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1.
以地高辛甙元随机引物法标记HBV-DNA探针,以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织,同时以ELISA法检测血清HBeAg、HBcAb。结果:血清NBeAg阳性率27%(10/37),血清HBV-DNA检出率57.1%(20/35),两者有显著性差异。血清HBcAb阳性率78.4%(29/37),肝组织HBV-DNA检出率83.8%(31/37),两者无显著性差异。血清与肝组织HBV-DNA检出率有显著性差异。提示:血清HBV-DNA检测是较HBeAg更为准确客观反映血液带毒状况的指标。而准确反映肝脏带毒状况的指标是肝组织HBV-DNA检测。当HBeAg阴转,血清HBV-DNA阴性而肝组织HBV-DNA阳性时,需注意肝硬化及肝癌的发生。 相似文献
2.
HBV DNA及HBxDNA亚片段在肝癌细胞内的整合及作用 总被引:13,自引:0,他引:13
为探讨HBVDNA及其亚基因片段HBxDN在肝细胞肝癌(HCC)中整合特点用机制,制备了地高辛标记的3.2kbHBVDNA全基因及0.59kbHBVDNA/BamHI,BglⅡBHxDNA亚基因探针。点杂交、原位杂交及Southern杂交检测HBVDNA的存在情况,筛选HBVDNA纯整合标本,以HBxDNA探针检测HBxDNA在HCC染色体的整合。结果显示HBVDNA在肝细胞内以核型为主(70%) 相似文献
3.
目的用分子克隆技术构建肝癌组织特异性N-rascDNA正义与反义表达载体.方法用BamHI酶切携带目的基因的质粒pZIP-NeoSV(X)1,获得1.06kbN-rascDNA;同时以BamHI将载体pEBAF线性化,并行去磷酸化修饰,用T4DNA连接酶将两者连接,转化感受态细菌DH5α.先以酶切和随机引物法标记的N-rascDNA探针进行菌落原位杂交筛选阳性重组克隆,再以PvuⅡ酶切鉴定插入方向,同时进行DNA测序和同源性分析.结果成功构建肝癌组织特异性正义与反义表达载体pEBAF/s-N-ras和pEBAF/as-N-ras.结论成功构建的N-rascDNA正/反义表达载体,为原发性肝癌的发生机理和基因治疗研究奠定良好的基础. 相似文献
4.
应用分子杂交及免疫组化方法检测56例HCC组织内的抑癌基因p16。结果显示,HCC标本中p16蛋白在癌细胞内表达的阳性率为375%(21/56),而p16DNA斑点杂交的阳性率为5536%(31/56)。Southern转膜杂交证实,125%(7/56)HCC标本存在p16的甲基化变异,4464%(25/56)p16基因缺失。提示HCC发生、发展过程中存在p16基因的缺失和甲基化变异 相似文献
5.
基因工程学是一门新兴的前沿科学,已成为二十一世纪生命科学中一门重要的学科,基因工程技术已渗透到医学、工业、农业等多种生命科学领域。现已利用基因工程的技术对二十多种疾病,七百多个病人进行基因治疗;已使许多疾病的发病机理得以阐明,使临床上不少疾病的诊断和治疗有了长足的进步,基因工程药物的生产和临床应用,不仅推动了医学的发展,而且带动了医药工业的腾飞;转基因植物的成功大大提高了农作物的产量并使我们的世界更加灿烂;克隆羊的出现震惊了全世界。二十一世纪,基因工程将发挥更大的作用。 相似文献
6.
IL-10对大鼠佐剂性关节炎的治疗及免疫机理探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
形成佐剂性关节炎(AA)的动物模型,研究IL-10的抗炎作用及其机理。结果表明,经腹腔注射IL-10后能改善AA大鼠病情,用IL-10治疗取得显效后,AA大鼠血清及关节液内炎症细胞因子IL-1,6,8,TNF水平均明显下降,腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞分泌细胞因子的能力均受到抑制。表明IL-10是通过抑制炎症细胞因子的产生而发挥治疗作用的。此项研究为用IL-10治疗人风湿性关节炎(RA)等难治性炎症性疾病提供了理论和实验依据 相似文献
7.
目的:研究HBV感染对树突状细胞功能的影响,探讨慢性乙型肝炎患者免疫耐受发生的机制。方法:利用脂质体转染的方法,以携载HBV全基因的真核表达载体pcDNA3-HBV及对照空载体pcDNA3质粒DNA分别转染小鼠骨髓细胞,以细胞因子GM-CSF、IL-4及TNF-α诱导培养树突状细胞,RT-PCR检测转染后HBV PreS1 mRNA的表达。流式细胞术检测转染前后树突状细胞表面分子CD80的表达,3HTdR掺入法观察其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,流式细胞术进一步检测NF-κB RelA蛋白的表达。结果:pcDNA3-HBV瞬时转染后树突状细胞CD80表达降低,其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力下降,NF-κB RelA蛋白表达显著减少。结论: HBV可抑制树突状细胞的分化成熟,降低其刺激T淋巴细胞增殖的功能,这可能是慢性乙型肝炎患者免疫耐受的机制之一。 相似文献
8.
为探讨内皮细胞作为抗原提呈细胞(APCs)的功能,培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察了其在某些因素影响下,分泌白细胞介素1(IL-1)的情况。结果表明,细菌脂多糖(LPS)可诱导HUVEC释放IL-1,增加LPS的浓度或延长其诱导时间,可提高IL-1的释放活性。γ干扰素(IFNγ)可协同LPS促进HUVEC释放IL-1。协同诱导的动力学表明:IFNγ对LPS诱导HUVEC释放IL-18h之前无明显效应,24h后,协同促进效应明显提高。 相似文献
9.
目的:构建反义RNA表达载体pcDNA3.1-as-myc,建立新型的c-myc反义RNA肝癌靶向性转移系统,研究瞬时表达对HepG2.2.15细胞的体外生物学效应。方法:XbaI和HindIII双酶切携带目的基因的质粒pcMYC和pcDNA3.1(-)真核表达载体,T4DNA连接酶连接,构建c-myc反义RNA表达载体。合成针对表皮生长因子受体(EGFR)的相应16肽GE7和流感病毒血凝素功能域的HA20寡肽,并与多聚赖氨酸连接,连接物与c-myc的反义RNA表达载体混合,构建新型c-myc反义RNA肝癌靶向性转移系统,即四元复合体。结果:成功构建反义RNA表达载体pcDNA3.1-as-myc,建立了as-myc四元复合体基因转移系统,经HepG2.2.15细胞系瞬时转染,证实c-myc蛋白的表达下降。结论:构建的反义表达载体pcDNA3.1-as-myc具有阻断c-myc表达的效应。 相似文献
10.
将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由pBR322-2HBV/EcoRⅠ酶切片段(3.2kb)制备HBV-DNA探针及由HBV/BamHⅠ、BglⅡ酶切片段(0.59kb)制备HBx-DNA探针。将Dig-HBVDNA探针用斑点杂交、Southern转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌HBV-DNA整合型标本,进而用Dig-HBxDNA探针检测HBV-DNA纯整合型肝细胞性肝癌中HBx的存在情况。结果显示,75%(33/44)的肝癌DNA中有HBV-DNA存在,其中,以纯整合型方式存在的为63.6%(21/33),混合型为36.4%(12/33),无游离型。纯整合型HBV-DNA片段中,HBx-DNA阳性率为90.5%(19/21)。提示HBV在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用,HBV-DNA可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上,其中以HBx基因的整合为主。 相似文献