统计学意义(t=-2.73,P=0.034);Lv-RNF43-KD组CD8^(+)T细胞IFN-γ荧光强度为614(454,863),与Lv-Ctrl-KD组的1159(1152,2068)相比差异有统计学意义(Z=-1.96,P=0.050)。实时荧光定量PCR实验结果显示,Lv-RNF43-OE组β-catenin mRNA相对表达量为0.67±0.16,明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.11,差异有统计学意义(t=2.98,P=0.041);Lv-RNF43-OE组PD-L1 mRNA相对表达量为0.32±0.09,明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.09,差异有统计学意义(t=9.13,P=0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,pCMV6-NC组、RNF43组、RNF43^(+)β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性分别为1.00±0.00、0.84±0.00、1.49±0.00和1.57±0.03(F=2218.33,P<0.001),进一步两两比较发现,与pCMV6-NC组相比,RNF43组PD-L1启动子荧光素酶活性明显降低(P<0.001),RNF43^(+)β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高(P<0.001;P=0.003);与RNF43组相比,RNF43^(+)β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高(P<0.001)。结论RNF43可能通过抑制β-catenin的表达降低黑色素瘤中PD-L1 mRNA的表达并促进CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。     

多药耐药性相关蛋白MRP在胃癌耐药细胞SGC7901中的表达

肿瘤多药耐药性的产生是导致临床上化疗失败的主要原因。本研究观测了胃癌阿霉素耐药细胞ＳＧＣ７９０１／Ａｄｒ中，多药耐药相关蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＲＰ）的表达，以了解其在胃癌细胞耐药中的作用。１材料和方法１．１药物与试剂阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤＲ）（ＦａｒｍｉｔａｌｉａｃａｒｌｏＥｒｂａ），ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ），ＱＣＲＬ１杂交瘤上清（加拿大Ｃｏｌｅ教授惠赠［１］）。１．２细胞培养人胃低分化腺癌细胞系ＳＧＣ７９０１（军事医…     

白细胞介素24对人树突状细胞活化和成熟的诱导作用

目的: 〖HT5"SS〗研究白细胞介素24（interleukin24,IL24）对人外周血单核细胞来源树突状细胞（dendritic cell, DC）表型及抗原提呈功能的影响。〖HT5W〗方法： 〖HT5"SS〗利用Western blot检测DC培养上清中IL24的分泌水平;利用半定量RTPCR方法分析不同条件下DC表达IL24受体及趋化因子受体的情况;通过流式细胞术分析检测IL24共培养后DC细胞表面CD80、CD86、MHCⅡ类分子的表达水平;采用体外混合淋巴细胞实验分析经IL24共培养对DC抗原提呈功能的影响。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗 体外培养过程中,用LPS刺激DC可诱导其分泌IL24;同时,LPS还能上调DC表达IL24受体亚单位IL22R1。IL24作用于DC可上调DC细胞表面CD80、CD86及MHCⅡ类分子的表达,并增强DC对T细胞的抗原提呈功能。〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗IL24这一新型的细胞因子在体外实验中能促进DC的表型成熟,增强DC的抗原提呈功能。     

一株胃癌耐药细胞系的建立及其耐药的可能机制

本文采用大剂量阿霉素诱导出一株对阿霉素耐药的胃癌细胞系 SGC7901/Adr。SGC7901/Adr 对长春新碱、丝裂霉素 C 交叉耐药性,其中对长春新碱耐药性最高,但对5-Fu 依然存在敏感性。应用流式细胞术检测细胞阿霉素荧光强度,发现 SCG7901/Adr 细胞内阿霉素浓度明显低于 SGC7901,提示细胞内药物蓄积减少是导致SGC7901/Adr 产生多药耐药性的主要原因。     

HSP90β蛋白低调对肿瘤细胞GST活性的影响

谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione -S-transferase,GST)是一组多基因家族蛋白,广泛分布于动物、植物和细菌中,可催化具有亲核位点的谷胱甘肽(GSH)与多种亲电子物质、致癌物质及一些亲脂性抗癌药物的结合。GST还可提高机体对致癌物的解毒作用,具有抗诱变、抗肿瘤作用,降低肿瘤的发生。近年来研究表明, GST也可增加癌细胞对化疗药物的代谢能力,产生耐药性。我们已成功地建立了HSP90 β低调细胞系[1],并表明该细胞系对化疗药物的敏感性提高[2]。本实验拟研究HSP90 β低调是否会影响GST的活性,以探讨HSP90β低调后肿瘤细胞对化…     

肿瘤诱导产生的CD11b^＋Gr1^＋髓样抑制细胞介导anti-VEGF治疗的抵抗

VEGF与机体生理和病理条件下的血管形成密切相关。在小鼠荷瘤模型和临床肿瘤患者治疗中发现,anti-VEGF单克隆抗体可显著抑制肿瘤的生长。但是在实验中也发现,不同的肿瘤对anti-VEGF治疗的敏感性有显著差别。小鼠黑素细胞瘤(B16F1)、淋巴瘤(TIB6)对anti-VEGF敏感,而小鼠lewis肺癌(LLC)和淋巴瘤(EL4)则不敏感。作者提出假设,机体骨髓来源的抑制性细胞可能介导了对anti-VEGF的抵抗。为阐明机体骨髓来源细胞的作用,作者构建了GFP嵌合体小鼠,将C57/Bl6来源的小鼠用致死剂量的60Co射线照射后,尾静脉注射GFP小鼠来源的骨髓单个核细…