视网膜色素上皮细胞吞噬功能与信号转导系统的关系

视网膜色素变性(RP)是一种严重的致盲性眼病,其确切病因不明。除了遗传因素外,近年的研究表明,视网膜色素上皮(RPE)细胞吞噬功能异常是导致视觉功能障碍的主要原因。本文简单介绍视网膜色素上皮细胞特异性吞噬功能,详细分析了IP3、PKC、cAMP、cGMP、PTK及Ca2+对RPE细胞吞噬的调节作用,综述了RP发病机制中涉及RPE细胞吞噬功能与信号转导系统的研究进展。     

视网膜色素上皮细胞吞噬功能与MERTK-Ras-肌球蛋白通路关系的研究

目的：：研究视网膜色素上皮( retinal pigment epithelium, RPE)细胞吞噬功能与 MERTK 受体及其下游信号通路Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白的关系。方法：用视细胞外节膜盘( rod outer segments,ROS)于37℃孵育离体培养的3~5代C57小鼠RPE细胞,在孵育0、30、60、120、180、240 min终止吞噬反应。双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学;以MERTK及Ras抗体、磷酸化MEK及MLCK抗体应用Western-Blot方法检测不同孵育时间(30、60、120、180 min ) MERTK、Ras、MEK 及 MLCK的激活状态;以瞬时转染质粒方法抑制Ras及MERTK基因表达后,再次以 Western-Blot 方法检测对应时间MERTK-Ras通路激活状态及吞噬功能的变化。结果：C57小鼠RPE细胞吞入ROS发生在孵育30min,并在3h达到饱和。在吞噬过程中,随着孵育时间的延长, RPE细胞MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表达水平不断增多(与对照组相比,P<0.05)。 Ras及MERTK干扰后的RPE细胞与ROS共孵育(30、60、120、180min)的全过程中,MERTK、Ras、MEK 和 MLCK 的蛋白表达及 ROS 的吞入数量始终维持较低水平,仅在孵育180 min 见到少量ROS吞入;与未转染 RPE 细胞相比, siRas-RPE 细胞及siMERTK-RPE细胞与ROS共孵育120、180min时,MERTK、Ras、MEK及MLCK的蛋白表达量均明显减少(P<0.05)。结论：Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白通路是鼠RPE细胞吞噬过程中MERTK受体激活的下游信号通路。     

视网膜色素上皮细胞吞噬功能与信号转导系统的关系

视网膜色素变性(RP)是一种严重的致盲性眼病，其确切病因不明。除了遗传因素外，近年的研究表明，视网膜色素上皮(RPE)细胞吞噬功能异常是导致视觉功能障碍的主要原因。本简单介绍视网膜色素上皮细胞特异性吞噬功能，详细分析了IR、PKC、cAMP、cGMP、PTK及Ca^2 对RPE细胞吞噬的调节作用，综述了RP发病机制中涉及RPE细胞吞噬功能与信号转导系统的研究进展。     

雷帕霉素抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的研究雷帕霉素对大鼠角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。方法建立大鼠穿透性角膜移植动物模型,以SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,分为4组,手术当日起分别腹腔注射0.5%羧甲基纤维素、雷帕霉素(2.5mg·kg-1·d-1)、环孢霉素A(10mg·kg-1·d-1)、雷帕霉素 环孢霉素A(RPM1.5mg·kg-1·d-1 CsA5mg·kg-1·d-1),共12d。对角膜植片进行临床观察,以混浊、水肿和新生血管3项指标作为临床评估标准。结果4组角膜植片的存活时间分别为11.29d±1.50d、20.57d±2.37d、20.86d±2·12d及22.57d±1.99d,各用药组与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论雷帕霉素能显著延长角膜植片的存活时间,对大鼠穿透性角膜移植排斥反应具有抑制作用,联合用药具有协同作用。     

基于PubMed数据库的角膜移植手术文献计量分析

目的:了解角膜移植手术研究文献的分布规律和国际研究趋势。方法:利用美国国立图书馆的PubMed数据库为数据源,对2000/2012年所收录的角膜移植手术相关文献的年代分布、国家和地区、发文语种及作者情况等进行统计分析,并利用书目共现分析系统(BICOMB)、SPSS19.0分析软件对高频主题词进行聚类分析。结果:2000/2012年累计收录角膜移植手术相关研究文献3363篇,文献数据逐渐增多;研究文献以英语为主,我国文献量位列第4;统计出高频主题词50个,聚类分析显示高频主题词主要聚类于3个类别,分别为角膜内皮移植手术、角膜移植手术后并发症治疗、角膜移植手术后的免疫排斥反应。结论:角膜移植手术研究文献呈增长趋势,研究热点为角膜内皮移植手术。     

