头花蓼对幽门螺杆菌粘附定植的影响

目的观察头花蓼水提物对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori)粘附定植的影响。方法采用尿素酶活性比色法定量检测头花蓼水提物作用前后幽门螺杆菌尿素酶活性的影响;运用半固体布氏琼脂平板法检测不同浓度头花蓼对幽门螺杆菌鞭毛运动的影响;利用细胞爬片革兰染色观察不同浓度头花蓼作用后幽门螺杆菌在GES-1细胞表面粘附的变化并计算各组抑制率;采用Real-time PCR 技术检测头花蓼作用前后相关基因ureB、ureE、ureF、flaA、flaB、babA、alpA、alpB的mRNA转录水平。结果头花蓼水提物对幽门螺杆菌尿素酶活性具有抑制作用,抑制率为44.90±0.289。头花蓼浓度为1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC分别作用后幽门螺杆菌菌膜晕圈直径显著小于对照组, 分别为(5.67±0.55)mm ,(8.5±0.50)mm ,(11.67±1.53)mm,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度头花蓼水提物均能抑制细菌粘附胃上皮细胞,各浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。头花蓼作用后,与对照组比较,下调了尿素酶结构基因ureB,尿素酶活性基因ureE、ureF、鞭毛相关基因flaB、flaA以及粘附素基因babA、alpA、alpB mRNA的转录水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论头花蓼对幽门螺杆菌具有明显的抑制作用,是通过抑制幽门螺杆菌尿素酶活性,减缓幽门螺杆菌的鞭毛动力,影响幽门螺杆菌对胃粘膜上皮细胞的粘附等方面发挥其抑菌作用。     

幽门螺杆菌rdxA和cagA基因突变与甲硝唑耐药的相关性研究

目的:研究幽门螺杆菌(Hp)编码基因(rdxA)和细胞毒素相关基因A(cagA)突变与Hp对甲硝唑耐药的关系。方法:从贵阳某医院60例消化内科患者胃黏膜标本中分离出Hp临床分离株11株,体外微需氧条件下培养,用E试验(E-test)检测各株Hp临床分离株对甲硝唑的最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链式反应(PCR)方法扩增Hp的rdxA和cagA基因并测序,再将耐药株与标准株Hp26695PCR产物进行碱基序列分析。结果:11株Hp临床分离株的MIC均≥256μg·mL-1,rdxA和cagA基因的扩增率均为100%。与标准株Hp26695相应基因序列对比,11株临床分离株的rdxA基因同源性为95%～98%,cagA基因同源性低于94%,rdxA、cagA基因分别有4、10个规律性突变点。结论:贵阳地区Hp对甲硝唑的耐药性可能与rdxA和cagA基因突变有关,其中高耐药性可能与cagA基因有关。     

家蝇新型抗菌肽抗肿瘤活性研究

目的 研究家蝇抗菌肽17（AMP-17）和家蝇天蚕素18（C18）抗菌肽对肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性。方法 将人白血病细胞（K562、Hel）、人结肠癌细胞（DLD-1、Caco2）、人肝癌细胞（HepG2）、人喉癌细胞（HEP-2）、人肺癌细胞（A549）分为正常组（只加完全培养基）、阳性对照组(9.38,18.75,37.50,75.00和150.00μg·mL^-1盐酸阿霉素)、AMP-17实验组(60,80,100,120和140μg·mL^-1 AMP-17)和C18实验组(10,20,40,60和80μg·mL^-1 C18)。用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定肿瘤细胞增殖的抑制能力,计算半抑制浓度(IC₅₀);用CCK-8法检测AMP-17和C18对人正常单核细胞（THP-1）的细胞毒性;用微量分光光度法测定AMP-17和C18对小鼠红细胞的半数溶血值(HC₅₀)。结果 AMP-17、C18均可抑制肿瘤细胞增殖,AMP-17对肿瘤细胞K562、Hel、DLD-1、C...     

幽门螺杆菌耐药情况分析

目的调查贵阳医学院附属医院上消化道疾病患者中分离出的幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）对常用抗生素的耐药情况,为临床选用抗生素治疗Hp提供实验室依据。方法收集2012年1月～2013年1月贵阳医学院附属医院胃镜室患者胃黏膜标本580例,微需氧环境培养5～7 d,对临床Hp菌株采用E-test法检测对5种常用抗生素（甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星、四环素）的耐药情况。结果 580例胃黏膜标本其阳性检出率为57.6%（334/580）,污染例数为21株;经分离培养得到的313株Hp对甲硝唑、左氧氟沙星、四环素、阿莫西林及克拉霉素的耐药率分别为87.2%、46.9%、23.4%、25.5%和8.5%。结论贵阳医学院附属医院幽门螺杆菌对甲硝唑的耐药性较高,对克拉霉素的敏感性较好。     

