乏氧通过腺苷A2受体调节人成熟树突状细胞骨桥蛋白的表达

目的 探讨乏氧调节人成熟树突状细胞(mDCs)骨桥蛋白(OPN)表达的机制.方法 免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,分别在常氧和乏氧条件下经GM-CSF及IL-4体外诱导生成mDCs;ELISA检测培养上清中OPN水平,RT-PCR检测OPN基因水平表达;使用腺苷替代物(NECA)、特异性A2R激动剂(CGS21680)和特异性A2R拮抗剂(SCH58261)探讨A2R在调节人mDCs表达OPN中发挥的作用;利用重组人TGF-β1(rhTGF-β1)及抗TGF-β1单克隆抗体(anti-TGF-β1Mcab)检测TGF-β1在这一过程中发挥的作用.结果 乏氧显著增加mDCs对OPN mRNA及OPN蛋白的表达,A2R拮抗剂抑制乏氧对OPN的诱导作用;常氧条件下,腺苷替代物(NECA)和A2R激动剂均能显著上调mDCs对OPN mRNA的表达及OPN蛋白的分泌,A2R拮抗剂可特异性抑制A2R激动剂对OPN的诱导;A2R参与调控免疫调节因子TGF-β1水平,通过rhTGF-β1和阻断抗体证实TGF-β1

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of hypoxia regulate osteopontin (OPN) secreting by mature dendritic cells (mDCs). Methods CD14 + cells were enriched using anti-CD14 immunomagnetic beads, for inducing to mDCs, CD14 + cells were cultured with GM-CSF and IL-4 in hypoxia or normoxiain vitro. Concentration of OPN and TGF-β1 in supernatant were detected by sandwich ELISA, OPN mRNA detected by RT-PCR. Approach regulating function of A2 R in expressing of OPN by mDCs by using NECA (surrogate of adenosine), A2R agonist (CGS21680), A2R antagonist (SCH58261) and investigate role of TGF-β1 in this process by using rhTGF-β1 and anti-TGF-β1 Ab. Results Hypoxia inreased the level of OPN and OPN mRNA in mDCs, and this effect could be reversed by A2 R antagonist. Under normoxia,both NECA and A2R agonist (CGS21680) could upregulate the level of OPN and OPN mRNA in mDCs significantly, but this positive effect could be reversed by A2 R antagonist. A2 R played a role in regulating TGF-β1, and confirmed TGF-β1 involved in regulation of OPN by using rhTGF-β1 and anti-TGF-β1 Ab. Conclusion High adenosine induce the generation of TGF-β1 through the A2R on mDCs, and then TGF-β1 raise the OPN secreting by mDCs.     

hCG对HTR8 SVneo滋养层细胞系MMP 2表达的影响与调控机制

目的探讨绒毛膜促性腺激素（hCG）对滋养层细胞系HTR8 SVneo侵袭活性的影响及其可能的调控机制。方法将培养的HTR8 SVneo细胞根据处理因素分为对照组、低浓度hCG（10?IU/mL）刺激组、高浓度hCG（100?IU/mL）刺激组,再将HTR8 SVneo细胞分为对照组、hCG（100?IU/mL）刺激组、DPCPX(A1R特异性阻断剂）+hCG（100IU/mL）联合刺激组。采用RT PCR检测各组HTR8 SVneo细胞基质金属蛋白酶 2（MMP 2）的表达变化,明胶酶谱检测各组HTR8 SVneo细胞MMP 2蛋白水平的分泌变化。 结果高浓度hCG（100?IU/mL）较低浓度hCG（10?IU/mL）刺激后的HTR8 SVneo细胞MMP 2的表达与分泌均上升（P<均0.05）;腺苷受体A1R的表达同时升高（P<0.05）。阻断A1R的作用通路后,MMP 2的表达与分泌均下降（P均<0.05）。 结论随着hCG浓度的升高, HTR8 SVneo细胞的侵袭性逐步增强,其调控机制为通过促进A1R的表达而使MMP 2的分泌升高。     