人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C关系的研究

目的 探讨人视网膜色素上皮(hRPE)细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C(PKC)的相互作用.方法 对照实验研究.采用1×1010个/L视细胞外节膜盘(ROS),于37℃下孵育体外培养的正常hRPE细胞,在孵育的不同时间终止吞噬反应.用双重荧光标记法,检测hRPE细胞的吞噬能力.用液闪记数γ-32P放射活性法,检测不同吞噬时间点的PKC活性.以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测MERTK基因的mRNA水平变化情况.以PKC激活剂和拮抗剂处理hRPE细胞后,再行MERTK基因mRNA表达水平检测.采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,实验组与对照组hRPE细胞吞噬ROS能力、PKC活性比较采用Student't检验,MERTK基因mRNA表达水平比较采用单因素方差分析.结果 ROS孵育后的hRPE细胞结合及吞入ROS的数量逐渐增多,至24 h时,hRPE细胞吞噬ROS的数量达到高峰,为(2.85±0.11)×106个,与对照组(0.00±0.00)×106个比较,差异有统计学意义(t=47.64,P＜0.05).ROS孵育后的hRPE细胞胞质PKC活性降低,至24 h时,PKC活性降至最低,细胞质的PKC活性为(151.13±17.67)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(152.45±64.83)nmol·g-1·min-1;对照组细胞质的PKC活性为(329.63±14.26)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(467.67±68.87)nmol·g-1·min-1;两组间PKC活性比较,差异有统计学意义(细胞质:t=89.66,P＜0.05;细胞膜t=10.31,P＜0.05).在hRPE细胞与ROS不同时段的孵育过程中,MERTK基因mRNA均呈现出高表达状态,孵育至90 min时,MERTK基因mRNA表达灰度值为1.8853±0.0077,与对照组灰度值0.7246±0.0062相比,差异有统计学意义(F=16 060.2167,P＜0.05);孵育至24 h时,MERTK基因mRNA表达灰度值为0.5946±0.0082,与对照组灰度值0.3343±0.0064比较,差异有统计学意义(F=919.8421,P＜0.05).上调hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,短时与长时孵育的MERTK基因mRNA表达灰度值均低于对照组(短时孵育:F=17 142.2331,长时孵育:F=1886.4614;P＜0.05).拮抗hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,30 min内MERTK基因mRNA表达灰度值为4.4670±0.0092至5.7034±0.0095范围,均高于对照组灰度值0. 9117±0.0021(F=199 012.9138,P＜0.05).结论 PKC的低活性和MERTK基因mRNA的高表达可促进hRPE细胞吞噬ROS的过程.PKC活性和MERTK基因mRNA表达水平作为上游调控信号,通过两条不同的信号通路,以负相关的方式调节hRPE细胞吞噬ROS的功能.     

重症监护室患者暴露性角膜炎防治方法的比较

目的:比较分析三种眼部治疗方法(人工泪液、湿房和敷贴)对于重症监护患者发生暴露性角膜炎的有效性。方法:将重症监护室(ICU)患者随机分为3组:人工泪液组、湿房组和敷贴组。人工泪液组患者每2h行2滴羧甲基纤维素钠眼药水点眼。湿房组和敷贴组患者每12h更换湿房和敷贴一次或污染及损坏时更换。每天进行角膜荧光素染色观察角膜状态。结果:在敷贴组28例患者中,无暴露性角膜炎发生;湿房组27例患者中,1例(4%)患者发生暴露性角膜炎;而人工泪液组29例患者中,8例(28%)发生了暴露性角膜炎。暴露性角膜炎的发生率,人工泪液组与湿房组(P=0.02)和敷贴组(P=0.003)比较有显著性差异。每日眼部护理所需时间在人工泪液组、湿房组和敷贴组分别是26.69±2.39,35.33±2.63和7.48±0.87min;与人工泪液组和湿房组相比较,敷贴组更省时。结论:在重症监护患者暴露性角膜炎的防治上,敷贴方法更有效、更省时。