头花蓼对幽门螺杆菌刺激骨髓来源巨噬细胞炎症反应的作用及机制

目的 探讨头花蓼(PC)对幽门螺杆菌(H.pylori)刺激骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)炎症反应的作用及机制.方法 室温复苏H.pylori SS2000菌株,培养48 h并鉴定,将H.pylori与BMDMs共孵育,按照不同感染复数(MOI,细菌数:细胞数)分为空白、25:1、50:1、100:1、200:1及400:1组,并培养48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组BMDMs细胞活力;并于3、6、12及24 h收集细胞及上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同MOI及刺激时间下白细胞介素-1β(IL-1β)IL-18的含量;取BMDMs分为空白组[不加H.pylori,加改良依格尔(DMEM)培养液]、模型组(加H.pylori,DMEM培养液)及PC治疗组(加H.pylori,DMEM培养液,0.08μg/L PC),采用Western blot检测各组BMDMs细胞质与细胞核中核因子κB单体p65(NF-κB/p65)的表达及细胞裂解液中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、IL-1β前体(Pro-IL-1β)及细胞上清液中IL-1β蛋白的表达.结果 MOI高于100:1时,细胞抑制率增高,BMDMs的数量减少(P<0.05);模型组BMDMs多数变圆,表面不光滑,颗粒物质明显增多;MOI为100:1且作用12 h时,BMDMs中IL-1β及IL-18含量达到最高;模型组BMDMs细胞质内NF-κB/p65蛋白表达较空白组减少、细胞核内NF-κB/p65蛋白表达较空白组升高(P<0.05),PC治疗组BMDMs胞内NF-κB/p65蛋白表达较模型组升高、核内NF-κB/p65蛋白表达较模型组减少(P<0.05);模型组BMDMs中NLRP3、IL-1β蛋白表达较空白组升高(P<0.05),PC治疗组BMDMs中NLRP3、IL-1β蛋白表达较模型组减少(P<0.05);各组BMDMs中Pro-IL-1β 蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 PC可改善H.pylori引起的BMDMs细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路的激活有关.     

中药头花蓼对幽门螺杆菌CagA及VacA表达的影响

目的:观察中药头花蓼对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hpylori)细胞毒素相关蛋白(cytotoxin-associated protein,CagA)和空泡毒素(vacuolating cytotoxin,VacA)表达的影响.方法:HpyloriATCC700392接种于含头花蓼的哥伦比亚血平板上为实验组,同批未经药物作用的H.pyloriATCC700392为对照组,分别提取两组细菌的RNA和蛋白,用Real-time PCR定量检测头花蓼作用后cagA和vacA的mRNA表达,ELISA检测蛋白表达量.结果:经头花蓼作用的实验组与对照组相比,H.pylori的CagA和VacA蛋白表达水平分别降低了36.4％、55.1％(P＜0.05),cagA和vacA的mRNA表达水平分别降低了69％、51％ (P＜0.05).结论:头花蓼可能通过下调ca-gA和vacA的mRNA和蛋白的表达来发挥其对H.pylori的抑制作用.     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药与rdxA基因分型及cagA基因的关系

目的: 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori H. pylori)甲硝唑耐药菌株相关基因的突变与甲硝唑耐药性的关系。方法: 将贵阳医学院附属医院胃镜室分离H. pylori采用E-Test法对甲硝唑进行药敏试验后,PCR扩增rdxA、frxA、fdxB和cagA并对该基因进行测序。采用限制性内切酶片段长度多态性分型方法(RFLP)对rdxA基因进行分型。结果: 313株H. pylori对甲硝唑耐药率为87.2%。其与NCBI已登录的国际标准菌株H. pylori 26695相应基因序列比对,cagA基因阳性率为100%, cagA基因在某些位点存在共同突变,还存在大量其他位点的随机散在突变, rdxA基因除了存在4个位点共同突变外,还有其他位点的散在突变。rdxA基因可分为两型,Ⅰ型与Ⅱ型的比例为293:20,Ⅰ型耐药率为86.3%,Ⅱ型耐药率为100%。同时发现fdxB、frxA基因突变呈现出一定的规律性,具有碱基替换、插入和缺失3种类型的突变。结论: 我院幽门螺杆菌甲硝唑耐药率较高,rdxA基因以Ⅰ型为主,而rdxA基因Ⅱ型的H. pylori均产生甲硝唑耐药,与H. pylori甲硝唑耐药性密切相关。rdxA基因突变及cagA基因阳性是耐甲硝唑的主要原因。     

幽门螺杆菌对小鼠胃黏膜G、D细胞及胃泌素和生长抑素的影响

目的:研究幽门螺杆菌(Hp)感染对胃黏膜G、D细胞及胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)表达的影响。方法:Hp标准菌SS2000菌液灌胃C57BL/6小鼠构建Hp感染小鼠慢性胃炎动物模型,免疫组化染色观察小鼠胃黏膜G、D细胞的改变,图像分析软件(Image-Pro-Plus,IPP)分析GAS、SS阳性灰度值,Real time-PCR检测小鼠胃窦黏膜GAS mRNA和SS mRNA相对表达量。结果:与空白组比较,模型组G细胞数目、GAS灰度值、GAS m RNA表达水平显著增高(P<0.05),D细胞数目、SS灰度值、SS mRNA表达水平无明显改变。结论:Hp感染可引起胃黏膜GAS mRNA表达上调,胃窦黏膜G细胞增多,促进GAS分泌,可能是胃黏膜病理改变加重的原因。     

外显子组测序技术对疑似鱼鳞病患儿进行分子诊断的方法学研究

外显子组测序是利用序列捕获技术将全基因组外显子区域DNA捕捉并富集后进行高通量测序的基因组分析方法,由于其具有对常见和罕见变异的高灵敏度,能发现外显子区绝大部分疾病相关变异以及仅需对约1%的基因组进行测序等优点,使外显子组测序成为鉴定孟德尔遗传病致病基因最有效的策略,也被运用于复杂易感基因的研究和临床诊断中［１］。本研究针对1例临床上疑似鱼鳞病的患儿,通过外显子组测序实验,检测该患儿在遗传水平上携带的突变,为临床诊断和治疗提供相关信息,并探讨利用外显子组测序作为临床疑难杂症辅助治疗手段的可能性……