SELDI-TOF-MS在细胞信号转导通路研究中的应用进展

真核细胞的一个重要特征是具有复杂的信号转导系统.细胞通过其膜表面或胞内具有感受器样效应的蛋白与相应的信号分子结合而发挥信号转导子作用,调控细胞的增殖与分化[1].由于细胞信号转导通路错综复杂,传统的研究技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳、抗体免疫沉淀、RNA干扰等无法满足大规模的检测和鉴定信号传递过程中差异表达的信号分子及关键蛋白的磷酸化.     

雌、孕激素通过腺苷A_(2B)R通路调节JEG-3绒癌细胞系上调MMP-2的表达

目的:观察雌、孕激素对人绒癌细胞系JEG-3腺苷受体表达的影响,探讨它对JEG-3侵袭性的影响。方法:JEG-3细胞在含雌、孕激素环境中培养24h,设MRS1706(A2BR阻断剂)干预组及空白对照组;用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-PCR技术检测JEG-3细胞腺苷受体mRNA水平。结果:RT-PCR结果显示,JEG-3细胞表达腺苷A1R、A2AR及A2BR3个亚型,未检测到A3R的表达;雌激素和(或)孕激素处理组A2BRmRNA含量显著高于对照组(P<0.05);明胶酶谱检测发现雌、孕激素联合处理显著上调JEG-3细胞MMP-2的分泌水平(P<0.05),但对MMP-9无显著影响;阻断A2BR信号途径显著下调JEG-3MMP-2表达,并能抑制雌、孕激素对MMP-2的上调效应(P<0.05)。结论:雌孕激素能改变JEG-3绒癌细胞腺苷受体的表达模式,呈A2BR优势表达,A2BR信号通路参与雌孕激素对JEG-3细胞侵袭性的调节。     

OPN在口腔扁平苔藓中的表达及作用初步研究

目的:检测骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在口腔扁平苔藓(Orallichen planus,OLP)局部粘膜和外周血中的表达水平,探索其在OLP免疫发病机制中的作用。方法:免疫组化法检测OPN在局部粘膜组织的表达;ELISA检测外周血清OPN和白细胞介素12(Interleukin-12,IL-12)的蛋白浓度;分离正常人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),分OPN刺激组和对照组,体外活化72小时,流式细胞学检测淋巴细胞的凋亡率。结果:OPN在OLP患者局部病变粘膜组织的表达较健康对照组明显增强(P0.01);OPN和IL-12在OLP患者血清中的浓度均明显高于健康对照组(P0.01),而且二者存在显著正相关(r2=0.6585,P0.0001);体外活化淋巴细胞的凋亡率,OPN刺激组明显低于对照组(P0.05)。结论:OPN在OLP局部粘膜和外周血中的表达水平明显升高,并且可以抑制体外活化淋巴细胞的凋亡,提示OPN在OLP的发病发展中可能起着重要的促进作用。     

乏氧对人外周血NK细胞NKG2A、NKG2D及CD44表达的影响

目的： 观察乏氧微环境对人外周血自然杀伤细胞(NK)表面自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)及CD44分子表达的影响,探讨乏氧抑制NK细胞杀伤活性的分子机制。方法: 采用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞（PBMC）,贴壁去除单核细胞获得外周血淋巴细胞（PBL）,分别置常氧（21％O2）、乏氧（1％O2）以及有或无人重组白细胞介素2(rhIL-2)（1×106 U/L）刺激条件下培养16 h,流式细胞术（FCM）检测不同 NK细胞亚群 NKG2A、NKG2D以及CD44分子的表达。结果: 常氧条件,人外周血CD3-CD56+NK细胞NKG2A、NKG2D表达的阳性率分别为16.16%和78.45%,乏氧条件下二者表达的阳性率分别为15.16%和71.08%;rhIL-2上调NKG2A和NKG2D的表达,乏氧不影响 rhIL-2对NKG2D、 NKG2A的上调作用;rhIL-2显著上调NK细胞CD44的表达,乏氧抑制CD44的表达（P<0.05）。结论: 乏氧下调外周血NK细胞表面受体NKG2D及CD44的表达,但对NKG2A的表达无显著影响。由此提示,NKG2D及CD44分子可能在乏氧引起的NK细胞杀伤活性抑制中具有重要作用。     

