四物汤对血管性痴呆大鼠的神经保护作用及其机制研究

目的 探讨四物汤对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠的保护作用及其机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组,模型组,四物汤高剂量（6 g/kg）、低剂量（3 g/kg）组,尼莫地平组（20 mg/kg）,每组12只。采用大脑中动脉阻塞再灌注法复制大鼠VD模型,术后连续给予相应药物14 d。采用水迷宫实验观察VD大鼠学习能力和记忆能力;酶联免疫吸附法测定海马组织中乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）、5- 羟色胺（5- hydroxy tryptamine,5- HT）、内皮素- 1（endothelin- 1,ET- 1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的含量。腹主动脉取血检测血液流变学指标。苏木精- 伊红染色观察海马CA1区神经细胞形态学变化。结果 与模型组比较,四物汤高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P<0.05）,在目标象限距离百分比显著增加（P<0.05）,海马AChE、ET- 1含量显著降低（P<0.05）,5- HT、VEGF含量显著升高（P<0.05）,全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数显著降低（P<0.05）。四物汤高、低剂量组比较,仅血浆黏度和红细胞聚集指数的差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较,四物汤组海马CA1区锥体细胞缺失减轻,神经纤维排列整齐,仅少数细胞核固缩。结论 四物汤对VD具有一定的改善作用,其机制与改善神经递质,调节海马ET- 1、VEGF含量,改善血流状态有关。     

新藤黄酸固体脂质纳米粒在大鼠体内药物代谢动力学研究

目的考察新藤黄酸固体脂质纳米粒(gambogenic acid-solid lipid nanoparticles,GNA-SLN)在大鼠体内的药物代谢动力学特征。方法对大鼠分别腹腔注射GNA和GNA-SLN,采用高效液相色谱法测定GNA在大鼠体内的血药浓度,DAS 2.1软件拟合计算药物代谢动力学参数。结果腹腔注射含等量GNA的GNA溶液和GNA-SLN后,GNA-SLN组的峰浓度是GNA溶液组的3.06倍,药时曲线下面积约为GNA溶液组的3倍,体内滞留时间约为GNA溶液组的2倍。GNA-SLN显著增加了GNA的体内吸收,且延长了GNA在体内的作用时间(P0.05,或P0.01)。结论 SLN包载可改变GNA的体内行为,提高其血药浓度,延长其体内循环时间,有望改善其治疗效果。     

霍山石斛的抗炎作用

目的:观察霍山石斛的抗炎作用。方法:60只昆明种小鼠,随机分为正常组、模型组、石斛高、中、低剂量组(4,2,1 g·kg~(-1)),醋酸地塞米松组(醋酸地塞米松,0. 01 g·kg~(-1));连续灌胃给药14 d;末次给药1 h后,于小鼠右耳的耳中部两侧滴二甲苯20μL建立耳肿胀模型。1 h后断头处死所有小鼠,计算各组小鼠耳肿胀率。健康SD大鼠36只,分别为正常组、模型组、霍山石斛高、中、低(2. 8,1. 4,0. 7 g·kg~(-1))剂量组、醋酸地塞米松组。连续灌胃给药7 d。末次灌胃给药1 h后,于各组大鼠的右后肢足趾皮下注射10%新鲜鸡蛋清建立足肿胀模型。分别于0,0. 5,1,2,3,4,5 h时,测量各大鼠的右后足周长,计算大鼠的足肿胀度。取SD大鼠60只,向双侧腹股沟皮下植入无菌干燥棉球,分组同上。第2天灌胃给药,连续14 d。末次给药后,取出棉球,计算肉芽肿抑制率;检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-6(IL-6),γ-干扰素(IFN-γ)含量。结果:与正常组比较,模型组耳肿胀率、足肿胀度显著升高(P 0. 01);与模型组比较,霍山石斛高、中、低剂量组均可明显降低小鼠耳肿胀率(P 0. 01);霍山石斛高、中剂量组足肿胀度明显降低(P0. 05,P 0. 01);给药各组棉球肉芽干重显著下降(P 0. 01),胸腺、脾脏指数没有显著性变化;与正常组比较,模型组大鼠血清中炎症因子含量显著升高(P 0. 01);与模型组比较,霍山石斛高、中、低剂量组和醋酸地塞米松组炎症因子含量显著降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:霍山石斛能够有效抑制急、慢性炎症反应。     

脑缺血再灌注大鼠海马区神经营养因子的表达及桃红四物汤的干预

目的 观察脑缺血再灌注后大鼠海马区不同时间神经营养因子表达的变化及桃红四物汤的干预作用。方法 采用大脑中动脉线栓法构建大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,将实验动物随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用TTC染色法检测脑梗死体积,酶联免疫吸附法测定大鼠海马区脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor, BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）、神经营养因子3（neurotrophin-3,NT-3）的表达水平。结果 与假手术组相比,模型组术后12 h、24 h、7 d、14 d脑梗死体积明显增大。与模型组相比,桃红四物汤组在术后7 d和14 d脑梗死体积显著减小,尼莫地平组术后12 h、24 h、7 d和14 d脑梗死体积显著减小。与假手术组相比,模型组术后12 h海马区BNDF表达水平显著提高,术后24 h海马区NGF表达水平显著提高,各时点NT-3表达水平的差异无统计学意义;与模型组比较,术后7 d和14 d,桃红四物汤组、尼莫地平组BDNF表达水平显著提高,术后24 h和7 d,尼莫地平组NGF表达水平显著提高,桃红四物汤组NGF和NT-3各个时间点的表达水平无明显差异。结论 大鼠脑缺血再灌注一定时间后海马区BDNF和NGF的表达水平增高,有利于受损的神经细胞恢复,桃红四物汤通过促进BDNF的表达而保护神经细胞。     

桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。 方法 采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）联合低糖培养基建立体外OGD致PC12细胞损伤模型;分别给予不同浓度的桃红四物汤含药血清,以MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学变化;检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;观察Hoechst33258染色后的细胞形态学变化;Western blot法检测给药后细胞Caspase-3蛋白的表达。 结果 与空白血清对照组相比,经OGD损伤后,细胞活力显著降低,桃红四物汤含药血清可减轻PC12细胞形态损伤,显著提高SOD活力,降低MDA和LDH含量,降低Caspase-3蛋白表达;Hoechst 33258染色结果表明桃红四物汤含药血清能降低OGD诱导的细胞凋亡。 结论 桃红四物汤含药血清对OGD诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制与提高SOD活力和降低MDA含量有关。     

桃红四物汤对早期闭合性骨折祛瘀生新作用的初步探讨

目的:研究桃红四物汤对闭合性骨折早期的治疗作用。方法:SD大鼠60只,分为6组,分别为正常组、模型组、桃红四物汤高、中、低剂量组(18,9,4.5 g·kg-1)、麝香接骨胶囊组(0.6 g·kg-1),借由专用的骨折器造成胫骨闭合性骨折,建立大鼠胫骨闭合性骨折模型,给药后观察对骨折大鼠血液黏度的影响,采用放射免疫法测定血浆中血栓素B2(TXB2),6-酮前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)的含量以及TXB2/6-Keto-PGF1α,采用酶联免疫法(ELISA)测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量,取骨组织病理切片观察骨痂微血管生成及骨折愈合情况。结果:与正常组比较,模型组明显骨折面缺损,大鼠血液黏度明显升高,血浆中TXB2水平,TXB2/6-Keto-PGF1α明显升高,均具有统计学差异(P0.01),VEGF浓度略微升高;与模型组比较,麝香接骨胶囊组、桃红四物汤高、中、低剂量组可明显的促进骨折区血管新生和骨折愈合,可明显降低骨折大鼠血液黏度,显著降低血浆中TXB2水平,TXB2/6-Keto-PGF1α,VEGF浓度明显增高,均具有统计学差异(P0.05,P0.01),尤其是桃红四物汤高剂量组与麝香接骨胶囊组效果一致(P0.01)。结论:桃红四物汤对胫骨闭合性骨折具有很好的祛瘀生新作用,其作用机制可能与桃红四物汤改善血液黏度、减低TXB2/6-Keto-PGE1α,促进VEGF的表达有关。     

大别山区仿野生栽培茯苓中茯苓多糖和茯苓酸含量研究

目的：建立高效、精准且稳定的茯苓多糖及茯苓酸的定量分析方法,并测定大别山区采集的仿野生栽培茯苓样品中茯苓多糖及茯苓酸的含量。方法采用苯酚—硫酸法测定仿野生栽培茯苓样品中茯苓多糖的含量。采用高效液相色谱法测定仿野生栽培茯苓样品中茯苓酸的含量。结果大别山区野生环境中采集的6个仿野生栽培茯苓样品中5号样品茯苓多糖的含量最高,达到4．186％;4号样品中的茯苓酸含量最高,达到0．818％。结论建立的茯苓多糖和茯苓酸的分析方法高效、精准且稳定可靠,测定结果对于大别山区茯苓菌种的选育扩繁以及仿野生栽培药材的种植有一定的参考意义。     

桃红四物汤对人脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制

目的:通过建立糖氧剥夺(OGD)诱导的人脑微血管内皮细胞(h-BMECs)损伤模型,观察桃红四物汤对细胞的保护作用及机制。方法:体外建立人脑微血管内皮细胞糖氧剥夺损伤模型,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤高、中、低质量浓度组(0.8,0.4,0.2 g·L-1)和阳性药尼莫地平组。噻唑蓝(MTT)比色法检测h-BMECs细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平、细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平。结果:桃红四物汤可显著提高拟缺血损伤的人脑微血管内皮细胞活性,降低LDH漏出率(P0.05,P0.01),改善细胞形态,降低MDA水平(P0.05),增强SOD活性(P0.05,P0.01)。增加内皮细胞VEGF和HIF-α蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:桃红四物汤对拟缺血损伤人脑微血管内皮细胞具有保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,通过HIF-α途径增强VEGF表达有关,显示中药组方可发挥整体调节的治疗优势。