骨髓来源免疫细胞对肿瘤血管生成的调节及临床应用研究进展

 近年来研究发现髓系细胞在肿瘤血管生成中发挥关键的调控作用。髓系细胞可以通过多种途径促进血管生成,包括分泌VEGF及不依赖于VEGF的方式,后者参与介导了抗血管生成治疗中肿瘤抵抗性的形成。此外,髓系细胞还限制了放化疗的治疗效果,促进复发。最后,本文初步探讨了其临床应用前景。     

妊娠早期人外周血及蜕膜局部单核细胞异质性分析

目的    分析早孕妇女外周血及蜕膜局部CD14+CD16+/CD14+CD16-单核细胞各亚群的分布,并初步探讨其临床意义。方法    随机抽取健康早孕者及健康未孕者外周血,取人工流产术获得的健康早孕妇女新鲜蜕膜组织,采用机械研磨及密度梯度离心法分离单个核细胞;流式细胞术检测上述样本CD14+CD16+/CD14+CD16-单核细胞各亚群的分布。结果   与健康未孕者比较,早孕妇女外周血CD14+CD16-细胞阳性率显著降低（P＜0.01）,早孕蜕膜组织中CD14+CD16+细胞亚群为CD14+细胞的主要群体,阳性率为(69.13±7.73) %,显著高于外周血中该亚群（11.50±3.7）%的比例。结论    早孕期间母体CD14+CD16+细胞亚群成为CD14+细胞中的主群体,提示CD14+CD16+细胞亚群在妊娠期间免疫系统TH-2优势应答的形成中可能起重要作用。     

低氧对人外周血T淋巴细胞CCR7表达及其生存活性的影响

目的 观察低氧微环境对人外周血T细胞生存活性及其CCR7表达的影响.方法 采用密度梯度离心和尼龙毛法分离健康捐献者外周血单个核细胞(PBMC)中的T淋巴细胞,分别置常氧(21%O2)和低氧(1)环境培养16 h.倒置显微镜观察T细胞形态,流式细胞术检测T淋巴细胞凋亡率及其CD 4和CD 8 T细胞亚群表面CCR7的表达.结果 常氧与低氧环境下T淋巴细胞的形态无明显差异.低氧环境下T细胞凋亡率12.82%±1.36%,明显高于常氧环境下的2.56%±0.98%;P＜0.05.低氧与常氧环境下CD 4 T细胞表面CCR7平均荧光强度分别为53.50±8.78,71.63±8.50;CD 8T细胞表面CCR7平均荧光强度分别为126.46±11.74,175.84±10.90,P均＜0.05.结论 低氧微环境可下调人外周血CD 4与CD 8 T细胞CCR7的表达,加速T细胞凋亡.     

罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭的影响

目的 观察罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭性的影响。方法 将体外培养的MDA-MB-231细胞分为实验组和对照组。实验组细胞用不同浓度罗勒多糖（100、300μg/mL）处理,对照组不加任何刺激因子。Transwell小室检测细胞侵袭能力,RT-PCR、Western blotting方法检测与侵袭相关的基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）的表达。结果 ①罗勒多糖可抑制MDA-MB-231细胞的侵袭力（P<0.01）;②罗勒多糖抑制MT1-MMP分子的mRNA表达（P<0.05）及下调其蛋白表达水平。③罗勒多糖对MMP-2及MMP-9分子的mRNA表达无影响。结论 罗勒多糖可通过下调MT1-MMP的表达抑制MDA-MB-231细胞的侵袭。